(高清版)GBT 41689-2022 土壤质量 土壤样品直接提取DNA的方法

土壤质量土壤样品直接提取DNA的方法Soilquality—Directextractionofs国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会IGB/T41689—2022/ISO11 Ⅲ 1 1 1 1 25.1土壤样品 25.2化学品 25.3缓冲液及试剂 3 37DNA提取步骤 47.1土壤样品的准备 4 47.3蛋白质沉淀 4 47.5核酸储存 4 48.1土壤DNA的质量与纯度 4 5 510测试报告 5附录A(资料性)本文件与ISO11063:2012中土壤样品直接提取DNA方法之间的差异 6附录B(资料性)纯化土壤DNA提取物的可用方法 7 8Ⅲ11范围生物学技术[包括实时定量PCR(qPCR)]的土壤细菌群落丰度和组成分析。该方法主要适用于农业及土壤样品直接提取DNA为研究微生物群落a多样性和β多样性提供了独特视角。通过土壤DNA下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文ISO18400-206土壤质量采样第206部分：实验室测定微生物过程、生物量与多样性用土壤的好氧采集、处理及贮存指南(Soilquality—Sampling—Part206:Collection,handlingandstorageofsoilunderaerobicconditionsfortheassessmentofmicrobiologicalprocesses,b从土壤活体微生物提取的DNA和死亡微生物的残留DNA。按以下提取步骤，从1g土壤样品(等量干重)直接提取DNA。将添加了提取缓冲液和玻璃珠的土 得核酸沉淀用70%乙醇洗涤后，并溶解在分子生物学级超纯水或者TE缓冲液中。通过琼脂糖凝胶电 2ISO11063:2012(ISO11063的第1版)之间的差异列于附录A的表A.1中。均质(90s,4m/s)孵育(70℃,30min)离心(5min,7000g,20℃)加入3mol/L乙酸钾(1/10体积)离心(5min,14000g,4℃)加入冷异丙醇(等体积)孵育(-20℃,30min)加入70%冷乙醇离心(5min,14000g,4℃)干燥DNA颗粒(37℃,15min)3将pH值调到8.0。4其置于1.5mL试管中进行蛋白质沉淀。剩余的裂解液可储存在-20℃下，以便进一步重新提取DNA。土壤DNA的质量和长度的检测采用1%琼脂糖凝胶在TBE缓冲液电泳。用适当的染色剂(如5mg/L溴化乙锭)对凝胶进行染色。土壤DNA纯度采用分光光度法260nm波段DNA分析和5光光度法在260nm处测定土壤DNA6土壤样品孵育离心蛋白质沉淀乙酸钠5mol/L(1/10体积)乙酸钾3mol/L(1/10体积)7÷÷建议可采用ISO11063:2012[5]中实验室间评估使用的PVPP柱和Sepharose¹)4B柱联合法。8manceauP.,LeyvalC.,LindstromK.,PandardP.,R[2]vanElsasJ.D.,SmallaK.,TebbecleicacidsfromenvironmentabyJanssonJ.K.,vanElsasJ.D.,BaileyM.J.,LandesBioscience,Georgetown,Texas.pp.29-61.2000[3]RanjardL.,LejonD.P.H.ffungalandbacterialcommunities.Environ.Microbiol.[4]