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农业部2122号公告一4—2014转基因植物及其产品成分检测耐除草剂和品质改良大豆MON87705及其衍生品种定性PCR方法2014-07-07发布2014-08-01实施I农业部2122号公告—4—2014本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。1农业部2122号公告—4—2014及其衍生品种定性PCR方法本标准规定了转基因耐除草剂和品质改良大豆M农业部1485号公告—4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化农业部2031号公告—8—2013转基因植物及其产品成分检测大豆内标准基因定性PCR方法农业部2031号公告—19-2013转基因植物及其产品成分检测抽样NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求外源插入片段3'端与大豆基因组的连接区序列，包括外源插入片段3'端部分序列和大豆基因组2lec-1672F:5'-GGGTGAGGATAGGlec-1881R:5'-GCGATCGAGTAGTMON87705-F:5'-CGCCAAATCGTGAAGTTTCMON87705-R:5'-CAGTGATAACAACACCCT37.5PCR反应7.5.1试样PCR反应7.5.1.2.1每个试样PCR反应设置3次平行。终浓度水10×PCR缓冲液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)25mg/LDNA模板总体积“—”表示体积不确定。如果PCR缓冲液中含有氯化镁，则不加氯化镁溶液。根据TaqDNA聚合酶的积，并相应调整水的体积，使反应体系总体积达到25.0μL。7.5.1.2.4进行PCR反应。农业部2122号公告—4—2014增片段是否为目的DNA片段，按照7.8和7.9的规定执行。将回收的PCR产物克隆测序，与转基因耐除草剂和品质改良大豆MON87705转化体特异性序列(参见附录A)进行比对，确定PCR扩增的DNA片段是否为目的DNA片段。8.2.1Lectin内标准基因和MON87705转化体特异性序列均得到扩增，且扩增片段大小与预期片段特异性序列未得到扩增，或扩增片段大小与预期片段大小不一致，表明样品中未检测出转基因大豆5农业部2122号公告—4—20141CGCCAAATCGTGAAGTTTCTCATCTAAGCCCCCATTTGGACGTGA61AATAAAGATTTCCGAATTAGAAT121CGTAATTTGTCGTTTTATCAAAATGTACTTTCATTTTATAATA181A

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