青少年同伴关系经典影片-《伴我同行》赏析、看

还记得年少时的那次“探险”吗？——《伴我同行》赏析主持人：刘建鸿博jh_psy@内容介绍著名作家戈迪回忆起他12岁时的一次冒险 活动:当时，年少的戈迪（威尔•惠顿Wil Wheaton饰）与他的三个小伙伴克里斯（瑞凡•菲尼克斯RiverPhoenix饰）、泰迪（科里•费尔德曼CoreyFeldman饰）和维恩为了当一回“英雄”去河的对岸的森林里寻找一具12岁男孩的尸体。四个少年, 四个家庭,一段旅程“英雄”克里斯（瑞凡•菲尼克斯River

Phoenix饰）戈迪（威尔•惠顿Wil

Wheaton饰）哥哥意外去世,与哥哥感情深厚哥哥很优秀,在家中受忽视“该死去的是我”爱写作,讲故事,成绩好“我们”泰迪（科里•费尔德曼CoreyFeldman饰）维恩出发了冒险爬进围栏他们感到了幸福21"59""赶紧跑!嘲骂泰迪冒险过铁路桥：真的闪火车!冒险risktaking——“闪火车”游戏，冒险 过铁路桥青少年是“大人”吗?冒险，偷窃……他是谁?青少年心理发展基本特点认知独立性“叛逆”情感波动性“冲动”自我专注性“自我”交往差异性“封闭”篝火旁边的"报复“故事“没有人知道我”篝火后的心灵相依戈迪做的梦涉水渡泥沼，蚂蝗!看到了!初识死亡他们也来了”不走我就开枪了“他们的出现为何?青少年真实生存环境的一部分对比，少年们是“坏孩子”吗?归途命运各如何,“伴我同行”群体社会化发展理论(GroupSocializationTheoryofDevelopment提出者:哈里斯(JudithRichHarris)从家庭到社会:群体社会化发展理论一、群体社会化发展理论提出的背景•• 麦考比和马丁(Maccoby&Martin,1983):父母的行为对孩子没有显著影响；在同一家庭中，父母对每个孩子的影响各不相同”。从家庭到社会:群体社会化发展理论行为遗传学的研究证明，造成个性差异的因素有三类:•• (1)遗传因素,在个性特征中所占比重大约为40－50％；家庭因素,所占比重大约只占0－10％。其他非共有的环境因素。从家庭到社会:群体社会化发展理论二、群体社会观发展理论的核心假设

社会化是一种高度情境化的学习形式。儿童独立地在家庭内外习得两套行为系统。这两套行为系统的学习方式和强化途径均不同。从家庭到社会:群体社会化发展理论三、群体社会化发展理论的基本内容1.群体现象及儿童的同伴群体群体存在以下五种基本行为现象:•(1)群体中的友好行为。•(2)群体外的敌对行为。•(3)群体间的对比行为。•(4)群体内的同化行为。•(5)群体内的异化行为。从家庭到社会:群体社会化发展理论2.发生在同伴群体中的社会化－社会文化传递 社会文化传递不是由家庭完成的,社会文化不是由父母传递给子女,而是由儿童群体传递的。社会文化的传递不是个体对个体的传递,而是群体对群体（上一代人向下一代人）的传递和群体内部的传递（同伴群体向每一个群体成员传递）。图1 从一代向下一代的文化传递的两种观点。下标数字相同的属于同一个家庭。A图表示儿童能从很多途径学习文化知识和行为,传递是从个体向个体进行的(Rowe, 1994)。B图表示传递是从群体向群体进行的(群体社会化理论)。图2根据群体社会化理论,其父母不属于当代父母群体成员的儿童从儿童群体中习得了本地的语言和风俗（下标数字相同的个体属于同一个家庭）。图3

人格发展的三种观点。图中所有箭头，除标有“遗传”的两条线表示环境影响外，均表示因果联系。A:传统的社会化途径（实线）模式；行为遗传学途径的社会化模式（实线加虚线）。B:群体社会化理论模式。从家庭到社会:群体社会化发展理论从我国文化出发评价群体社会化发展理论故事1：假定你很想买一件衣服，父母没时间陪你去买，他们给了你一笔钱，并要求你买某一种式样和颜色的衣服。但父母要求的衣服式样和颜色跟同学们的看法很不一致。在这种情况下，你将按照父母的建议去买，还是按照同学中流行的式样去买?为什么?图1各年龄被试对故事1判断的3种水平的发展趋势图中一、接受父母影响,二、接受同伴影响,三、对父母和同伴意见的整合从家庭到社会:群体社会化发展理论故事2：学生里经常流行一些与社会上不同的语言和词汇,这些“暗语”一般不符合语法规范，老师、家长都不说，也不懂，但同学们在一起时都说。如果父母坚决反对你在任何场合说这种话，你会不会完全听他们的话?为什么?图2

各年龄被试对故事2判断的3种水平的发展趋势谢谢大家,欢迎提问。聊孩子网站:电子邮件:272037144@手机文观看结束!!!谢欣谢赏!5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2

mRNA表达的影响5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2mRNA表达的影响作者:杜雅冰，邵应举，樊青霞，孙桢，王琳，赵培荣 作者单位:(郑州大学第一附属医院肿瘤内科，河南郑州 450002)【摘要】目的探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干预对食管鳞癌细胞株Eca9706生长增殖及其组织因子途径抑制物2(tissuefactorpathwayinhibitor-2，TFPI-2)基因表达的影响。方法选取食管鳞癌细胞株Eca9706，并用不同浓度的5-Aza-CdR处理该细胞株。MTT法检测干预前后细胞增长率的变化，FCM法检测干预前后细胞凋亡率的变化，RT-PCR技术检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2基因mRNA的表达，免疫组化检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2蛋白的表达。结果食管鳞癌细胞株Eca9706存在TFPI-2基因超甲基化状态，经5-Aza-CdR处理后，超甲基化状态解除，细胞增殖受到抑制，细胞凋亡率明显提高(P<0.05);细胞中TFPI-2蛋白表达明显增强，同时mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P<0.05)。结论 食管癌细胞系TFPI-2基因超甲基化可抑制其mRNA表达，当其超甲基化解除后，细胞增殖受到抑制，同时细胞凋亡率相应提高。【关键词】食管癌;组织因子途径抑制物-2;5-氮杂-2-脱氧胞苷;甲基化;免疫组化;逆转录聚合酶链反应;凋亡ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectsof5-Aza-2-deoxycytidine(5-Aza-CdR)interventiononthegrowthandproliferationofEca9706celllinandproteinexpressionoftissuefactorpathwayinhibitor-2(TFPI-2).MethoEca9706celllinewastreatedby5-azaCdRofdifferentconcentrations;MTT，flowcytometry，immunohistochemistryandRT-PCRwereusedtodeterminethecellgrowth，apoptosis，andtheexpressionofTFPI-2geneanditsprotein.Results Eca9706celllinehadhypermethylationofTFPI-2.Afterdemethylationby5-Aza-CdRtreatment，theproliferationofEca9706wasinhibited，theapoptosisratewasalsoincreasedsignificantlyintheconcentration-dependentmanner.RT-PCRdetectedthatmRNAexpressionofTFPI-2geneinEca9706celllinerecoveredsignificantly(P<0.05).Conclusion 5-Aza-CdRcanslowthegrowthofEca9706cell，increasetheapoptosisrate，reactivatetheTFPI-2genetranscriptionandproteinexpressionbydemethylation.KEYWORDS:esophagealcarcinoma;tissuefactorpathwayinhibitor-2;5-Aza-CdR;methylation;immunohistochemistry;RT-PCR;apoptosis组织因子途径移植物2(tissuefactorpathwayinhibitor,TFPI-2)是丝氨酸蛋白酶抑制物,在调控肿瘤细胞浸润转移方面起着重要作用。目前,关于TFPI-2在食管癌中的基因表达情况的分析研究尚少。本研究旨在探讨TFPI-2基因的失活机制，并寻找食管癌治疗的新靶点。材料与方法材料RPMI-1640培养基购自北京索莱宝生物科技有限公司;标准胎牛血清购自天津市灏洋生物制品科技有限公司;Trizol试剂购自MBI公司;RT-PCR试剂盒购自MBI公司;5-Aza-CdR购自Sigma公司;人食管癌细胞株Eca9706由郑州大学肿瘤生物学研究室惠赠。细胞培养和药物处理人食管癌细胞Eca9706以含10mL/L胎牛血清的RPMI-1640培养基，37℃、50mL/LCO2培养箱培养，每2～3d消化传代1次。MTT法检测干预前后细胞增长率的变化取对数生长期细胞，调整密度至5×104/mL接种于96孔板，按5-Aza-CdR浓度分为6组：0、0.4、、μmol/L，每组复设5个孔。待细胞贴壁后，分别于24、48、72h后加入MTT液，4h后弃去上清液，每孔加DMSO150μL，在490nm波长测定各孔吸光度值(absorbance，A)。细胞增殖抑制率(cellularproliferationinhibitionrate，CPIR)按公式计算：CPIR=(1-实验组A均值/对照组A均值)×100%。1.4 流式细胞仪(FCM)检测干预前后细胞凋亡率的变化取对数生长期细胞，按5×105/mL的密度接种于6孔板内，待细胞贴壁后加药，分组如下:对照组(0μmol/L),1.6μmol/L5-Aza-CdR组，25.6μmol/L5-Aza-CdR组，102.4μmol/L5-Aza-CdR组。每组均于5-Aza-CdR作用48h后消化收集细胞，700mL/L冰乙醇固定，流式细胞仪进行细胞凋亡测定。1.5 RT-PCR技术检测TFPI-2基因mRNA的表达分组同FCM，每组细胞均5-Aza-CdR作用48h。TFPI-2的上、下游引物分别为5′-GTCGATTCTGCTGTTTTCC-3′和5′-ATGGAATTTTCTTTGGTGCG-3′，合成产物为440bp;β-actin作为内参照，上下游引物分别为5′-AGGCATTGTGATGGACTCCG-3′和5′-AGTGATGACCTGGCCGTCAG-3′，合成产物为301bp。按照试剂盒说明书，用Trizol试剂提取细胞总RNA，经紫外分光光度计分析后，按Sigma公司RevertAidFirstStrandcDNASynthesisKit说明书操作。先逆转录制备单链cDNA，再以逆转录产物为模板，用上、下游产物进行PCR反应扩增目的基因。反应条件为:94℃预变性3min，然后94℃变性30s,51℃退火30s,72℃延伸30s，循环30次，最后72℃延伸5min,4℃保温。扩增片段经20g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定。1.6 免疫组化方法检测TFPI-2蛋白的表达取对数生长期细胞，按5×104/mL的密度接种于经预处理的盖玻片上，待细胞贴壁后加药(分组同RT-PCR)。培养48h后加入40g/L多聚甲醛溶液固定30min,30mL/LH2O2封闭内源性过氧化物酶，室温下10min,100mL/L动物血清封闭，室温下10min，滴加1∶100的稀释的TFPI-2抗体4℃过夜，二抗室温下1h，滴加辣根酶标记链霉卵白素，37℃孵育30min，DAB显色，苏木精复染，脱水透明封片。另取爬片滴加PBS液代替一抗作为阴性对照。结果判定:TFPI-2蛋白阳性信号均呈棕黄色颗粒样物质，位于细胞质内。光镜下随机选取10个视野(每个视野观察细胞数不少于100个)，按阳性细胞所占百分比进行结果判定。阳性率=(阳性细胞数/1000)×100%。1.7 统计学处理应用SPSS16.0软件进行统计学处理。实验数据采用均数±标准差(x-±s)表示，采用单因素方差分析加LSD两两比较法进行分析。检验水准α=0.05。结 果干预前后细胞增长率的变化经MTT检测，结果显示，实验组细胞抑制率明显高于未加药组，且随着作用时间的延长和浓度的增加而增加(表1)。表1 不同浓度的5-aza-CdR对Eca9706细胞增殖的影响2.2 干预前后细胞凋亡率的变化流式细胞仪分析可见，经不同浓度5-Aza-CdR诱导48h后，Eca9706细胞各处理组凋亡率分别为(13.76±0.47)%、(26.97±0.39)%、(41.03±0.19)%，与5-Aza-CdR诱导浓度成正比。与对照组[(1.39±0.27)%]比较差异有统计学意义(P<0.05)，且各浓度组间比较差异亦有统计学意义(P<0.05，图1)。以上实验重复5次。2.3 干预前后Eca9706细胞mRNA的表达情况扩增产物经琼脂糖凝胶电泳显示，Eca9706细胞中TFPI-2mRNA表达在各用药组和未用药组之间有明显差异，TFPI-2mRNA在未用药组细胞中未见表达。经.102.4μmol/L5-Aza-CdR处理后可见TFPI-2mRNA表达，表明在一定范围内随5-Aza-CdR药物浓度的增加TFPI-2mRNA表达逐渐增强(图2)。图1各组流式细胞凋亡散点图A:对照组;B:1.6μmol/L5-Aza-CdR组;C:25.6μmol/L5-Aza-CdR组;D:102.4μmol/L5-Aza-CdR组。图2 5-Aza-CdR处理前后Eca9706细胞TFPI-2mRNA的表达 M:DNAmarker;β-actin:301bp;TFPI-2:440bp;1:对照组;2:102.4μmol/L组;3:25.6μmol/L组;4:1.6μmol/L组;5:H2O对照组。,2.4干预前后免疫组化结果显示,经5-Aza-CdR作用Eca9706细TFPI-2蛋白的表达情况胞48h,TFPI-2蛋白的阳性表达率增加,对照组、1.6μmol/L组、25.6μmol/L组、102.4μmol/L组TFPI-2蛋白的阳性表达率分别为(2.10±1.42)%、(9.31±2.70)%、(14.72±3.50)%、(68.20±3.20)%,不同浓度组之间以及用药组与对照组之间的差异均有统计学意义(P<0.05,图3)。 图3 各组TFPI-2蛋白的表达情况3 讨 论人TFPI-2(hTFPI-2)基因定位于7q22区域,全长由8164个碱基组成,其cDNA全长为1222kb。其mRNA的启动子具有典型的管家基因特征,没有典型的TATA盒或CAAT盒,在推定的转录起始位点区域GC含量超过80%[1]。TFPI-2可在体内多种组织广泛表达,在这些组织内一旦出现肿瘤,TFPI-2的表达水平也会随之显著下降[2]。有研究证实,在绒毛膜癌、乳腺癌、前列腺癌、神经胶质细胞瘤、纤维肉瘤和胸部恶性肿瘤组织中,与肿瘤产生相关的TFPI-2表达水平减少可能与其启动子的甲基化密切相关[1,3-5]。启动子区cpG岛高甲基化在肿瘤形成机制中的确切作用尚不清楚,然而众多证据表明,肿瘤抑癌基因CpG岛异常的甲基化导致基因失活和转录抑制是肿瘤发生的重要机制之一[6-8]。目前,有体外实验表明,DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR通过去甲基化作用可使多种含有CpG岛的高甲基化抑癌基因重新表达,从而恢复抑癌功能[9]。本实验RT-PCR结果显示,TFPI-2在Eca9706细胞中无表达,经过不同浓度的5-Aza-CdR处理Eca9706细胞后,TFPI-2亦重新出现表达,且在一定范围内随药物诱导浓度的增大表达逐渐增强。MIZUNO等[10]研究表明,肿瘤细胞中DNMT的表达较正常的高4～12倍,也证实DNMT上调参与肿瘤发生。这与我们的实验结果一致。根据MTT实验可知,经过5-Aza-CdR干预处理过的Eca9706细胞增殖明显受抑制,且随着药物浓度的增加,抑制作用越明显。从本实验结果分析,DNA启动子区去甲基化能较明显地抑制食管癌细胞增殖,并与其诱导剂量呈正相关,推测这种抑制作用与去甲基化后重新激活TFPI-2基因的转录和表达有着直接关系;此外可能与去甲基化后诱导细胞凋亡有关。进而通过流式细胞仪分析,结果显示,经不同浓度5-Aza-CdR干预的Eca9706的细胞中,用药组与对照组相比细胞凋亡率凋亡率有所增加,并且与5-Aza-CdR诱导剂量有依赖性关系。BENDER等[11]在同等条件下用5-Aza-CdR处理恶性肿瘤细胞系和正常纤维细胞系时,发现肿瘤细胞增殖均被抑制,而纤维细胞增殖不被抑制。因此,5-Aza-CdR对Eca9706细胞增殖的抑制及凋亡的增加不是药物的毒性影响,可能是因为使TFPI-2重新表达的结果。目前，国外以TFPI-2为药物研究靶点，就TFPI-2在肿瘤治疗、肿瘤临床诊断、促进伤口愈合和动脉粥样硬化治疗等领域中的应用，也正在进行广泛深入的研究。本研究用甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理人食管癌Eca9706细胞株，检测TFPI-2基因表达的变化及其对细胞增殖和凋亡的影响，以期寻找治疗肿瘤的新靶点。【参考文献】HUBEF，REBERDIAUP，IOCHMANNS，etal.CharacterizationandfunctionalanalysisofTFPI-2genepromoterinahumanchoriocarcinomacellline[J].ThrombRes，203，109(4):207-215.MIYAGIiY，KOSHIKAWAN，YASUMITSUH，etal.cDNAcloningandmRNAexpressionofaserineprotein5andtissuefactorpathwayinhibitor-2[J].JBiochem，1994，116(5):939-942.RAOCN，SEGAWAT，NAVARIJR，etal.MethylationofTFPI-2geneisnotthesolecauseofitssilencing[J].IntJOncol，2003，22(4):843-848.KONDURISD，SRIVENUGOPALKS，YANAMANDRAN，etal.Promotermethylandsilencingofthetissuefactorpathwayinhibitor-2(TFPIageneencodinganinhibitorofmatrixmetalloproteinasesinhumangliomacells[J].Oncogene，2003，22(29):4509-416.STEINERFA，HONGJA，FISCHETTEMR，etal.Sequential5-Aza-2-deoxycytidi-ne/depsipeptideFK228treatmentinducestissuefactorpathwayinhibitor2(TFPI-2)expressionincancercells[J].Oncogene，2005，