HYT 259-2018 海洋生物体中六溴环十二烷的测定 高效液相色谱-串联质谱法

海洋生物体中六溴环十二烷的测定高效液相色谱-串联质谱法Determinationofhexabromocyclododecanesinmarineorganisms—2018-07-30发布中华人民共和国自然资源部发布 I 2规范性引用文件 3方法原理 4试剂或材料 5仪器设备 26样品 27试验步骤 28试验数据处理 49精密度 510灵敏度 附录A(资料性附录)六溴环十二烷标准溶液色谱图和质谱图 6附录B(资料性附录)海洋生物体中六溴环十二烷分析记录表 I本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国自然资源部提出。本标准由全国海洋标准化技术委员会海洋环境保护分技术委员会(SAC/TC283/SC1)归口。本标准主要起草单位：浙江省海洋水产研究所、浙江省海洋监测预报中心。本标准主要起草人：张小军、严忠雍、陈雪昌、方益、张帅、孙秀梅、郭远明、陈思、梅光明、李佩佩、李铁军、宋俐俐。1海洋生物体中六溴环十二烷的测定高效液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了采用高效液相色谱-串联质谱法测定海洋生物体中六溴环十二烷(HBCD)的方法原本标准适用于海洋生物体中α-HBCD、β-HBCD和γ-H2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB17378.2海洋监测规范第2部分：数据处理与分析质量控制GB17378.3—2007海洋监测规范第3部分：样品采集、贮存与运输3方法原理海洋生物体中的六溴环十二烷经正己烷提取后，旋蒸浓缩经硅胶固相萃取柱净化，氮气吹干用甲醇定容，通过高效液相色谱柱分离，以甲醇、乙腈和水为流动相进行洗脱，用高效液相色谱-串联质谱法测4试剂或材料4.1除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T664.2正己烷(C₆H₁₄):色谱纯。4.5二氯甲烷(CH₂Cl₂):色谱纯。4.6六溴环十二烷(HBCD)单标储备液：标准物质，α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD质量浓度均为4.7六溴环十二烷同位素(l³C-HBCD)单标储备液：标准物质，³C-a-HBCD、³C-β-HBCD、¹³C-y-4.8六溴环十二烷混合标准中间液：分别准确移取0.50mLa-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD标准溶液(4.6),用甲醇稀释至50.00mL,配成α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD质量浓度均为1.00μg/4.9六溴环十二烷混合标准使用液：准确移取1.00mL六溴环十二烷混合标准中间液(4.8),用甲醇稀2释至10.00mL,α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD质量浓度均为100ng/mL的混合溶液，4℃冷藏保存，有效期1个月。4.10六溴环十二烷混合内标中间液：分别准确移取1.00mL³C-a-HBCD、³C-β-HBCD、¹³C-γ-HBCD内标溶液(4.7),用甲醇稀释至50.00mL,配成l³C-a-HBCD、I³C-β-HBCD、I³C-γ-HBCD质量浓度均为1.00μg/mL的混合内标溶液，4℃冷藏保存，有效期6个月。4.11六溴环十二烷混合内标使用液：准确移取1.00mL六溴环十二烷混合内标中间液(4.10),用甲醇稀释至10.00mL,¹³C-a-HBCD、¹³C-β-HBCD、I³C-γ-HBCD质量浓度均为100ng/mL的混合内标溶液，4℃冷藏保存，有效期1个月。5仪器设备5.1高效液相色谱-串联四级杆质谱仪：配备电喷雾(ESI)离子源。5.2色谱柱：¹C柱100mm×2.1mm,1.7μm,或者其他性能相当的色谱柱。5.3硅胶固相萃取柱：6mL,含1000mg硅胶。5.5旋转蒸发仪。5.6高速离心机：转速不少于4000r/min。5.8有机相微孔滤膜：孔径0.22μm。5.9固相萃取装置。5.10氮气吹干仪。5.11涡旋混合器：转速不少于1500r/min。6样品海洋生物体样品的采集、预处理、制备和保存，按GB17378.3—2007中第6章的有关规定执行。7试验步骤称取5.00g(准确到0.01g)均质后的待测样品，置于50mL离心管中，加入100μL内标标准使用液(4.11),再加入15mL正己烷(4.2),涡旋振荡1min,超声振荡10min后，6000r/min离心5min,将上清液转移至旋转蒸发瓶；残渣用15mL正己烷(4.2)按上述方法再提取一次，所得上清液合并至旋转蒸发瓶，在40℃水浴条件下旋转蒸发浓缩至近干，加入5mL正己烷(4.2)溶解，超声振荡1min备用。移取提取液加至已用5mL正己烷(4.2)活化后的硅胶柱固相萃取柱上，先用2mL正己烷(4.2)淋洗，再用5mL二氯甲烷(4.5)洗脱，洗脱流速为1.0mL/min,用15mL离心管收集洗脱液，洗脱液于40℃氮气吹干，加1.00mL甲醇(4.3),旋涡振荡1min,经0.22μm有机相微孔滤膜过滤后分析。3除不加样品外，按7.1和7.2的步骤进行前处理，将处理后的待测液用高效液相色谱-串联质谱仪按7.5步骤进行测定。7.4标准曲线的制备及测定100μL¹³C-HBCD混合内标使用液(4.11),用甲醇溶液稀释至1.00mL,得到浓度0ng/mL、1.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL系列标准工作液，标准工作液中的内标物浓度均为10.0ng/mL。按7.5步骤测定。宜参照下述仪器分析条件测定：——流动相：A:纯水，B:甲醇乙腈溶液(甲醇：乙腈=4:6,体积比),流动相梯度洗脱程序见表1;——扫描方式：选择反应监测，选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量见表2;表1流动相梯度洗脱程序时间/min0表2选择反应监测母离子、子离子和碰撞电压V4表2(续)Va为定量碎片离子。8试验数据处理的相对偏差不大于5%;样品特征离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度偏差参见表3。六溴环十二烷标准溶液的特征离子质量色谱图及质谱全扫描图参见附录A。表3离子相对丰度要求59精密度本方法的回收率在70%～120%,海洋生物体中α-HBCD的重复性标准差不大于0.66pg/kg,重复性相对标准偏差不大于5.0%;再现性标准差不大于1.19μg/kg,再现性相对标准偏差不大于6.0%;相对误差不大于19.2%。海洋生物体中β-HBCD的重复性标准差不大于1.20μg/kg,重复性相对标准偏差不大于5.6%;再现性标准差不大于1.68μg/kg,再现性相对标准偏差不大于8.4%;相对误差不大于19.8%。海洋生物体中γ-HBCD的重复性标准差不大于1.47μg/kg,重复性相对标准偏差不大于7.0%;再现性标准差不大于1.47μg/kg,再现性相对标准偏差不大于9.3%;相对误差不大于19.9%。10灵敏度a-HBCD、β-HBCD和γ-HBCD的定量限均为0.20μg/kg。6(资料性附录)六溴环十二烷标准溶液色谱图和质谱图是是&图A.1六溴环十二烷标准溶液(20ng/mL)特征离子质量色谱图图A.2六溴环十二烷质谱扫描图(资料性附录)海洋生物体中六溴环十二烷分析记录表表B.1海洋生物体中六溴环十二烷分析记录表g测定浓度C;样品含量X;1)样品浓度计算公式为X;——样品中α-HBCD、β-HBCD和γ-HBCD的含量，单位为微克每千克(