检验项目标准操作规程

编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第⑶危急值报告：无危急值。⑷注意事项:①酶法测血清TC时，由于血清中大部分CHO是酯化的，而且血清基质对这项酶促反应有明显的影响，故不宜采用纯胆固醇结晶配制的溶液作为TC酶法分析的标准液，而应以准确定值的血清做为标准参考物质。②临床上已很少采用游离CHO测定，如需测游离CHO，最简便的也是用酶法，即在上述TC测定用酶试剂中省去CEH(胆固醇酯酶)即可，一般植于游离的CHO约占的TCH的30%左右。③酶法测定TCH反应达终点时间37℃不应超过5min.④试剂在500nm波长下空白吸光度应＜0.050,否则应视为过期试剂,不能再使用.甘油三酯测定（GPO--PAP法)一.实验原理：人体各种组织中广泛分布着甘油三酯，而占全身98%以上的甘油。酯则是贮存在脂肪组织中。甘油三酯的主要生理功能是氧化供能。机体在利用甘油三酯时，首先将其水解成甘油和脂肪酸，然后再分别将它们氧化降解。人体空腹时所需能量的50%-70%是由脂肪酸分解提供的。人体内的甘油三酯除来自食物之外，还靠体内自行合成，合成的场所主要是肝脏和脂肪组织。血清中甘油三酯的含量随年龄增长而有上升的趋势，尤其是体重超过标准的中年以上的人往往偏高。进食脂肪后，血清中甘油三酯上升，并可出现浑浊，显示乳糜微粒增多。正常成人，空腹时按1g/kg体重进食脂肪，一般2-4小时内血清甘油三酯达最高峰，8小时后恢复正常，脂肪清除作用差的人，清除时间延长。甘油三酯又称中性脂肪或真脂，是全身各种脂肪的主要成分，参与体内能量的储存。饮食对血中甘油三酯的影响很大。因此，采血化验时至少应空10-12小时。去游离甘油的GPO-PAP法第一反应:根据下述第一反应中的前处理反应，血清中的游离甘油被消除，第一反应中若有LPL或胆固醇酯酶混入后，标本中的甘油三酯被分解成游离甘油，产生负误差。本试剂第一试剂能抑制混人的LPL及胆固醇酯酶的活性，防止甘油三酯被分解，并消除游离甘油。反应式如下：TG+ATPGK甘油-3-磷酸+ATP甘油-3-磷酸+O2GPOH2O2+磷酸二羟丙酮H202过氧化氢酶H2O+O2第二反应:在第二试剂中的LPL及LPL活性化成分的作用下，血清中甘油三酯迅速分解成甘油及脂肪酸。所生成的甘油在ATP存在下，通过甘油激酶(GK)的作用，生成甘油-3-磷酸，后者又在甘油-3-磷酸氧化酶(GPO)的作用下生成过氧化氢，在过氧化物酶(POD)存在下，过氧化氢使4-氨基安替匹林与ESBmT氧化缩合，产生紫红色色素。通过测定紫红色色素的吸光度而求出甘油三酯的含量。抗坏血酸的影响在酶前处理反应中被消除。反应式如下：TG+ATPGK甘油-3-磷酸+ATP甘油-3-磷酸+O2GPOH2O2+磷酸二羟丙酮H202+4-氨基安替代比林+氯酚醌亚胺+H2O二.标本采集与处理:采血前两天不要进食含有大量脂肪的食物，空腹至少8小时以上，采集静脉血抗凝血或血清。样品在20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存至少可稳定6个月。三、检测方法：1、试剂的准备：试剂开瓶即可使用。2、检测步骤：全自动生化分析仪操作步骤：参数设置→试剂装载→校准→质控→样品加载→测定→结果审核→报告。3、校准：当试剂更换批号、出现质控漂移、仪器做完保养后及重要零件更换时，须按所用标准品说明书以y=ax+b进行线性校准。4、结果计算：全自动生化分析仪会自动给出检测结果四.质量控制：在测定每一批标本前先做正常值和异常值来两个水平的质控品，以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控（质控规则见生化室室内质控操作规程）.在控后方可进行标本测定,若失控，查明原因并采取措施。五、参考区间:合适水平：≤1.69mmol/L；升高：1.69～2.26mmol/L；临界范围：2.26～5.63mmol/L；极高水平：≧5.64mmol/L；六、临床意义:血清TG受生活习惯、饮食和年龄等多种因素影响，在个体内及个体间的波动较大。由于TG的半衰期短(5-15分钟),进食高脂、高糖和高热量饮食后,TG可明显增高，且以乳糜微粒的形式存在，后者会使血浆变得浑浊，甚至呈乳糜样。因此,必须在禁食12-16小时后静脉采集标本，以排除和减少饮食的影响。(1)增高:高TG血症也有原发的与继发的两类。前者多有遗传因素。其中包括家族性高TG血症与家族性混合型高脂(蛋白)血症等。继发的见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺功能低下、肾病综合征、妊娠、口服避孕药、酣酒等，但不易分辨原发或继发。大量前瞻性的研究证实，富含TG的脂蛋白是CHD的独立的危险因子，TG增加表明患者存在代谢综合征，需要治疗。

⑵减低:甘油三酯降低，胆固醇正常，则临床意义不大。减低见于低β-脂蛋白血症和无β-脂蛋白血症;严重的肝脏疾病、吸收不良综合征、甲状腺功能亢进症、肾上腺皮质功能减退症等。七.附注：(1)干扰因素:①胆红素>100μmol/L或抗坏血酸>170μmol/L会出现负干扰。②血红蛋白的干扰是复杂的，它本身的红色会引起正干扰。溶血后，红细胞中的磷酸酶可水解磷酸甘油产生负干扰。当出Hb<1g/L时反映为负干扰，Hb>lg/L反映出正干扰，但Hb<2g/L时干扰不显著，明显溶血标本不宜用作TG测定.⑵方法局限性：本试剂的线性范围可达11.3mmol/L，如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液进行稀释，重新测定，结果乘以稀释的倍数。⑶危急值报告：无危急值。⑷注意事项:①我国现阶段允许一步酶法与两步酶法并存，要求逐步过渡到统一采用两步法。在未统一方法之前，实验室报告TG测定结果时应注明去FG(游离甘油)值或未去FG值，这将有助于临床医生对结果的正确判断.②正常人血清FG浓度平均约0.11mmol/L，对于变动幅度较大的TG来说，由此引起的误差是可以忽略的，但有些标本中FG明显增高，以致影响对比水平的判断，例如糖尿病、情绪应激、含甘油的药物(复方甘油、甘油果糖、甘露醇、硝酸甘油)、静脉营养等如TG高而血清不挥浊者应排除高TG的可能。

③酶法测定TG时，脂蛋白脂肪酶(LPL)除能水解TG外，还能水解甘油一酷和甘油二酯(血清中后两者约占总TG的3%),亦被计算在FG中，实际上测定的是总甘油。

④酶法测定TG反应达终点时间37'C不应超过8min.

⑤试剂在500nm波长下空白吸光度应＜0.050,否则应视为过期试剂,不能再使用.乙肝五项检测（ELISA法）一、检测目的：乙型肝炎病毒标志物(HBsAgHBsAh、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检测。二、测定原理：分别采用双抗体（抗原）夹心法和竞争法。HBsAg、HBsAb原理：采用单克隆抗-HBs(HbsAg)包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP(HBsAg-HRP),当标本中存在HBsAg（HBsAb）时，该HBsAg（HBsAb）与包被抗-HBsAg（HBsAb）结合并与抗-HBsAg-HRP（HbsAb-HRP）结合形成抗-HBsAg（HBsAb）-抗-HBsAg-HRP（HBsAb-HRP）复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。HBeAg原理：采用抗-HBe包被反应板，加入待测标本，同时加入抗—HBe-HRP，如待测样本中抗HBeAg时，就与包被抗-HBe、抗—HBe-HRP结合形成复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。HBeAb原理：采用抗-HBe、HBeAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBe-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBe含量高，则抗—HBe-HRP与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。HBcAb原理：采用基因工程重组HbcAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBc含量高，则抗—HBc-HRP与HBcAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。三、操作步骤：1、将试剂从冷藏室中取出，30分钟后平衡至室温方可开启使用。2、用蒸馏水将PBST浓缩液20倍稀释，作为洗液。3、将微孔条固定于支架上，按序编号。4、每孔加入标测标本50ul，设阴阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或一滴），并设空白对照1孔，质控1孔。每孔加酶结合物50ul（或一滴），（空白对照除外），充分混匀。封板。5、置37℃温育30分钟。6、用洗板机洗板5次，将板倒置于滤纸上拍干。7、每孔加显色剂A液、B液50ul（或一滴），充分混匀，封板置37℃孵育15分钟。8、每孔加终止液50ul（或一滴），充分混匀。9、用酶标仪读数，取波长450nm,先用空白调零，然后读取各孔OD值。四、结果判断：样品OD值／阴性对照平均OD ≥2.1，判断为阳性，否则为阴性。阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。五、注意事项：1、冷藏环境中取出的试剂盒应在室温平衡30分钟后方可使用。2、使用试剂前摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。3、结果判定必须在反应终止后10分钟内完成。4、不同批号的试剂不可混用。5、待测标本不可用NaN₃防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。6、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。六、生物安全防护：1、在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。2、如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。3、操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）。4、HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸100℃10分钟、高压蒸汽灭菌121℃15分钟或干热160℃2小时均可灭活HBV。5-10g/L次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林37℃72小时，0.5%过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。七、临床意义：乙肝病毒血清标志物的临床意义（即常说的乙肝五项或称两对半）序号HBsAg表面抗原抗-HBsHBsAb表面抗体HBeAgE抗原抗-HBeHBeAbE抗体抗-HBcHBcAg核心抗体临床意义出现率9种常见模式1-----过去和现在未感染过HBV。1-30%2----+(1)既往感染未能测出抗-HBs；(2)恢复期HBsAg已消，抗-HBs尚未出现；(3)无症状HBsAg携带着。5-10%3---++(1)既往感染过HBV；(2)急性HBV感染恢复期；(3)少数标本仍有传染性。①HBV感染已过；②抗HBs出现前的窗口期2-10%4-+---(1)注射过乙肝苗有免疫；(2)既往感染；③假阳性1-6%5-+-++急性HBV感后康复。0.5-5%6+---+(1)急性HBV感染；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染性弱。10-15%7-+--+既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢复期。5-15%8+--++(1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染性弱。即俗称的“小三阳”。5-10%9+-+-+急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制，传染强。即俗称的“大三阳”。30-40%16种少见模式10+----(1)急性HBV感染早期,急性HBV感染潜伏期；(2)慢性HBV携带者，传染性弱。11+--+-(1)慢性HBsAg携带者易转阴；(2)急性HBV感染趋向恢复。12+-+--急性HBV感染早期或慢性携带者，传染性强。13+-+++(1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性携带者。14++---(1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感染。15++--+(1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感染。16++-+-亚临床型或非典型性感染。17++-++亚临床型或非典型性感染。18+++-+亚临床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫复合物，新的不同亚型感染。19--+--(1)非典型性急性感染；(2)见于抗-HBc出现之前的感染早期，HBsAg滴度低而呈阴性，或呈假阳性。20--+-+非典型性急性感染。21--+++急性HBV感染中期。22-+-+-HBV感染后已恢复。23-++--非典型性或亚临床型HBV感染。24-++-+非典型性或亚临床型HBV感染。25---+-急性HBV感染趋向恢复。7种罕见模式26+++++①一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs（常见）；②血清从HBsAg转化为抗HBs的过程（少见）。27-+++-28-++++29--++-30+-++-31+++--32++++-乙肝五项检测(胶体金法)一、检测目的乙型肝炎病毒标志物(HBsAgHBsAh、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检测。二、测定原理HBsAg、HBsAh、HBeAg均采用双抗体(原)夹心法原理。用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBs鲰单克隆抗体HBsAh，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清／血浆中HBsAg；用HBsAg重组抗原和链霉亲和素一BSA包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的HBs如重组抗原和生物素一BSA及其他试剂，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清／血浆标本中HBsAb；用抗HBeAg单克隆抗体(Ehl)包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBeAg单克隆抗体(Eh2)。应用双抗体夹心法原理，用于定性检测血清或血浆中HBeAg。HBsAg、HBsAb、HBeAg测试时，将血清／血浆标本滴人试剂板加样处．标本在毛吸效应下向E层析，如标本中含有相应的待测物质，在测试区(T)内会出现一条红色条带，则是阳性结果。如标本中不含有相应的待测物质，则测试区(T)将没有红色条带，是阴性结果。无论待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内(c)。质控区内(c)所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。HBeAh、HBcAh采用竞争法原理。用HBeAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以乳胶标记的鼠抗HBeAg单克隆抗体。应用竞争抑制法原理，定性检测血清／血浆巾HBeAI，；用HBcAg重组抗原包被硝酸纤维素膜，配以乳胶标记的HBcAb单克隆抗体，应用竞争抑制法原理，定性检测血清／血浆中HB。Ah。测试HB。Ah、HBcAb时，将血清／血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛吸效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体．则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原则同膜上测试区(T)的单克隆抗体全部结合。阳性标本，测试区(T)将没有红色条带；阴性标本，测试区(T)会出现明显的红色条带c无论相应的抗体是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内(c)。质控医内(c)所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准．三、操作步骤具体方法参照试剂盒说明书。举例如下：在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书．使用前将试剂板和血清／血浆标本恢复至室温(20～30％)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温)，在l小时内应尽快地使用。1.将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清／血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的五个加样子L中(每孔2。3滴)。2.加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。在20分钟后读取的结果无效．四、结果判定由于前三个相关项目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗体(原)夹心法原理，后两个项日HBeAb、HbcAb使用竞争法原理。因此前一：个项日与后两个相关项目判读方法是不同的．请注意区别。l.HBsAg、HBsAb、HbeAg(1)阳性(+)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。(2)阴性(一)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。(3)无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。(4)注意：在进行HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应该判为阳性结果。2HBeAb、HBcAb(1)强阳性(+)：仅质控区(c)出现一条红色条带．在测试区(T)内无红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。(2)弱阳性(+)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内有非常弱的红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。(3)阴性(一)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(c)。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。(4)无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。五、注意事项l.请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定无效。2.乳胶法乙肝五项检测试剂板(血清／血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在，不能确定血样中病毒的含量。3.由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。六、生物安全防护1.在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。2.如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。3.操作前一定要做好自身防护(穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套)。4.HBV对低温、干燥、紫外线、70％乙醇均有耐受性。煮沸100℃10分钟、高压蒸汽灭菌121℃15分钟或f热160℃2小时均可灭活HBV。5～10g／L次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林37℃72小时，O5％过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。七、临床意义1.HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态。HBsAg也可从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。2.HBsAh阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期，或既往曾感染过HBV，现在已恢复，而且对HBV有一定的免疫力；同时，HBsAh阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果，即接种免疫成功的指标。3.HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝细胞有进行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于预测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均为阳性的孕妇，可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿，其感染的阳性率为70％～90％。4.HBeAh阳性：多见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出HBeAb；在HBsAg和HBsAh阴性时，如能检出HBeAh和HhcAh，也能确诊为乙型肝炎近期感染。5.HBcAh—lgG阳性：高滴度表示正在感染}iBV，低滴度则是既往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。6.HBcAb—IgM阳性：是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示检验对象血液有较强传染性。同时，HBcAh—IgM阳性还见于慢性活动性乙型肝炎。乙肝表面抗原检测(胶体金法)一、检测目的乙型肝炎病毒标志物HBsAg检测。二、测定原理HBsAg采用双抗体(原)夹心法原理。用抗HBsAg多克隆抗体包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的抗HBs鲰单克隆抗体HBsAh，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清／血浆中HBsAg；用HBsAg重组抗原和链霉亲和素一BSA包被硝酸纤维素膜，配以红色乳胶标记的HBs如重组抗原和生物素一BSA及其他试剂。HBsAg测试时，将血清／血浆标本滴人试剂板加样处．标本在毛吸效应下向E层析，如标本中含有相应的待测物质，在测试区(T)内会出现一条红色条带，则是阳性结果。如标本中不含有相应的待测物质，则测试区(T)将没有红色条带，是阴性结果。无论待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内(c)。质控区内(c)所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。三、操作步骤具体方法参照试剂盒说明书。举例如下：在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书．使用前将试剂板和血清／血浆标本恢复至室温(20～30％)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温)，在l小时内应尽快地使用。1.将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清／血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的五个加样子L中(每孔2。3滴)。2.加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。在20分钟后读取的结果无效．四、结果判定HBsAg(1)阳性(+)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。(2)阴性(一)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。(3)无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。(4)注意：在进行HBsAg测试时，测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应该判为阳性结果。五、注意事项l.请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定无效。2.胶体金法乙肝表面抗原检测试剂板(血清／血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在，不能确定血样中病毒的含量。3.由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。六、生物安全防护1.在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。2.如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。3.操作前一定要做好自身防护(穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套)。4.HBV对低温、干燥、紫外线、70％乙醇均有耐受性。煮沸100℃10分钟、高压蒸汽灭菌121℃15分钟或f热160℃2小时均可灭活HBV。5～10g／L次氯酸钠30分钟，1：4000福尔马林37℃72小时，O5％过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。七、临床意义HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态。HBsAg也可从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。沙眼衣原体IgG抗体检测（胶体金法）一、检测目的：用于检测试验血清中的沙眼衣原体抗体IgG。二、检验原理：用沙眼衣原体抗原固相硝酸纤维素膜，应用渗滤式间接法原理，检测血清中沙眼衣原体抗体IgG。三、样本要求：1、

血清样品不能溶血，应为新鲜血清或2℃～8℃条件保存不超过一周。

2、

高脂血症血清不能使用。四、检验方法：1、取出试剂盒，室温平衡20-30分钟；1、

滴入洗涤液一滴于反应板中央孔中，待液体将膜完全湿润；

2、

加入待测血清150µl（若用样品吸管则加4滴）于反应板孔中，待液体充分吸入；

3、

滴加三滴金标液于反应板孔中，待液体充分吸入；

4、

渗入三滴洗涤液于反应板孔中，待液体充分吸入。五、结果解释：阳性：反应板孔中C端出现红色圆斑，T端出现红色圆斑，为沙眼衣原体抗体IgG阳阴性：反应板孔中C端出现红色圆斑，T端不出现红色圆斑，为沙眼衣原体抗体IgG阴失效：反应板孔中C端不出现红色圆斑，或C端、T端均不出现红色圆斑，为试剂盒失效。六：检验方法的局限性：1、

本试剂试验仅用于检测沙眼衣原体抗体IgG而非直接检测沙眼衣原体抗原,因而阳性结果并不能确诊是沙眼衣原体感染。对患者状况的诊断应结合患者临床体征与症状和试验结果的综合分析。

2、

抗体含量低的血清样品，不能被检测出来是可能的。部份沙眼衣原体感染的患者，不产生抗体或产生少量的抗体。此时，可能显示阴性结果。3、本试剂不能确定沙眼衣原体抗体IgG的确切含量。七、注意事项：1、必须使用新鲜血清或2-8℃放置3天内的血清测定。少数标本（高脂血、高胆红素、溶血）背景轻微偏深，一般不影响结果判断。2、加有抗凝剂、促凝剂的标本渗滤速度缓慢，底色太红，影响结果判读，建议不使用。3、加液体的各步操作之间不得有时间间隔；同一步骤中所加液体应迅速一次加入后等其渗入。4、超过规定时间出现的结果无效。5、质控点的强弱并不代表试剂质量的优劣。6、不同产品、同产品不同批次之间的金标液、洗涤液严禁混用。7、解脲支原体抗体、人型支原体抗体、淋球菌抗体、类风湿因子对试剂盒检测结果基本无影响。八、临床意义：沙眼衣原体感染病人血清中可检出特异性抗体。lgM出现较早，持续约1个月，其阳性提示近期感染沙眼衣原体，可作为早期诊断的指标；lgG出现较晚，持续时间较长，可用于回顾性诊断和流行病学调查。阳性：见于沙眼、成人包涵体结膜炎、男性尿道炎、女性宫颈炎和输卵管炎、性病淋巴肉芽肿等。淋病奈瑟菌检测一、涂片镜检1、检测目的查找标本中白细胞内的革兰阴性双球菌，规范淋病奈瑟氏菌的涂片检测，保证检测结果的准确性。2、标本采集生殖道分泌物，无菌留取。3、玻片的制备（1）取洁净载玻片，在有磨砂的一面写上编号（化验单尾号或标本号）（2）在生物安全柜内涂片，自然干燥后进行革兰染色及显微镜检查。4、染色（1）涂片经火焰固定后，加结晶紫染液染1分钟，流水缓慢冲去染液。（2）吸水纸吸干玻片水分后加碘液媒染1分钟，水洗。（3）加脱色液，复染30秒，水洗。（4）加复染液，复染30秒，水洗（5）玻片完全干燥后，显微镜镜检。5、镜检与结果报告阳性：革兰染色显微镜下为革兰阴性双球菌，呈双肾形成对排列。结果报告：细胞内可见革兰阴性双球菌。6、参考范围：阴性7、质量控制（1）每次染色时应同时用已知的革兰阳性菌和阴性菌进行对照试验，以检查染色液的质量。（2）结晶紫与草酸铵溶液混合不能保存太久，如有沉淀则应重新配制。（3）采样时，女性拭子插入子宫颈3cm处取样，避免阴道分泌物污染拭子。（4）对于不能及时送检的标本应常温保存，不可以冷藏。8、生物安全防护（1）操作前应做好自身防护（穿工作服、戴口罩、胶皮手套）。（2）在生物安全柜中进行涂片操作。（3）所有不再需要的标本，培养物和其他生物性材料，应置于专用和有生物危害标记、用于处置危险废弃物的防漏容器内。（4）试验操作工作面应以500ppm“84”消毒液擦试，再用紫外线灭菌灯照射2小时。（5）所有弃置的实验室生物标本，培养物和被污染的废弃物，应通过高压消毒或其他无害化处理。二、生物酶法：1、检测目的：用于淋球菌的快速检测2、检验原理：淋球菌具有一种特异性酶反应测定系统，当标本中含用此酶时，会发生生化反应，同时伴有气泡产生。3、样本要求：标本为初段尿，用一次性尿杯采集；也可用无菌拭子采宫颈分泌物（女性）或尿道分泌物（男性）；所采的标本应在1小时内使用。检验方法：1）、取一个本产品所配的反应试管，加约2mL（约在试管刻度下1mm处）标本（若为尿，直接使用；若为分泌物，需用无菌生理盐水涮洗至试剂盒所配的反应试管中，弃去拭子）。2）、垂直滴加试剂3滴，塞紧管塞，轻轻摇匀。3）、放置5分钟后（轻度病人可延至10分钟），再轻轻摇匀一次（若已产生气泡不必再摇），观察反应试管内尿液上部气泡形成情况，20分钟后的结果无效。5、检验结果的解释：液面上部形成一层白气泡或液面上层管壁形成一圈细小的白气泡，即可判为阳性。液面无气泡或气泡较少，未形成一圈，即可判为阴性。6、检验方法的局限性：由于淋球菌检测试剂盒依据的是淋球菌所具有的特异性酶，生殖道大多数杂菌不具有这种酶，有些杂菌虽具有这种酶但活性很低，常量情况下不足以引起假阳性反应，但在异常情况下，杂菌数量大量增加或酶活力明显增加，都可能产生假阳性结果，因此特异性不能保证100%，特别对于女性患者而言，特异性可能更低。女性患者还要注意月经期间和白带过多时，会干扰试剂检测，出现交叉反应。建议避开经期内检测；对于其它体检标本，采用本试剂检测呈阳性结果时，应考虑有无上述情况，并进行细菌培养，根据病史综合判断；部分感染者（包括儿童）是由于受到一些不良的公共卫生设施如公共浴池、游泳池和公共便盆等不洁物品污染所致，并无不良性接触史，因此出现阳性结果时应慎重对待，必要时可同时进行细菌培养；如果使用血尿标本或严重尿蛋白标本可能产生假阳性结果，因些也不能使用这类标本。7、注意事项：1）、本产品应由专业检测人员使用，在室温（15-30℃）和相对湿度（65%±20%）更好下操作。2）、滴加试剂时，试剂滴瓶应垂直。3）、临床的诊断与治疗，不能依赖单一检测结果，由于本产品为一种快速筛选试剂（非确诊试剂），灵敏度较高，因此对于检测结果阳性者应考虑口才的性接触史及临床症状，综合判断，建议选用淋球菌培养基做细菌培养进行确认。4）、操作时应带手套，试剂勿与皮肤、眼接触，一旦接触可用大量清水冲洗。5）、每次测试时，应注意反应试管的管塞是否塞紧，否则影响结果。6）、加入试剂后必须在20分钟内观察结果，否则整个试验要重做。7）、尿液标本应在1小时内测定，否则可能影响结果，应重新取样。8）、阳性试验用过的反应管在处理之前，应打开管塞，否则阳性反应产生的气体可能迸开管塞，管内液体污染实验室。9）、所用标本及其培养废弃物应视为有潜在传染性的物质，应按传染病实验室操作规范处理。8、临床意义：淋病奈瑟菌是常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜。如单纯性淋病、盆腔炎、淋菌型结膜炎。梅毒血清学筛查一、ELISA方法1、检测目的规范梅毒螺旋体抗体检测的操作标准，确保检测结果的准确性。2、范围适用于本实验室对待检标本中梅毒螺旋体抗体的检测。3、检测原理采用基因表达的TP抗原包被微孔板，加入待测标本，同时加入用HRP标记基因重组TP抗原，当标本中存在抗TP抗体时，该抗TP抗体与包被的TP抗原结合并与TP抗原-HRP结合形成TP抗原-TP抗体-TP抗原-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。4、样本采集无抗凝静脉血2ml，标本3000转/分钟离心，10分钟。当日不做的标本离心后及时放入冰箱中冷藏（2℃-8℃）。实验前将标本室温平衡30分钟以上。5、操作步骤：1）、平衡：将试剂盒各组份从盒中取出，平衡至室温(18℃-25℃)。微孔板开封后，取出所需数量，余者即时以自封袋封存。2）、配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀(如有晶体应充分溶解)，浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。3）、编号：将微孔板条固定于支架，按序编号。4）、加样：按顺序分别在相应孔加入50ul待测样品及阴、阳性对照血清。5）、加酶：分别在每孔中加入酶标记抗原100ul，轻拍混匀。6）、温育：置37℃温育60分钟。7）、洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤后扣干(每次洗涤保持30-60秒的浸泡时间)。8）、显色：每孔加底物A、B各50ul,轻拍混匀，置37℃暗置20分钟。9）、终止:每孔加终止液50ul，混匀。10）、测定：用酶标仪测定各孔OD值(双波长450nm/630nm)。6、结果判定1）、阴性对照：正常情况下，阴性对照OD值≤0.1。2）、阳性对照：正常情况下，阳性对照孔OD值应≥0.5。(阳性对照OD值若超出正常范围应舍弃，如果所有阳性对照孔OD值都超出正常范围，应重复实验。)3）、临界值(C.O.)的计算：临界值(C.O.)=阴性对照均值×2.8(阴性对照孔OD值低于0.05时以0.05计算)4）、结果判定：样品OD值S/C.O≥1者为梅毒抗体阳性;样品OD值S/C.O<1者为梅毒抗体阴性★初试阳性者应重新取样双孔复试。7、报告检测结果1）、实验操作人员将最终测定结果记录在相应的实验结果记录单中并确认签字。2）、实验操作人员提交最终检测报告。8、注意事项1）、样本的加样量使用微量加样器准确加入。酶标记抗原需用微量加液器加液，并经常校对其准确性。加酶标记抗原时，注意勿使微量加液器的加样头接触样本以避免样本间相互污染。加试剂前，应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。2）、梅毒螺旋体抗体检测必须符合实验室管理管控规范和生物安全守则的规定，严格防止交叉感染，严格健全和执行消毒隔离制度。所有样品、洗涤液和各种废弃物应按传染物处理。3）、梅毒螺旋体抗体检定结果的判定必须以酶标仪读数为准。样本的酶标仪读值与样本中抗体的滴度没有一定的必然联系。4）、任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗体存在，所以阴性结果任何时候不能排除含有梅毒螺旋体抗体暴露和感染的可能。5）、不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。6）、测试剂盒应于2-8℃避光保存，当天剩余试剂及时放回冰箱中保存。二、乳胶层析法1、检测目的：梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性性传播性疾病。当病原体侵入人体后，可刺激人体的免疫系统产生抗梅毒螺旋体的特异性抗体，采用胶体金免疫检测技术，能够快速检测到人血清{血浆)中的梅毒螺旋体抗体，为临床提供诊断和预防。适用于性病、高危人群、无偿献血员现场的初筛。2、检验原理：本品采用胶体金免疫检潮技术和层析原理，定性检测血清（或血浆)样本中的梅毒螺旋体抗体。兔抗体可与胶体金标记抗原结合形成抗原抗体复合物．由于层析作用复台物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au—TPAg—TPAb—TPAg'’夹心物而凝聚显色。游离的胶体金标记梅毒抗原则在对照线处与预包被的抗TP抗体结合而凝集显色。阴性标本则仅在对照线处显色。

3、样本要求：1）、静脉的血清、血浆样本必须在无菌条件下，并避免样品溶血。

2）、血清和血浆样品(EDTA抗凝)收集后7天内检测．样品须放在2—8℃保存．如果大于7天则须冷冻保存。4、检验方法：在进行测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂盒和待测样本恢复至室温（8—25℃)

1）、从原包装中取出试剂。在1小时内应尽快的使用。

2）、将试剂置于干净平坦的台面上，在加样孔(S)内使用微量加样器加入100ul样本。

3）、20±2分钟观察并记录试验结果。5、结果判断：1）、阳性：试剂盒在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测区的紫红色条带降约可见．建议对该样本重复试验，并使用其他方法确认。

2）、阴性：试剂盒只在对照区位置出现一条紫红色条带。

3）、失效：不出现紫红色条带或仅在检测区出现一条紫红色条带。表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中抗体的含量过高。在此情况下，应再次仔细阅读说明书。并将待测样本稀释后甩新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在。应立即停止使用此批号产品。并与当地供应商联系。

注意：测试区(T)内的紫红色条带可呈现颜色深浅的现象。但是．在规定的观察时间内．不论该色带颜色深浅。即使只有非常弱的色带也应判定为阳性结果。6、注意事项：1）、本试剂盒仅用于体外诊断试验。仅用于人血清（浆)．其它体液和样品可能得不到准确的结果。

2）、样本的加样建议使用微量加样器准确加入。

3）、试验环境应保持一定湿度(60％以下），避风。避免在过高温度下进行试验。

4)、试剂从包装中取出后。应尽快进行试验，避免放置于空气中过长时间，导致受潮。

5）、试剂盒可在室温下保存．谨防受潮。低温下保存的试剂应平衡至室温方可使用。

6）、对于那些含有感染源和怀疑含有感染源的物质应有合适的生物安全保证程序。下列为有关注意事项：

（1）带手套处理样本和试剂。

(2)不要用嘴吸样。

(3)不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜。

(4)用消毒剂对溅出的样本或试剂进行消毒。

(5)按当地的有关条例来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物。

(6)试剂盒各成份在正当处理和保存的情况下直至效期都保持稳定．不能使用过效期的试剂盒。

7）、检测线颜色的深浅的程度与样品中抗体的滴度没有一定的必然联系。22分钟后判读．结果无效。

8）、任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度的抗体存在，所以阴性结果任何时候不能排除台有梅毒螺旋体暴露和感染的可能。本品检测阳性样本．需用其它方法作进一步的确认。三、临床意义：梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种性传播疾病(STD),病原体为苍白密螺旋体(TP),俗称梅毒螺旋体[1]。由于梅毒只感染人类,因而人是梅毒的唯一传染源;梅毒螺旋体对人体的黏膜及皮肤具有亲和力,故可通过黏膜或有破损的皮肤进入人体,经淋巴系统及血液循环,播散至全身,几乎可以累及全身各器官和组织。人体感染梅毒后4～6月就能在体内检测到特异性抗体。近年来,梅毒在我国的发病率呈逐年增加的趋势〔1〕,选择敏感性及特异性高的诊断方法,对该病的防治具有重要意义。优生五项检测一、检测目的规范风疹病毒IgG抗体、巨细胞病毒IgM抗体和IgG抗体的检测；血清抗弓形虫IgM抗体和IgG抗体测定，用于诊断由弓形体病毒引起的疾病，如被携带病毒的动物抓、咬后引起的静脉血管炎，淋巴结肿大甚至引起脑炎等，另外，孕前检查对杜绝由弓型体病毒引起的先天性畸形是十分必要的。二、检测方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测IgM与IgG抗体。三、检测原理将纯化风疹病毒抗原（重组的HCMV抗原、弓形虫体抗原）包被微孔板，加入待测血清，若其中含有抗IgG（IgM）类抗体则与载体上的抗原结合，再加入HRP标记的抗人IgG（IgM）抗体，加酶底物/色原显色，所测即为抗IgG（IgM）类抗体。显色程度与抗体水平成正比。四、实验条件1、实验室应具有空调、离心机、加样器、水浴箱、酶标仪等设备。2、检验人员应经过操作前培训。3、用酶标仪测定。五、操作程序1、样本采集：无抗凝静脉血2ml，当日不做的标本4℃保存，必要时-20℃冻存。2、操作步骤：风疹IgG巨细胞IgG 待检血清1：11稀释（取100ul标本稀释液加入反应板孔内，弓形虫IgG 再加10ul待检血清），同时预留阴、阳性及空白对照共5孔。加入阴性对照3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。→ 轻轻震荡后置37℃温育30分钟→ 洗板5次，每次浸泡30-60秒→每孔加入100ul酶标工作液，空白孔除外。置37℃温育30分钟→洗板5次，每次浸泡30-60秒→每孔加入底物A、B液各50ul→轻轻震荡后置37℃温育10分钟→每孔加入终止液50ul轻轻震荡→酶标仪比色巨细胞IgM弓形虫IgM 待检血清50ul加入反应孔中，同时预留阴、阳性及空白对照共5孔。加入阴性对照3孔，阳性对照1孔，各50ul对照血清。空白对照1孔空置。→轻轻震荡后置37℃温育30分钟→洗板5次，每次浸泡30-60秒→每孔加入50ul酶标工作液，空白孔除外→置37℃温育30分钟→洗板5次，每次浸泡30-60秒→每孔加入底物A、B液各50ul，轻轻震荡后置37℃温育15分钟→每孔加入终止液50ul轻轻震荡→酶标仪比色3、结果判定：①、阳性：样品OD值≥1.1*Cutoff值；②、阴性：R≤0.9*Cutoff值；③、可疑结果：在±10%Cutoff值范围内为可疑，应重复测定，重测仍可疑，可用其他方法测定。六、参考区间正常人血清抗体IgG、IgM为阴性。七、质量控制1、试剂盒保存在2-8℃，在有效期内使用。微孔条密封、干燥保存。检测前试剂盒到室温（18-25℃）2、试剂盒勿于高温、阳光照射环境下使用。3、标本2-8℃可保存7天，-20℃冷冻可保存至6个月。避免反复冻融标本。4、不同厂家、不同批号试剂不可混用，不得使用过期试剂。5、溶血、脂血、细菌污染血清不宜使用。6、洗涤微孔板时应彻底，孔内残留液体应在吸水纸上拍干，否则会影响测试结果。7、检验人员应经过操作前培训，熟悉判读结果；所使用加样器，酶标仪设备应定期进行校正，以确保实验数据的稳定。八、临床意义1、风疹病毒：风疹病毒的感染对孕妇的危害是很大的，妊娠期间风疹病毒感染可造成死胎、自然流产或严重的婴儿畸形，其感染严重程度主要取决于感染发生在妊娠的哪个时期。如在妊娠前8周内感染，自然流产率达20%，第12周几乎肯定可以导致胎儿感染并出现严重后遗症，其他还可引起心脏和眼的缺陷、视网膜病变、听力缺损、糖尿病和其它内分泌疾病、神经性耳聋、青光眼等。母亲妊娠早期感染风疹病毒几乎都可引起胎儿广泛持续的多器官感染，导致死胎。（1）如IgGAb阳性而IgMAb阴性，表示近期无风疹病毒感染，并且于曾经有过既往感染(IgGAb阳性)，已获得了保护性抗体，可以不必担心风疹病毒的侵袭。（2）如IgGAb和IgMAb全部为阴性，说明从未受过风疹病毒的感染，此时如已怀孕，则直至婴儿出生，你都应该进行风疹病毒血清学监测；如双份血清IgGAb阳性，且滴度升高4倍以上，应该考虑已有风疹病毒的感染。2、巨细胞病毒：（CMV）是一种古老的病毒，几乎所有的人在一生中某一时期均能感染此病毒。该病毒感染后的临床表现与患者的个体免疫能力和年龄有关。孕妇严重的宫内感染可导致宫内死胎和新生儿死亡。新生儿的巨细胞病毒感染可在（1）分娩过程中经过母亲产道时的接触而感染，（2）或通过母乳喂养感染，（3）还可通过多次输血感染。大多数新生儿感染巨细胞病毒后多无不良反应，但对早产儿和体弱儿有较大的危险，以神经肌肉受损为主要特点。幼儿与儿童感染后多无明显症状，偶见肝脾肿大、肝功能异常和呼吸道疾病。青少年与成人感染多无症状，少数可出现发热、肝炎、全身淋巴结肿大或各种疹子，少见的并发症有肺炎、心肌炎、心包炎、神经炎、神经根炎、脑炎；细菌性脑膜炎、血小板减少性紫癜、溶血性贫血和视网膜炎。（4）CMV对使用免疫抑制剂的患者危害较大，可引起肺炎、肝炎及全身性疾病，最终导致死亡。IgG+说明有过既往感染史，现在已有了保护性抗体。IgGab双份血清滴度4倍以上升高其中任何一项都能说明近期有过感染。IgM-没有受到过CMV的感染，但对这样的孕妇来说，应在孕期进行血清学监测，避免孕期发生原发性感染。3、弓形虫：弓形体对妊娠有很重要的影响。被弓形体感染的孕妇，不论其有无临床症状，常可通过胎盘将弓形虫传给胎儿，从而直接影响胎儿的发育，使胎儿严重致畸，甚至死亡，亦可发生流产、死产、早产或增加妊娠合并症。感染发生得越早，胎儿受损越严重。（1）感染发生在妊娠头三个月，多会引起流产、死产、或生下无生活能力的和发育有缺陷的婴儿；（2）在妊娠中三个月感染，多会出现死胎、早产和严重的脑、眼疾患；（3）在妊娠晚期，因胎儿已逐渐成熟，此时母体如受到感染，胎儿可发育正常，亦可出现早产或出生后才出现症状，表现为各系统不同程度的损坏。据报道，偶见孕期感染弓形虫的胎儿在出生后数年甚至成人后才表现出弓形虫病。抗弓形虫的IgG与IgM抗体。若IgGAb阳性而IgMAb阴性，表示此人有过即往感染，若IgGAb和IgMAb同时阳性，表示现在体内有弓形虫感染；若弓形体IgG滴度≥1:512或双份血清IgGAb滴度4倍以上升高，也可证明现在有弓形虫感染。如IgG与IgMAb都为阴性，则说明该患者从未有过弓形虫感染。促甲状腺素检测（电化学发光法）一、检测用途用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的促甲状腺激素（thyrotropin,TSH）含量。二、检测原理采用双抗体夹心法原理，反应分三个步骤进行。·第1步：50µl标本、生物素化的抗TSH单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗TSH单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。三、样品的收集和保存血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素锂、钠、铵；EDTA-K3；枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。标本在2－8度可稳定7天，-20度可稳定1个月。只能冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。四、检测步骤孔别校准品孔（ul）待测样品（ul）S1-S650-待测样本-50酶结合物5050轻振混匀，37℃温育60分钟（温育时，请加封板膜）后，弃孔内液体，扣干加入洗涤液每孔300ul或注满，静置10秒种甩去扣干，重复5次加入底物A液和B液各50ul或1滴/孔，轻振混匀，室温避光放置0-5分钟，测发光值。五、结果计算对每一个标本，仪器会根据标准曲线自动计算TSH含量，单位是mIU/l。六、注意事项1、该方法不受黄疸（胆红素<41mg/dl）、溶血（血红蛋白<1g/dl）、脂血（脂质1500mg/dl）和生物素<60ng/ml干扰。2、接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最一次摄入生物素8小时后才能采血。3、不受类风湿因子（3250U/ml）干扰，透析病人的标本也无干扰。4、TSH浓度高达1000μIU/ml也不出现钩状效应。5、26种常用药物经试验对本测定无干扰。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔可遇到高链霉亲和素抗体的干扰。6、ElecsysTSH测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。7、高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议1:10稀释。稀释后的标本TSH含量必须高于10μIU/ml。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。七、参考范围电化学发光法：0.25-7.0mIU/l。八、临床意义促甲状腺激素具有促进甲状腺滤泡上皮细胞增生、甲状腺激素合成和释放的作用。增高：原发性甲状腺功能减退、伴有甲状腺功能低下的桥本病、外源性促甲状腺激素分泌肿瘤（肺、乳腺）、亚急性甲状腺炎恢复期。摄人金属锂、碘化钾、促甲状腺激素释放激素可使促甲状腺激素增高。减低：垂体性甲状腺功能低下、非促甲状腺激素瘤所致的甲状腺功能亢进，以及摄入阿司匹林、皮质激素及静脉使用肝素。尿HCG检测（胶体金法）一、实验原理应用由抗人绒毛膜促性腺激素（HCG）抗体和抗鼠IgG分别固相硝酸纤维膜和胶体金标记的抗HCG单克隆抗体及其他试剂组成，应用层析双抗体夹心法的原理快速检测尿液中HCG。显示结果明确，操作简便。用以妊娠早期诊断。二、标本采集1、尿液收集应使用一次性尿杯或洁净容器，任何随机尿均适用本实验。2、标本储存：如尿液不能及时送检，应置4℃冰箱，测试前注意复温。3、标本运输：室温运输4、标本拒收标准：细菌污染三、试剂试剂名称：蓝梦孕知胶体金早早孕检测试纸试剂储存条件及有效期：室温4-30℃避光密封干燥处贮存，切勿冰冻。有效期36个月四、操作步骤1、待测样品、检测试纸或其他检测用材料等均在室温平衡后取出试纸。2、将测试纸有箭头的一端插入尿液标本容器中，至少3秒钟后取出平放，5分钟内观察显示结果。3、测试纸插入尿液深度不可超过MAX标志线。五、结果判断与分析阳性：在检测线位置及对照线位置各出现一条红色反应线。阴性：仅在对照线位置出现一条红色反应线。无效：测试纸无红色反应线出现，或仅在检测线位置出现一条红色反应线，表明实验失败或者检测纸失效。六、临床意义1、本实验主要用于妊娠的诊断。在受孕2-6天即呈现阳性。2、用于与妊娠相关疾病和肿瘤的诊断及鉴别诊断。3、过期流产或不完全流产，子宫内仍有活胎盘组织时，本实验仍呈阳性。4、人工流产后，如果仍呈阳性，提示宫内尚有残余胚胎组织。5、宫外孕时，HCG低于正常妊娠，仅有60%阳性。七、操作性能

快速简便、特异性强、灵敏度高、重复性好。八、方法局限性试纸受潮易失效。九、注意事项1、测试纸从冰箱取出后，先充分复温再打开包装，取出试纸后及时扣严筒盖，谨防受潮。2、不要用过期的试剂。3、本品为一次性使用体外诊断试剂。4、当HCG浓度很高时，检测线颜色可能变浅，属正常现象。5、若被测试者仍怀疑有受孕可能，而尿液测试阴性，可在48-72小时后重新收集晨尿再次测定。6、子宫肿瘤、葡萄胎或更年期病人，因尿液中HCG含量较高，可能会出现阳性结果。7、怀疑异位、异常妊娠时，应结合其他方法进行诊断。唐氏综合征产前筛查实验准备实验前5分钟从2~8℃冰箱中取出所用试剂和标本。【注】准备好37℃水浴或温箱及酶标仪、洗板机或洗瓶、微量移液器（0~100ul、1000ul各1把，200ul多通道1把）。清洗液稀释：用纯净水按1：30稀释浓缩清洗液（即30ml浓缩清洗液+870ml纯净水）标准品稀释：AFP标准品稀释：a.向AFP标准品F瓶中加入1.2ml稀释液，混匀；b.向AFP标准品稀释管B、C、D、E中分别加入300ul稀释液；c.从F瓶中取300ul混匀的AFP标准品液体加入E管中，混匀；d.同样按E→D,D→C,C→B等比稀释AFP标准品。β-hCG标准品稀释：（操作同AFP标准品稀释）【注】试剂常规保存条件为2~8℃。血清标本制备好后一周内检测可在2~8℃冰箱内保存，一周以上检测需要-20℃保存，但检测前天晚上需将冻存标本置2~8℃复融（复融检测仅限一次），切不可直接将冻存标本置热水浴或温箱中复融。质控品稀释：分别向AFP质控品1、2和β-hCG质控品1、2瓶中加入1.2ml稀释液，混匀。实验步骤选板：按实验需要量分别选取AFP抗体和β-hCG抗体包被的微孔板，有序嵌放在板架上；加样：分别取100ul稀释好的A（用稀释液作空白）、B、C、D、E、F标准品和质控品1、2加入对应的板孔中（AFP试剂对应AFP板，β-hCG试剂对应β-hCG板；注意更换移液器头）；向待加样品的AFP和β-hCG板孔中分别加入80ul稀释液，然后分别加入20ul血清标本（注意更换移液器头）；孵育：将微孔板水平装入密封袋，放入加湿巾的饭盒中，置37℃水浴或温箱孵育60分钟；洗板：甩去孔内液体，用稀释好的清洗液加满各孔，稍停，甩去液体，重复5次，拍干；加酶标抗体：分别取100ulAFP和β-hCG酶标抗体加入对应的AFP和β-hCG各板孔中（最好用多通道移液器，并用专一的加样槽）；孵育：将微孔板水平装入密封袋，放入加湿巾的饭盒中，置37℃水浴或温箱孵育15分钟；洗板：同4.洗5遍；按需要量1：1混合显色液A和显色液B，取混合好的显色液100ul加入各板孔中（最好用多通道移液器，并用专一的加样槽）；孵育：将微孔板水平装入密封袋，放入加湿巾的饭盒中（避光），37℃水浴或温箱孵育12分钟；终止反应：取200ul终止液加入各板孔中（最好用多通道移液器，并用专一的加样槽）；比色：用酶标仪于450nm波长（双波长酶标仪可以630nm为参考波长）读取光密度（OD值），比色应于20分钟内完成；分析：将相应数据输入分析软件分析结果（参见软件帮助文件）。注意事项严格按标准操作流程（SOP）规范操作，操作人员事先需经专门培训；所用仪器要求合格，且需定期检修（如微量移液器、酶标仪要求每6~12个月校准一次，恒温箱或水浴锅、冰箱等也要经常检查），保证取量读数准确；与标本接触的器物（如移液器头、血清管等）要求清洁、消毒并干燥，防止污染；试剂和标本必须按要求妥善保存，防止变质失效；拆封后的酶标板需要加干燥剂密封后置2~8℃冰箱保存；溶解后的标准品（F）、质控品及酶标抗体若一周内再次使用，可置2~8℃冰箱保存；若一周后使用则需-20℃保存，但检测前天晚上需将冻存物品置2~8℃复融（复融检测仅限一次），切不可直接将冻存物品置热水浴或温箱中复融。四、临床意义正唐氏综合征概述唐氏综合征是人类最常见的一种染色体病,也是最早被确认的染色体病,由于在配子(生殖细胞)形成期或合子期(约在受精后24小时内)细胞内多了一条21号染色体所致。其发病率1/600～1/800,以中国为例,大约每20分钟就有1位唐氏儿出生。唐氏儿由于智力严重低下,生活完全不能自理,并且携带多系统并发症,终生无法治愈,因此给家庭带来沉重的精神和经济负担。精液检测一、实验原理记录精液量、颜色、透明度、粘稠度和是否液化。显微镜检查包括精子计数、活动力、活动率、形态。二、.标本采集1、标本采集前病人准备：必须禁欲（包括遗精和手淫）3～7天。这是因为少于48小时采取的精液，因相距时间太短，精液中精子的数量可能偏少，容易造成少精症的假象。如果超过7天，精子活率、活力都有所下降，也可造成弱精子症的假象。精液检查应间隔一周或两周，要进行2～3次检查。因为一个人精子的产生在一年中，可因季节、气候等,诸多因素的影响而有一些变化。2、标本种类：精液3、标本要求：用清洁干燥小瓶收集，不应采用避孕套内精液。4、.标本储存：立即送检。5.、标本运输：室温运输，冬季需保温运输。6.、标本拒收标准：久置标本，污染标本，避孕套内标本。三.、操作步骤1、记录精液量、颜色、透明度、粘稠度和液化时间。2、精子活动率：取新鲜标本混匀后，在温玻片上用高倍镜观察100个精子，计数活动精子与不活动精子的比例，计算精子活动的百分率。精子活动率=活动精子数/（活动精子数+不活动精子数）×100%3、取上述新鲜湿片标本，观察精子的活动力，可按下列五级报告：0级：精子完全不活动，加温后仍不活动；I级：精子运动不良，运动迟缓，原地打转或抖动，向前运动能力差；II级：精子活动较好，运动速度尚可，游动方向不定，呈直线或非直线运动，带有回旋；III级：为中速运动；IV级：精子活动好，快速直线运动，很快超越一个视野，活泼有力。4、精子计数：（1）、于试管内加精子稀释液0.38ml，吸液化精液20ml，加入稀释液内摇匀。（2）、充分摇匀后，滴入血细胞计数池内，静置1-2min，待精子下沉后，以精子头部作为基准进行计数。（3）、如精子数少，可计数两个大方格内精子数，总数乘以10万即为每毫升精液内精子数，再换算成×109/L报告。（4）、如精子数多，可计数5个中方格内精子数，总数乘以100万即为每毫升精液内精子数，再换算成×109/L报告。5、精子形态观察：革兰氏或瑞氏染色后用油镜观察。异常精子可有：头部过大、过小、尖细、外缘不齐、双头等；中部消失、分枝或肿胀；尾部呈双尾，卷曲度短或消失（缺尾）。6、细胞：红、白细胞<5/高倍视野。7、pH：7.2-8.0，平均7.8。8、其它成分：精液中可有结晶体、卵磷脂小体、淀粉样体、脂滴、脱落上皮细胞等。四、结果判断与分析1、一般性状检查（1）、量：正常人一次排精2～5ml。（2）、颜色和透明度：正常刚射出的精液呈乳白色或灰白色，液化后呈半透明乳白色，久未排精者可呈淡黄色。鲜红色或暗红色的血精见于生殖系统炎症、结核、和肿瘤，黄色脓样精液，见于精囊炎或前列腺炎。（3）、粘稠度和液化：正常新鲜的精液排出后数秒呈粘稠胶冻状，在精液中纤溶酶的作用下30分钟后开始液化。如果粘稠度降低呈米汤样，可能是精子数量减少，见于生殖系统炎症，精液不凝固见于精囊阻塞或损伤；如果精液1小时后不液化，可能是由于炎症破坏纤溶酶所致，如前列腺炎，精子不液化可以抑制精子活动力而影响受孕。（4）、酸碱度：pH值。正常精液呈弱碱性pH7.2-8.0，以利于中和酸性的阴道分泌物，pH值小于7或大于8都能影响精子的活动和代谢，不利于受孕。2、显微镜检查。（1）精子存活率：排精后30～60分钟，正常精子存活率应为80％～90％，精子存活率降低是导致不育的重要原因。（2）精子活动力：正常精子活动力应在III级以上，若>40％的精子活动不良，常是导致男性不育的重要原因。精子活动力低，主要见于精索静脉曲张、泌尿生殖系统非特异性感染，应用某些药物如抗疟药、雄激素等所致。（3）精子计数：正常人精子计数为10～130×109/L，相当于一次排出的精子总数为400×106～600×106。当精子计数值<20×106/ml或一次排精总数<100×106为精子减少，超过致孕极限而导致不育。精液直接涂片或离心沉淀后均未查到精子为无精症。见于先天性睾丸发育不全、畸形或后天睾丸损伤和萎缩(如睾丸结核、炎症、淋病、垂体或肾上腺功能异常的内分泌性疾病等)、输精管阻塞或是先天性输精管及精囊缺陷，是导致少精或无精的重要原因，也是导致不育的重要原因。检查有无精子也是检查输精管结扎术的效果观察。结扎六周后，连续检查无精子，说明手术成功，如果结扎两个月后，精液中仍有精子，说明手术不成功。（4）精子形态：正常精液中，异常形态精子应少于10％～15％，如果精液中异常形态精子数>20％，将会导致不育，可能是由于精索静脉曲张、血液中有毒代谢产物、铅污染等或应用大剂量放射线及使用细胞毒性药物导致的精子形态异常。如果精液中发现>1％的病理性未成熟细胞，包括精原细胞、精母细胞和发育不完全的精细胞，提示睾丸的曲细精管的生精功能受到药物或其他因素影响或损伤。如果精子凝集>10％，提示生殖道感染或免疫功能异常。五、注意事项1、出现一次异常结果，应隔一周后复查，反复查2-3次才能得出比较正确的结果。2、如低倍镜、高倍镜检查均无精子，应将精液离心沉淀后再涂片检查，如两次均无精子，报告“无精子”。六、操作性能：快速简便。七.方法局限性：易受人为主观经验不足影响结果判断。凝血酶原时间（PT）测定一、检测原理待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子X成为Xa，后者使凝血酶原转变成为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶原时间（PT）。（PT）测定是外源性凝血系统较理想和常用的筛选试验。二、样本采集与保存患者处于休息状态下，采空腹静脉血（急诊病人除外）。采血者应技术熟练，“一针见血”，以防止组织损伤，使外源性凝血因子进入标本。最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。采完血后，将血液沿管壁缓缓注入试管，避免产生气泡；然后迅速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀，避免用力震荡。全血要在1小时内分离血浆。分离血小板血浆时，要在室温下3000rpm离心10分钟，室温下可存放4小时。全部试验不能在4小时内完成，应将血小板血浆分装在0.5～1.0ml的小试管中快速冷冻，储存于-20℃冰箱中。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果会不准确。冷冻血浆融化时，应将盛冷冻血浆的容器置37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。三、使用方法1、试剂重建与保存每瓶PT试剂加入2.0ml缓冲液轻摇溶解。注意：试剂溶解后2-8℃可保存7天，室温（15-25℃）可保存24小时，勿冻结。2、半自动血凝仪、手工测定。取待测血浆（正常质控血浆或正常混合血浆）50vl，37℃孵育3分钟，加入37℃预温PT试剂100vl,记录凝固时间，即为PT值。四、正常值1、以时间表示：10-14秒2、以PTR表示：0.95-1.243、以INR表示；0.94-1.30五、注意事项1、采血必须使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，贮备必须使用塑料试管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器，避免凝血因子活化。2、采血时止血带不可束缚过紧，并不应超过5分钟，否则导致凝血及纤溶因子活化。3、血液应立即加抗凝剂，血浆制备必须及时，血浆分离应昼去除血小板。血浆分离后应尽快测定。4、血浆预温不宜超过5分钟。5、PT试剂预温不可超过15分钟。6、红细胞比容超过55%或小于20%时，应调整抗凝剂用量。7、不宜使用EDTA.Na2、肝素、草酸盐抗凝，应使用0.109mol/L枸缘酸钠抗凝。8、-80℃及20℃保存样本，测定时37℃迅速融化，不可反复融化。9、样本采集避免溶血及组织液污染。11、测定温度36.5-38.5℃，过低或高温度均使PT延长。六、临床意义PT是外源性凝血系统的筛选实验。PT延长见于先天性凝血因子II、V、VII、X缺乏症，低（无）纤维蛋白原血症，DIC，原发性纤溶症，VitK缺乏，肝病，口服抗凝剂、肝素和FDP等。PT缩短见于先天性凝血因子V增多，口服避孕药，高凝状态，血栓性疾病等。凝血酶时间（TT）