2024年人乳头瘤病毒检测方法及其应用进展

第页2024年人乳头瘤病毒检测方法及其应用进展[摘要]宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，早发现、早治疗是预防宫颈癌的关键。除细胞学检查外，HPV检测也是宫颈癌筛查的重要方法。最初的HPV检测方法主要是基于形态学，如细胞学、组织学、免疫组化及电镜等，但因敏感度和特异度均不理想，操作较繁琐，临床使用较少。目前应用于临床的HPV检测方法为基于现代分子生物学的核酸技术，灵敏度及特异度均较高。该文就国内、外普遍应用的HPV检测方法及其应用进展作一简述。

[关键词]宫颈癌;宫颈上皮内瘤变;人乳头瘤病毒;检测

[中图分类号]R737[文献标识码]A[文章编号]1674-0742（2024）07（a）-0196-03

ProgressinDetectionofHumanPapillomavirusandItsApplication

PENGCai-jiao，XIONGZheng-ai

TheSecondAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing，400010China

[Abstract]Cervicalcancerisacommonmalignanttumorinwomen.Earlydetectionandearlytreatmentarethekeytopreventcervicalcancer.Inadditiontocytology，HPVtestingisalsoanimportantmethodforcervicalcancerscreening.TheoriginalHPVdetectionmethodismainlybasedonmorphology，suchascytology，histology，immunohistochemistryandelectronmicroscopy，butthesensitivityandspecificityarenotideal，theoperationiscumbersome，andtheclinicalapplicationsarefewer.ThecurrentHPVdetectionmethodappliedtotheclinicisbasedonmodernmolecularbiologynucleicacidtechnology，andthesensitivityandspecificityarehigh.ThispapergivesabriefintroductiontothedomesticandforeignHPVdetectionmethodsandtheirapplicationprogress.

[Keywords]Cervicalcancer;Cervicalintraepithelialneoplasia;Humanpapillomavirus;Detection

目前宫颈癌仍严重威胁全球女性的生命健康，仍是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一[1]，世界范围内宫颈癌居女性恶性肿瘤第4[2]，每年约有50万的新发病例，每年死亡病例超过26万，均主要发生于社会经济欠发达地区[3]。随着宫颈癌细胞学检查联合HPV检测的筛查模式的推广及逐渐普及，全球宫颈癌的死亡率和发生率下降明显，但在发展中国家尤其是中低收入国家有上升趋势，数据显示我国则有逐渐上升[4]。

长期以来宫颈癌筛查以细胞学检查为主，随着HPV感染和宫颈肿瘤之间的直接因果关系被證实[5-7]，HPV检测逐渐成为宫颈癌的重要部分。HPV检测虽特异性较低，但高敏感性、高阴性预测值等特点更突出，近期研究提出，联合筛查在预防宫颈癌发挥的重大意义可能在于HPV检测[8]，HPV检测在预防宫颈癌方面可提供更多的保护[9]。该文将对以下HPV检测方法及其应用进展作一简述。

1HPVDNA检测

1.1杂交捕获（HybridCapture，HC）技术

HC-II技术1999年成为美国FDA认证的第一个用于宫颈癌筛查的HPV检测方法，基因杂交基础上利用化学发光对抗体捕获的信号放大原理，对高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型进行检测，并可进行病毒载量半定量检测，因有统一的临床判定标准，检测结果客观性较高，且重复性好，采用HPV全长碱基对设计避免了因灵敏度过高导致的假阳性，无需基因扩增有效避免环境因素造成的假阴性。研究显示HC-II法对CIN2及以上病变的敏感度及特异度分别为97.1%和85.6%[10]，因此HC-II法至今被作为HPV检测的金标准，但该方法不能具体分型、缺乏内质控，且成本高，与低危型HPV型也存在交叉反应[10-11]。

careHPV检测是一种宫颈癌快速筛查技术，2024年8月获世界卫生组织资格认证。careHPV检测同样基于HC-II的原理，但除能检测常见13种高危型HPV外，还能检测HPV66型，且操作简易、价格低廉、检测用时短，因此，该方法被认为非常适用于卫生资源匮乏地区等发展中国家，包括中国农村。临床结果显示，CcareHPV对CIN2及以上病变的灵敏度为90%，特异度为84.2%，与HC-II检测接近[12]。

1.2Invader酶切信号放大法

该方法采用Invader专利技术，通过分子杂交和化学信号放大，直接检测特定HPVDNA序列。2024年美国FDA批准使用的CervistaHPV检测则基于该方法，对HPVDNA的L1、E6/E7区进行检测，这可避免仅检测L1区所造成的假阴性，且与多数低危型HPV无交叉反应，降低了假阳性率[13]，也能进行内质控，其有两种试剂盒：CervistaHRHPV和CervistaHPV16/18，前者能检测14种高危型HPV，并将其分为A5/6、A7、A93组，但认为分组检测的临床意义尚不能明确[14]，后者可对HPV16/18分型。Belinson等在中国广东省纳入1万女性的研究中CervistaHRHPV对CIN3及以上病变的灵敏度为95.1%（95%，90%～98%），与HC-II法无明显统计学差异，但特异度显著高于HC-II法（P<0.05）[15]。

1.3聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR）技术

这类方法多样，包括常规PCR技术、实时荧光定量PCR技术、PCR-酶联免疫吸附测定检测技术、PCR结合返向杂交技术等。2024年获FDA批准用于宫颈癌筛查的Cobas4800HPV检测则以实时荧光定量PCR技术为基础，可检测14种高危型HPV，并提供HPV16、18同步基因分型，但对余12种不能具体分型，敏感性和特异性均较高，且不存在与低危型HPV的交叉反应，但因敏感性过高，易导致假阳性率的增加。Mark等[16]的研究显示，Cobas4800HPV检测在灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值方面与HC-II法无明显差异，且两者一致性高，在CIN2以下和CIN2及以上的病变中的一致性分别为90.6%（95%，89.1%～92%）和96.2%（95%，89.5%～98.7%）。Lapierre等[17]研究发现，Cobas4800HPV检测的重复性较好，多次检测的一致率较高，降低了操作成本，同时能对是否行阴道镜下活检提供有效帮助信息。基于ATHENA的研究结果[18]，2024年Cobas4800HPV检测成为美国FDA唯一批准用于25岁女性宫颈癌一线初筛的HPV检测方法。随着国内外学者深入探索，发现HPV自取样技术的参与率高于细胞学筛查，群众可接受度更高[19]，HPV自取样或许可作为宫颈癌初筛手段[20]，且应用基于PCR的HPV检测方法进行自取样标本可获得与医生取材一样的敏感性[21-22]，因此有学者认为CobasHPV检测技术也可用于HPV自取样。

目前在中国广泛使用的HPV基因分型检测结合PCR技术、导流杂交及基因芯片技术为一体，可同时检测21种HPV基因型别，包括13种常见的高危型HPV、5种低危型HPV（6、11、42、43、44、81型）和中国人常见基因型（HPV53、66、81型），并具体分型，判断多重感染[23]。

今年美國FDA批准的BDOnclarityHPV检测系统，同样基于PCR技术。大多数HPV检测方法针对的是HPV基因组L1区，而该方法针对E6/E7DNA癌基因，其中样品处理、核酸提取、即时PCR扩增、检测以及结果报告均为自动化处理，同样可检测14种高危型HPV，但其报告为：6种高危型HPV（16、18、31、45、51和52型）为独立结果和其余8种高危型HPV另分为三个独立报告：（33、58型）、（35、39、68型）和（56、59、66型），可降低人为干预，大幅度提高实验室的工作效率。

2HPVmRNA检测

该方法利用转录介导等温扩张技术，提取HPVE6/E7mRNA，在逆转录酶的作用下将mRNA进行逆转录扩增，分别对16型、18/45型和其他11种高危型HPV进行检测。研究数据显示该方法既具备HPVDNA的敏感性，又有与细胞学检查相似的特异性[24]，能较好平衡HPV检测的敏感性和特异性，同时可降低传统HPVDNA检测对于一过性HPV感染的检出率。E6/E7为HPV的致癌基因，在大量HPV持续被转录为E6/E7mRNA，表达大量癌蛋白时，可增加细胞恶变的风险[25-26]，因此较HPVDNA检测，HPVmRNA检测或许更能发现具有临床意义的HPV感染[27]，真正识别高风险的宫颈癌前病变人群[28]。AptimaHPV检测即为一种HPVmRNA检测，包括AptimaHPV和AptimaHPV16/18/45Genotype，后者可对前者阳性结果进一步分型，两者均在2024年获得美国FDA批准。但该方法同样缺乏内质控，不能具体分型，也可能与低危型HPV有交叉感染。

3结语

宫颈癌筛查的目的在于尽可能识别出真正的癌前病变，避免对HPV一过性感染的过度检查及过渡治疗。HPV检测作为作为宫颈癌的重要筛查手段，基于HPV检测的优势，在发展中国家，尤其是经济欠发达地区可能有更高的应用前景，若合理利用，将对全球的宫颈癌防控产生重大意义。

[参考文献]

[1]刘萍.中国大陆13年宫颈癌临床流行病学大数据评价[J].中国实用妇科与产科杂志，2024，34（1）：41-45.

[2]BrayF，FerlayJ，SoerjomataramI，etal.GlobalCancerStatistics2024：GLOBOCANEstimatesOfIncidenceAndMortalityWorldwidefor36Cancersin185Countries[J].CACancerJClin，2024：1-31.

[3]TsuV，JerónimoJ.SavingtheWorld"swomenfromcervicalcancer[J].NewEnglJMed，2024，374（26）：2509.

[4]ChenWQ，ZhengR，BaadePD，etal.CancerStatisticsinChina2024[J].CACancerJClin，2024，66（2）：115-132.

[5]SmithJS，LindsayL，HootsB，etal.HumanPapillomavirusTypeDistributionInInvasiveCervicalCancerAndHigh-gradeCervicalLesions：Ameta-analysisupdate[J].IntJCancer，2024（121）：621-632.

[6]StensenS，KjaerSK，JensenSM，etal.FactorsAssociatedWithType-specificPersistenceOfHigh-riskHumanPapillomavirusInfection：Apopulation-basedstudy[J].IntJCancer，2024，138（2）：361-368.

[7]YangY，RenJ，ZhangQ.Distributionofhumanpapillomavirustype16E/E7genemutationincervicalprecancerorcancer：acasecontrolstudyinGuizhouProvince，China[J].JMedViol，2024，88（2）：345-350.

[8]GageJ，KatkiHA，SchiffmanM，etal.ReassuranceAgainstFutureRiskofPrecancerandCancerConferredbyaNegativeHumanPapillomavirusTest[J].JNatlCancerInst，2024，106（8）：1-4.

[9]RoncoG，DillnerJ，ElfstromKM，etal.EfficacyofHPV-basedscreeningforpreventionofinvasivecervicalcancer：follow-upoffourEuropeanrandomisedcontrolledtrials[J].Lancet，2024，383（9916）：524-532.

[10]吳文湘，刘朝晖.62种人乳头瘤病毒临床检测技术点评[J].中国计划生育和妇产科，2024，8（9）：1-3.

[11]ClavelC，MasureM，BoryJP，etal.HybridCaptureII-basedHumanPapillomavirusDetection，aSensitiveTestTodetectInRoutineHigh-gradeCervicalLesions：Apreliminarystudyon1518women[J].BrJCancer，1999，80（9）：1306-1311.

[12]QiaoYL，SellorsJW，EderPS，etal.AnewHPV-DNAtestforcervical-cancerscreeningindevelopingregions：across-sectionalstudyofclinicalaccuracyinruralChina[J].LancetOncol，2024，9（10）：929-936.

[13]吕攀攀，邢志芳.人乳头瘤病毒实验室检测方法的研究进展[J].国际检验医学杂志，2024，38（5）：660-664.

[14]魏丽惠.下生生殖道上皮内病变的诊治和管理[M].北京：北京大学医学出版社，2024：43.

[15]BelinsonJL，WuR，BelinsonSE，etal.Apopulation-baseclinicaltrialcomparingendocervicalhigh-riskHPVtestingusingHybridCapture2andcervistafromtheSHENCCASTIIstudy[J].AmJAlinPathol，2024（13）：790-795.

[16]MarkH，StolerMD，WrightTC，etal.High-riskHumanPapillomavirusTestingInWomenWithASC-USCytology：TesultsFromtheATHENAHPVstudy[J].AmJClinPathol，2024，135（3）：468-475.

[17]LapierreSG，SauthierP，MayrandMH，etal.Humanpapillomavirus（HPV）DNATriageOfWomenWithAtypicalSquamousCellsOfUndeterminedSignificancewithcobas4800HPVandHybridCapture2testsfordetectionofhigh-gradelesionsoftheuterinecervix[J].JClinMicrobiol，2024，50（4）：1240-1244.

[18]WrightTC，StolerMH，BehrensCM，etal.PrimaryCervicalCancerScreeningWithHumanPapillomavirus：EndOfStudyResultsFromTheATHENAStudyUsingHPVAstheFirst-lineScreeningTest[J].GynecolOncol，2024，136（2）：189-197.

[19]RaceyCS，WithrowDR，GesinkD，etal.Self-collectedHPVtestingimprovesparticipationincervicalcancerscreening：asystematicreviewandmeta-analysis[J].CanJPublicHealth，2024，104（2）：e159-166.

[20]ArbynM，CastlePE.Offeringself-samplingkitsforHPVtestingtoreachwomenwhodonotattendintheregularcervicalcancerscreeningprogram[J].CancerEpidemiolBiomarkersPrev，2024（24）：769-772.

[21]ArbynM，VerdoodtF，SnijdersPJF，etal.AccuracyOfHumanPapillomavirusTestingOnSelf-collectedVersusClinician-collectedSamples：Ameta-analysis[J].LancetOncol，2024，15（2）：172-183.

[22]ArbynM，SmithSB，TeminS，etal.Detectingcervicalprecan-cerandreachingunderscreenedwomenbyusingHPVtestingonselfsamples：updatedmeta-analyses[J].BMJ，2024（363）：k4823.

[23]TaoP，ZhengW，WangY，etal.SensitiveHPVgenotypingbasedontheflow-throughhybridizationandgenechip[J].JBiomedBiotechnol，2024（2024）：938780.

[24]CuschieriK，