QB-T5482-2020化学消毒剂与杀菌剂基本消毒活性试验方法和要求

B中华人民共和国轻工行业标准基本消毒活性试验方法和要求中华人民共和国工业和信息化部发布1化学消毒剂与杀菌剂基本消毒活性试验方法和要求SN/T1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南2 应用相同的温度(36℃或37℃)。 6.2.6洗液(用于膜过滤法)37.1通则使用下列方法的一种，对所有的玻璃仪器和能接触到培养基和试剂或样品的 干热灭菌法，用于热灭菌器对于湿热灭菌法，高压灭菌锅在(121#3)℃下最短保留时间为15min.对于干热灭菌法，干热灭菌器在(180±5)℃下最短保留时间为30min,或在(170±5)℃下最短保留时间为1h,或在(160±5)℃下最短保留时间为2h。能控制在(20±1)℃、(45±1)℃(用以保持溶化的TSA可倾注于平皿)以及增加的试验温度7.2.3培养箱能控制在(36±1)℃或(37=1)℃。(20±1)℃下，精度为0.1pH。由与待过滤的物质相符的材料组成，应配备容积不小于50mL的接液器。直径为47mm~50mm,能提供稳定的过滤流量，在20s~40s得到100mL过滤液，使微生物均匀分布在膜上。能控制在2℃~8℃。0.1mL、1mL和10mL,或带有刻度的自动吸管或数字直径为90mm～100mm,带8.1试验菌悬液4制备试验菌及其母代培养物，应符合微生物保藏传代要求。为制备试验菌的工作培养物，籽源于母代培养物接种于TSA斜面或平皿，并培养得到第1代培养物。18h～24h后，用同样的方法由第1代培养物制备第2代培养物，并培养18h～24h。以同样的方法，由第2代培养物制备第3代培养物。第2代和第3代培养物为工作培养物。若在特定时间未得到第2代培养物，在随后的传代中可采用48h的培养物，即将次培养物保留在8.1.4试验菌悬液(N)接种环在锥形瓶壁与液面接触处涂抹以便移出菌，使细菌分散在稀释剂中。用机械振动器振摇锥形瓶3min。吸取锥形瓶中的悬液，移至另一试管。用稀释液调整悬液中菌数为1.5×10⁸CFU/mL～5×108CFU/mL,用任一适用的方法估测其菌落数。保持悬液恒温于试验温度(θ±1)的水浴锅中，并于2h用分光光度计调整菌落数(波长约620mm,口径长为10mm的比色管)。每一实验室应对每一种使用涂布平板法时，将每份1.0mL样品涂布于TSA平板(至少两个)表面培养与计数。8.1.5验证菌悬液(N)为便于计数，用稀释剂制备10-1稀释液，混匀。分取1.0mL样品，采用倾注平板法或涂布平板法置于(36±1)℃培养箱内培养(48±2)h,计数。记录每一平皿的确切菌落数，但若计数高于330,则记录>330,确定Vc值。应用所给方法，计算试验菌悬液(N)及验证菌悬液(Nv)的菌落数。8.2试样溶液试样溶液的浓度应是所需试验浓度的1.25倍，因为在试验及验证期间，试样溶液会被稀释至80%。用水配制试样溶液，至少3个不同浓度，其中包括活性范围的浓度和非活性范围的浓度。瓶中，以体积比的形式用水制备随后的稀释液(较低的浓度)。现配试样溶液，并于2h内用于试验。应得到物理上均相的制剂，其在整个程序中应是稳定的。若5a)作用温度(以℃表示)必需测试温度为20℃;增加的温度可从4℃、10℃或40℃中选择；b)作用时间(以min表示)9.2.1常规条件6混匀，并置于水浴中，恒温在(20±1)℃。中和10min±10s后，立即混匀，分取两份1.0的TSA。9.2.4中和剂控制(B)管移至(20±1)℃水浴内5min±10s。加入1.0mL验证菌悬液，计时，混匀。将试管移至(20±1)℃记录每一平皿的确切菌落数，但若计数高于330,则记录>330,并确定Vc值。计算试验混合物(Na)及证实试验混合物9.3.2杀菌试验7记录每一平皿的确切菌落数，但若计数高于165,则记录>165,确定Vc值。8此限制范围在14CFU～330CFU之间。对于膜过滤法，最高限制150CFU,允许有10%的偏差即为165最低限制(14)就是以此为依据的。最低限制仅指样品(并不指对一个平皿来计算),例如，三个平皿，每1mL样品分别含3CFU、8CFU以最高限制(330CFU,165CFU)反映了所计的总菌落数不准确，以及因营养物质的消耗而生长受根据含1mL样品的平皿数确定并记录Vc,以便计算试验菌悬液N,验证菌悬液Nv,和稀释-中和若用多于一个含1mL样品的平皿确定Vc值，则标注每一平皿的计数。若一个平皿的计数高于330CFU,记录为>330CFU。若采用多于一个含1mL样品的平皿，且其中若Vc值小于14CFU,记录该数(按照<14CFU计算菌落数)。对于膜-过滤法，膜上的数为Vc值。记录低于最低限制(14CFU)或高于最高限制(165CFU)的Vc值。除Na之外，仅考虑各个计数限制的Vc值，以进一步计算。试验菌悬液的两个稀释度，用公式(1)计算出菌落数的加权平均值：N——每毫升试验菌悬液所含菌落数，单位为CFU/mL;C——Vc值总和，单位为CFU;n₁——较低稀释度(10-6)的Vc值的个数；n较高稀释度(10-7)的Vc值的个数。将计算的结果采用四舍六入五留双，修约至两位有效数字，用科学计数No是每毫升试验混合物在作用时间开始时所含菌落数。Na是每毫升试验混合物在作用时间结束后，以及中和或膜过滤之前所含的菌落数。用公式(2)计算Na:Na=10c/n…………(2)Na—每毫升试验混合物在作用时间结束后，以及中和或膜过滤之前所含的菌落数，单位为c——Ve值总和，单位为CFU;;9Nv=10c/n………(3)Nvo=cln………(4) (5)10.2方法学的证实其商在5与15之间。10.3.4精密度，重复性a)鉴定试验室级别； ——作用时间(s); ——识别所用菌种。 g)地点，日期和确认签字。(规范性附录) 于(36±1)℃[或(37±1)℃]下培养平皿24h。弃去不可计数的平皿，做平皿计数，确定每一平皿的3×10³CFU/mL菌悬液1.0mL。加菌悬液时就开始计时，混匀，于(20±1)℃水浴锅内保持 冷却至(45±1)℃的TSA,于(36±1)℃[或(37±1)℃]下培养平皿24h。弃去不可计数的平皿， 稀释至5%(体积分数)或0.5%(体积分数)的新鲜蛋黄： 含5%(体积分数)的新鲜蛋黄；40g/L的吐温80的0.0025mol/L磷酸盐缓冲液 含7%(体积分数)的脂肪醇环氧乙烷缩合物；20g/L的卵磷脂；4%(体积分数)的吐温80 含4%(体积分数)的脂肪醇环氧乙烷缩合物；4g/L的卵磷脂的0.0025mol/L磷酸盐缓冲液 含0.075%(体积分数)碘美拉酸(用NaOH调pH至7) ——含30g/L的吐温80;30g/L的皂角苷；1g/L的L-组氨酸；1g/L的半胱氨酸的0.0025mol/L