狂犬病及疫苗

狂犬病及疫苗1狂犬病及疫苗5/9/2024狂犬病狂犬病又称恐水症（hydrophobia）：是狂犬病病毒引起的一种人畜共患的中枢神经系统急性传染病。多见于狗、狼、猫等食肉动物，人多因被病兽咬伤而感染。死亡率几乎100%。2狂犬病及疫苗5/9/2024狂犬病毒狂犬病病毒(Rabiesvirus)是一种嗜神经性病毒。属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)、狂犬病毒属(Lyssavirus)。病原学3狂犬病及疫苗5/9/2024病原学A.病毒的子弹状外形；B.蜂窝状核衣壳（RNP）；C.病毒外表面双层脂质突起4狂犬病及疫苗5/9/2024狂犬病毒形态子弹状，一端圆形，另一端平凹，宽75-80nm，长140-180nm。

5狂犬病及疫苗5/9/20246狂犬病及疫苗5/9/2024核酸：-ssRNA。衣壳：螺旋对称排列。包膜：M2蛋白（内层）；脂蛋白（主要成分）；刺突：与病毒的感染性、血凝性和毒力等相关。结构7狂犬病及疫苗5/9/2024结构病毒主要编码5种蛋白：糖蛋白（G）、核蛋白（N）、聚合酶（L）、磷蛋白（NS）和膜蛋白（M）。糖蛋白能与乙酰胆碱受体结合，决定了病毒具有嗜神经性，产生中和抗体有保护作用；核蛋白抗原，是荧光免疫法检测的靶抗原，有助于临床诊断。8狂犬病及疫苗5/9/2024

狂犬病病毒的动物感染范围较广，主要在野生动物及家畜中自然感染与传播。在易感动物或人的中枢神经细胞、主要是大脑海马回的锥体细胞中增殖时，可以在胞质内形成一个或多个、圆形或椭圆形、直径为20nm～30nm的嗜酸性包涵体，称内基小体（Negribody）。通过检查动物或人脑组织标本中的内基小体，可以辅助诊断狂犬病。

培养特性9狂犬病及疫苗5/9/2024Negribodyofrabiesvirusininfectedneuron(intra-cytoplasmic)10狂犬病及疫苗5/9/2024内基小体为圆形或卵圆形嗜酸性小体，大小为1－20um，一般在5－10um之间，见于胞浆内任何部位或树突中，可有一个或多个，其形状与所在部位有关。包涵体所在细胞可无明显病变，或可仅有尼氏体减少。11狂犬病及疫苗5/9/2024病原学

来源于世界各地的狂犬病病毒分离株的抗原性不同。根据病毒表面糖蛋白G的抗原性差异，狂犬病病毒可分为4个血清型。狂犬病病毒的主要抗原包括:

糖蛋白G:病毒表面，刺激机体产生中和抗体、血凝抑制抗体和细胞免疫应答；

核蛋白N：病毒核心，属特异性抗原，能够以核蛋白(RNP)的形式诱生保护性的细胞免疫应答，但刺激机体不能产生保护性抗体。抗原性12狂犬病及疫苗5/9/2024狂犬病毒的血清型

1、血清1型：典型的狂犬病毒株，犬类传播。2、血清2型：Lagos蝙蝠株，分离自尼日利亚和中非共和国。3、血清3型：Mokola病毒株，分离自尼日利亚田鼠4、血清4型：Duvenhage病毒株，分离自南非狂犬病人5、血清2型：EBL1蝙蝠株，分离自乌克兰蝙蝠6、血清2型：未定型株，分离自乌克兰蝙蝠13狂犬病及疫苗5/9/2024病原学野毒株（wildstrain）或街毒株（streetstrain）:从自然感染的动物体内分离到的病毒。固定毒株（fixedstrain）:将野毒株在家兔脑内连续传代后，病毒对家兔致病的潜伏期可以随传代次数的增加而逐渐缩短；传代至50代左右时，潜伏期可由原来的4周左右缩短为4天～6天；但继续进行传代，潜伏期不再缩短。这种变异的狂犬病病毒被称为固定毒株（fixedstrain）.

其重要特点:是对家兔的致病性增强，对人或犬的致病性明显减弱；并且从脑外途径对犬进行接种时，不能侵入脑神经组织引起狂犬病。

变异14狂犬病及疫苗5/9/2024病毒抵抗力不强。对热敏感，60℃经30min或100℃2min即可灭活。易被紫外线、甲醛、强酸、强碱、乙醇、乙醚等灭活。肥皂水、离子型或非离子型去垢剂亦有灭活作用。在冰冻干燥下可保存数年。

病原学抵抗力15狂犬病及疫苗5/9/2024传染源发展中国家主要传染源是病犬，由病犬传播者约占80～90%，其次为猫和狼。一般认为，动物发病前5天唾液中可含有病毒；发达国家野生动物如狐狸、食血蝙蝠、臭鼬和浣熊等逐渐成为重要传染源；无症状带毒的犬、猫等兽类亦有传染性；流行病学

16狂犬病及疫苗5/9/2024BATarmadillo17狂犬病及疫苗5/9/2024Catfoxraccoon

dog18狂犬病及疫苗5/9/2024传播途径被患病动物咬伤、抓伤，病毒自皮肤损伤处进入人体；粘膜也是病毒的重要侵入门户，如眼结合膜被病兽唾液沾污等；也可由染毒唾液污染外环境（石头、树枝等）后，再污染普通创面而传染。流行病学

19狂犬病及疫苗5/9/2024流行病学

易感人群人群普遍易感，兽医、动物饲养者与猎手尤易遭感染；接触家犬或野兽机会多的农村青壮年和儿童居多，男性多于女性。流行特征温血动物传染病，分布广泛，以家犬密度大的地方多见；全年发生，冬季发病率略低。

20狂犬病及疫苗5/9/20242006，1至2007，5

狂犬病发病情况图21狂犬病及疫苗5/9/20242002—2006狂犬病发病情况22狂犬病及疫苗5/9/2024发病机理人被病犬咬伤病毒随犬唾液经伤口进入人体（病毒在入侵部位的肌肉细胞中增殖）通过神经肌肉接头侵入周围神经细胞-细胞间传递形式神经节直至中枢神经系统（脑组织中病毒迅速增殖扩散）沿传出神经传至唾液腺及其他组织。23狂犬病及疫苗5/9/2024临床表现

潜伏期人被狂犬咬伤，发病率为30%～60%。咬伤后能否发病，与受伤部位、伤势程度及病畜唾液中的病毒量有关.

短的5日，长的达10余年，多数1～3个月；儿童、头面部咬伤、伤口深、扩创不彻底者潜伏期短；

24狂犬病及疫苗5/9/2024典型临床表现：前驱期

发热、头痛、乏力、周身不适等症状，对痛、声、光等刺激较敏感，并有咽喉紧缩感。约50～80%病人伤口部位及其附近有麻木或蚊走感；兴奋期或痉挛期

处于兴奋状态，如极度恐惧、烦燥，对水声、风等刺激非常敏感，易于引起发作性咽肌痉挛、呼吸困难等。部分患者出现特殊的恐水症状，在饮水、见水、流水声或谈及饮水时，可引起严重咽喉肌痉挛，称为“恐水症”（hydrophobia）。随后，部分病人出现精神失常、定向力障碍、幻觉、谵妄等。病程进展很快；麻痹期

痉挛减少或停止，出现弛缓性瘫痪，神志不清，最终因呼吸麻痹和循环衰竭而死亡。

25狂犬病及疫苗5/9/2024体液免疫：感染后机体产生中和抗体。有中和游离状态的病毒、阻断病毒进入神经细胞内的作用。接种疫苗所获得的防止发病效果可能与此有关。但抗体对已进入神经细胞内的病毒难以发挥作用。同时也可能产生免疫病理反应而加重病情。细胞免疫：杀伤性T淋巴细胞特异性地作用于病毒的蛋白抗原，引起病毒溶解；单核细胞产生的IFN和IL-2具有抑制病毒复制和抵抗病毒攻击的作用。免疫性26狂犬病及疫苗5/9/2024预防加强动物管理，控制传染源大力宣传养狗及其他野生动物的危害；野犬应尽量捕杀；家犬应严格进行登记和疫苗接种；狂犬或患狂犬病的野兽应立即击毙焚毁或深埋，严禁剥皮吃肉。27狂犬病及疫苗5/9/2024预防狂犬病暴露后预防（2006年10月卫生部发布《狂犬病暴露后处置工作规范（试行）》）28狂犬病及疫苗5/9/202429狂犬病及疫苗5/9/2024伤口处理立即用肥皂水、消毒剂或单用清水反复清洗伤口，时间不低于15分钟，伤口深时要用注射器灌注反复冲洗；然后用酒精反复消毒，最后涂上碘酒；伤口不止血、不包扎、不缝合；使用人抗狂犬病免疫球蛋白（HRIG）10IU/kg或马抗狂犬病免疫血清20IU/kg在伤口底部和周围行局部浸润注射；同时以相同剂量做臂部肌肉注射。必要时使用抗菌药物；伤口深时还要使用破伤风抗毒素。30狂犬病及疫苗5/9/2024预防接种

接种狂犬疫苗是预防发病的重要措施。即所谓的预防性治疗。由于狂犬病的潜伏期长，从被咬伤到发病一般经过几十天或几个月，在此期间尽早接种疫苗可免于发病。

严重咬伤者，除应给予高效价免疫血清进行被动免疫外，仍需要接种狂犬疫苗，可收到更佳效果。31狂犬病及疫苗5/9/2024疫苗注射暴露前预防：适用于高危人群如兽医、山洞探险者、相关实验人员、动物管理员，0、7、21天各2ml肌肉注射；2～3年加强注射一次；暴露后预防：咬伤后注射越早越好一般患者接种5次，0、3、7、14、30各接种一次；严重咬伤患者接种10次，前6天每日一针，10、14、30、90天各1针。1年内再次咬伤者，0、3天各接种一次；1～3年内再次咬伤，0、3、7各接种一次；超过3年，重新接种。注意疫苗储存在2～８℃。32狂犬病及疫苗5/9/2024疫苗的历史公元七世纪：印度的佛教徒以喝蛇毒的方式获得对毒蛇的免疫应为最早的预防免疫的记载；公元十世纪：据1932年在天津出版的《中国医学史》记载，中国已有种痘的记载，但无法考证；公元十六世纪：据1742出版的《医宗金鉴》记载，至少在

1695年中国已确有用干的天花痂粉吹鼻种痘、用棉花蘸天花痂粉塞鼻和健康小孩穿几天出天花小孩内衣等方式种痘免疫的记载.公元十八世纪：英国EdwardJenner接种牛痘预防天花33狂犬病及疫苗5/9/2024疫苗的历史公元十九世纪：七十年代法国LouisPasteur研究减毒鸡霍乱菌1885年LouisPasteur狂犬病疫苗的试验成功；公元十九世纪末:美国Salmon,Smith,法国Chamberlain和Roux分别研究的细菌疫苗:伤寒、霍乱和鼠疫菌苗；公元二十世纪：1927年上市的卡介苗，法国Calmette和Guerin从牛分离的结核菌通过牛胆汁传代获得的减毒株制成的疫苗，1936年WilsonSmith和ThomasFrancis分别在禽胚中研制成功灭活的甲型流感疫苗。34狂犬病及疫苗5/9/2024疫苗的历史

人用疫苗发展一览表

减毒活疫苗全病原体灭活疫苗纯化蛋白/多糖疫苗基因工程疫苗

十八世纪天花疫苗，1798

十九世纪狂犬病疫苗，1885伤寒疫苗1896

霍乱疫苗1896

鼠疫疫苗1897

二十世纪BCG（结核）1927百日咳，1926（全细胞）白喉，1923

早期黄热疫苗，1935流感疫苗，1936破伤风，1927

立克次体，1938

二次大战脊灰（口服）脊灰（注射）肺炎球菌乙型肝炎（酵母以后麻疹、腮腺炎狂犬病疫苗（新）脑膜炎球菌或哺乳细胞表达）乙型脑炎乙型脑炎流感嗜血杆菌百日咳类毒素风疹、水痘甲肝疫苗乙型肝炎（血浆腺病毒出血热森林脑炎轮状病毒伤寒（Vi多糖）伤寒流感嗜血（结合）百日咳（无细胞）

35狂犬病及疫苗5/9/2024

狂犬疫苗的应用一、狂犬疫苗的种类二、狂犬疫苗的接种程序

a.暴露前程序

b.暴露后程序

c.其它免疫程序36狂犬病及疫苗5/9/2024

狂犬疫苗的接种程序1.暴露前免疫程序

标准免疫程序

0728天

02856天

37狂犬病及疫苗5/9/2024

暴露后免疫程序

标准免疫程序

0371428标准加强免疫程序

037142890首剂加倍程序

211皮内多点免疫程序

8411

22201138狂犬病及疫苗5/9/2024非标准免疫程序（暴露后）211免疫程0721（天）上臂三角肌注射：

几种疫苗接种后的抗体反应疫苗第七天抗体iu/ml血清阳转率

HDV0.5(0-6.7)17/26(65%)PCEC1.2(0.1-21.9)19/23(83%)PVRV1.0(0.1-2.3)18/23(78%)39狂犬病及疫苗5/9/2024

非标准免疫程序（暴露后）

8-4-1-1免疫程序072191（天）

注射时间上臂肩胛大腿腹壁（天）三角肌上方内侧

0

7

28

91

每点0.1ml

40狂犬病及疫苗5/9/2024非标准免疫程序（暴露后）

皮内多点免疫程序

2-2-2-0-1-1

注射时间037142896（天）

22201141狂犬病及疫苗5/9/2024

狂犬疫苗接种后的效果评价

血清中和抗体：

WHO：血清中和抗体≥0.5IU/ml

方法：

小鼠脑内测定法(MNT)

荧光灶抑制试验(RFFIT)

ELISA、乳胶凝集试验等只作参考42狂犬病及疫苗5/9/2024

狂犬疫苗的种类WHO推荐的狂犬疫苗

HDCV人二倍体细胞培养疫苗

PCEC鸡胚细胞培养疫苗PDEV纯化鸭胚疫苗PVRV纯化Vero细胞疫苗我国生产的狂犬疫苗

PHKC地鼠肾细胞培养疫苗PVRV纯化Vero细胞疫苗43狂犬病及疫苗5/9/2024

各类人用狂犬病疫苗

疫苗种类毒种纯化方法生产国家--------------------------------------------------------------------------------------------------原代地鼠肾细胞aG株柱纯析中国原代狗肾细胞AM末精制荷兰原代鸡胚细胞Fluly-LEP-C25超速离心德国原代鸡胚细胞Fluly-HEP超速离心日本胚鸭细胞PM株梯度密度离心瑞士人胚肺二倍体细胞PM株超速离心英国瑞士（WI-38）德国法国美国

人胚肺二倍体细胞SAD超速离心加拿大(MRC-5)Vero细胞PM梯度密度离心法国

aG株CTN-1株中国---------------------------------------------------------------------------------------------------44狂犬病及疫苗5/9/2024佐剂疫苗和无佐剂疫苗

免疫效果的比较

采血时间抗体GMT抗体阳转率

IU/ml(血清)(%)

天佐剂无佐剂佐剂无佐剂

70.10.48.145.2141.22.359.51004516.517.510010045狂犬病及疫苗5/9/2024我国生产狂犬疫苗的企业北京生物制品研究所V

沈阳安迪生物高科技公司HV上海生物制品研究所V

长春长生实业股份公司HV长春生物制品研究所H

V

辽宁生物工程公司HV兰州生物制品研究所H

V

大连高新生物技术公司H武汉生物制品研究所V

吉林亚太H宁波荣安生药业公司V

河北省医药技术公司H常州延申生物药业V河南普新生物工程有限公司H海南生物制品研究所V46狂犬病及疫苗5/9/2024生产用细胞用于疫苗生产的优缺点

原代细胞：地鼠、沙鼠肾细胞、鸡胚细胞

优点：

来源容易，这些动物的繁殖快，尤其是地鼠是哺乳动物中繁殖最快的动物之一；4-5周出现性周期，怀孕期15-18天，哺乳期20

天，产后24-36小时即可发情排卵，一年可产8-10胎。

制备的细胞没有遗转物质的突变，比较安全，不必考虑疫苗中的残余DNA；

病毒容易在这些细胞中适应。

缺点：

需要建设相应的动物房，污染环境；

制备疫苗需要宰杀大量的动物

动物容易污染细菌、病毒、寄生虫等外源物质。

大量处死动物不符合“动物论理学”要求，47狂犬病及疫苗5/9/2024生产用细胞用于疫苗生产的优缺点

传代细胞系：Vero细胞、BHK-21

优点：

传代细胞系，几乎可以取之不竭

已经全面检定，其特性符合人用疫苗的生产，细胞库一经建立，细胞质量可高度控制

该细胞生长条件要求不高，容易培养繁殖；

可用生物反应器大规模生产

大多数病毒能在该细胞系中复制繁殖

疫苗生产是不要动物

缺点：

由于是传代细胞系，有一定的致肿瘤性；

疫苗必须纯化，且细胞DNA含量须达到标准（10ng/剂）

目前不适合活疫苗的生产48狂犬病及疫苗5/9/2024

狂犬疫苗的质量标准物理检查 乳白色疏松体PH值7.2–8.0 溶解时间 ≤1分钟

硫柳汞含量(mg/ml)

≤0.10

蛋白含量（ug/剂）≤120残余水份含量%(g/g)

≤3.0残余牛血清蛋白(ng/剂)≤50

灭活试验 小鼠应健在残余DNA含量(ng/剂)

≤10

无菌试验 应无细菌生长

异常毒性试验小鼠试验 小鼠应键在,体重增加

豚鼠试验 豚鼠应键在,体重增加

效力试验(IU/剂)

≥2.5

热稳定试验(IU/剂)≥2.5

49狂犬病及疫苗5/9/2024狂犬疫苗中添加剂安全性问题

人白蛋白问题人血白蛋白在疫苗中作为添加剂起到保护和稳定疫苗的作用我国有1亿人为乙型肝炎病毒携带者有为数众多的丙型肝炎患者

80-100万的HIV感染者全球几乎无AIDS患者的国家

50狂犬病及疫苗5/9/2024

狂犬疫苗中添加剂安全性问题

人白蛋白:

目前人白蛋白的生产工艺为“低温乙醇法”（Cohn6法）经不同浓度的乙醇反复沉淀的第五组分中所得，所用血源须严格反复筛查，最终产品还须经60℃10小时的巴氏法专项病毒灭活，经验证该产品有可靠的安全性，国内外至今尚无使用该产品而感染HIV、HBV、HCV等报道。51狂犬病及疫苗5/9/2024

狂犬疫苗中添加剂安全性问题

牛血清：是细胞培养疫苗在细胞培养过程中必须的添加剂纯化过程中已基本去除，质量标准50ng/剂最担心疯牛病（传染性海绵状脑病、BSE

）源于英国的BSE愈演愈烈，已经蔓延到法国、德国、比利时等31个国家。最近日本、加拿大、韩国也相继报告了BSEWHO：人及动物传染性海绵状脑病相关的医用或

其他制品的研讨会报告（1997.3）

ReportofaWHOConsultationonMedicinalandOtherProductsinRelationtoHumanandAnimalTransmissibleSpongiformEncephalitis52狂犬病及疫苗5/9/2024牛组织及体液的传染性分类I类高度感染脑脊髓（眼）II类中度感染脾脏、扁逃体、淋巴结、回肠、近端大

肠、脑脊液、脑垂体、肾上腺、（硬脑膜、松果体、胎盘）III类低感染性周围神经、鼻黏膜、胸腺、骨髓、肝、肺、胰腺IV类无感染性骨骼肌、心脏、乳腺、牛奶、血清、粪便、肾脏、甲状腺、唾液腺、唾液、卵巢、子宫、睾丸、附睾、胎儿组织、（初乳、胆汁、骨骼、软骨组织、结缔组织、毛发、皮肤、尿液）53狂犬病及疫苗5/9/2024CJD和vCJD问题源于英国的BSE愈演愈烈，已经蔓延到法国、德国、比利时等31个国家。BSE又与人类vCJD有关。到2002年6月，在英国已确认为vCJD病人有122人，其中113人已死亡。对113个死亡病历因果分析，89例确定是BSE感染，其他24人可能与BSE有关。目前虽无证据表明经血、血液成分和血液制品转播vCJD，但是由于vCJD是新出现的疾病，现在就认为vCJD无传染性还为时过早。动物试验表明血液中传染因子含量低，但有传染性。而且实验证明牛BSE可以传染给羊。因此有理论上的风险。应特别关注经人血传染vCJD的可能性。54狂犬病及疫苗5/9/2024狂犬疫苗安全性问题

（Vero细胞残余DNA）

质量标准10ng/剂100pg/剂检测灵敏度：1-10pg/ml2ug(2x106pg)SV40DNA可使50%动物致瘤为一个致瘤剂量如100pg则为100/2x106=0.5x10-4致瘤剂量如每个细胞基因组DNA为10pg,而一个癌基因为10Kb(约10-5pg),则致瘤基因为细胞基因组的1/106，100pg细胞DNA中含100X10-6pg致瘤基因,则致瘤剂量为10-4/2x106=0.5x10-10个致瘤剂量。一个致瘤剂量的细胞DNA10000ng.55狂犬病及疫苗5/9/2024Vero细胞的致肿瘤性

Montagnon实验：

用裸鼠进行肿瘤实验，106

或107细胞注射裸鼠，同时用Hela细胞作对照

137-169代：注射部位结节呈退行性变，全部动物无肿瘤发生

190-210代：注射部位结节呈进行性变，全部动物出现肿瘤，且半数动物发生肺和淋巴节的肿瘤转移。

结论：170代以前的细胞是安全的56狂犬病及疫苗5/9/2024Vero细胞残余DNA的标准

Vero细胞残余DNA

质量标准：

80年代：美国FDA→10pg/剂欧盟、WHO→100pg/剂我国卫生部→100pg/剂

90年