绵羊体外胚胎生产技术规程_第1页
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文档简介

1绵羊体外胚胎生产技术规程本文件规定了绵羊体外胚胎生产过程中的卵母细胞体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养等内3.1卵母细胞在体外恢复减数分裂并发育到第二次减数分裂中期（MII）这一过程，3.2哺乳动物的精子和卵子置于适宜的培养条件下使之完成3.3将受精卵置于适宜的培养条件下使其发育至囊胚采卵液、体外成熟培养液（IVM液）、受精液（IVF液）和胚胎发育液（IVC液）配方见附录2后，操作人员将双手清洗干净后，穿戴工作服、口罩、手套、帽子等，更换拖鞋进入实验室，关闭实验室门；用75%酒精喷洒消毒双手；实6.2检卵体外受精实验开始前，在5%二氧化碳培养箱内，平衡8.2体外受精如使用冷冻精液，将所需精液置于37℃~40℃水浴解冻。38.3卵母细胞处理/100µ~20枚/100µL受精液的密度移入受精液中。8.4体外受精精子沉淀液，轻轻混匀。用移液枪吸取精子沉淀液，倾斜枪头从边缘插入受精液滴或孔，对准卵母细），）；态，将其分为A、B、C级）、退化卵数（胞质不均匀、卵丘扩散严重、裸卵数）；记录卵母细胞成熟时4A.1卵母细胞体外成熟液配制0.02IU/mLFSH、0.02IUS、0.1ml青链霉素合剂，使用TCM-1滤，在0℃~5℃条件下可保存2周。A.2采卵液配制0.05gBSA、0.035g肝素钠、0.5mL青链霉素合剂，使用PBS定容至50mL，混匀后用Millipore0.22µm的过滤器过滤，在0℃~5℃条件下可保存2周。3.1452gNaCl、0.2675gKCl、0.0814gKH2PO4、0.0442gMgSO4、0.2655g丙酮酸钠、1.3115gCaCl2、0.0251g肌醇、0.0074g谷氨酰胺、300µL乳酸钠、0.5mL青链霉素合剂、1%酚红，使用胚胎水定容至50mL，混匀后用Millipore0.22µm的过滤器过滤，在0℃~5℃条件下可保存2周。1mL发情羊血清、6IU/ml肝素钠,使用器过滤，在0℃~5℃条件下

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