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文档简介
实验一MS培养基的配制
2021/5/91一、实验目的了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类。初步掌握培养基母液配制方法。2021/5/92二、实验原理
植物材料培养要获得成功,并正常生长,培养基的成分是一个决定性因素,不同植物要求不同的培养基。大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。2021/5/93
在配制培养基之前,为了使用方便、简化操作、用量准确,减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差,常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液,置于冰箱内保存。当配制培养基时,按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即可。2021/5/94三、实验材料与器具1、用具器材灭菌锅、普通及精密天平、烧杯、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pH试纸。2、药品试剂蒸馏水、1NHCl、1NNaOH、95%酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品(分析纯)。2021/5/95四、实验步骤
1、母液配制(1)配制10倍1LMS大量元素母液NH4NO3
16.5gKH2PO4
1.7gKNO3
19g
CaCl2·2H2O
4.4gMgSO4·7H2O
3.7g2021/5/96
配制成200倍1L母液,依次称取:KI
0.166g
Na2MoO4·2H2O
0.05gH3BO3
1.24g
CuSO4·5H2O
0.005gMnSO4·4H2O
4.46g
CoCl2·6H2O
0.005gZnSO4·7H2O
1.72g(2)配制MS微量元素母液2021/5/97
配制成200倍lL铁盐母液,依次称取:EDTA二钠(Na2·EDTA·7H2O)7.46g
FeSO4·7H2O
5.56g(3)配制MS铁盐母液
2021/5/98
配制成200倍1L有机母液,依次称取:盐酸硫胺素(VB1)
0.02g烟酸
0.1g
盐酸吡哆醇(VB6)
0.1g(4)配制MS有机母液①2021/5/99(5)配制MS有机母液②配制成200倍1L有机母液:肌醇
20.0g
(6)配制MS有机母液③配制成200倍1L有机母液:甘氨酸
0.4g
2021/5/910
0.1mg/mL的6-BA溶液:取25mg的6-BA,用少量1N的盐酸溶解,再加蒸馏水定容至250mL。0.1mg/mLNAA:取25mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后,再加水定容至250mL。0.1mg/mL2,4-D:取20mg的2,4-D溶于少量95%乙醇中,再加水定容至200mL。(7)植物激素的配制2021/5/911
2、培养基的配制(以1L培养基为例)1、计量根据配制培养基的量(1L)和母液的浓度计算需要吸取母液的量,计算公式:吸取量mL=培养基中物质浓度(mg/L)×1000mL/母液浓度(mg/L)。母液浓度/培养基中物质浓度=稀释倍数2、移液取大烧杯(1L)一只,按照计算吸取母液的量依次吸取各母液置于烧杯中备用。3、称取称取10g琼脂,30g蔗糖备用。2021/5/9124、融化用搪瓷量杯量取600~700mL的蒸馏水放在电炉上,加入琼脂,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状将其取下,加入蔗糖,搅拌使之溶解。5、混合将融化的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中,充分混合,用蒸馏水定容到1000mL。6、调pH
用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L的NaOH或HCl溶液调pH为6.0。2021/5/913编号6-BA(mg/l)NAA(mg/l)2,4-D(mg/l)第一组0.50.11.0第二组0.50.52.0第三组0.50.050第四组1.00.10共分4组,每组配750mL培养基,每瓶倒25-30mL,共接种28瓶左右每瓶编号1(1/2/3/4)n号分组情况2021/5/9143、培养基的分装和灭菌溶化的培养基应该趁热分装。分装时,将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中,每瓶约25mL-30mL。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。用封口膜封口并编号。灭菌:121℃,15-20min。2021/5/915五、注意事项
配制铁盐母液时,FeS04和Na2EDTA应分别加热溶解后混合,并置于加热
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