6种疱疹类病毒特异性酶切图谱的建立及其应用分析_第1页
6种疱疹类病毒特异性酶切图谱的建立及其应用分析_第2页
6种疱疹类病毒特异性酶切图谱的建立及其应用分析_第3页
全文预览已结束

付费下载

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1/16种疱疹类病毒特异性酶切图谱的建立及其应用分析2003渐江大学硕士学位论文6种疱疹类病毒特异性酶切图谱的建立及其应用研究浙江大学医学院儿科学硕士研究生董关萍导师尚世强主任医生中文摘要疱疹病毒属中具有代表性的是单纯疱疹病毒I型与II型(HSVI／II)、爱一马尔病毒(EBV)、入巨细胞病毒(CMV)、水痘一带状疱疹病毒(VZV)和人类毒6型(HHV6)这6种病毒，它们是免疫功能低下者临床常见的病原体，尤其胞、体液免疫系统不成熟，易导致疱疹类病毒感染。

疱疹类病毒感染后其临床体征没有特异性，而且临床又缺乏有效的诊断方法。

在本研究中，我们在疱疹较保守的DNA多聚酶基因上自行设计两对共用引物，分别对6种病毒进行聚反应(PCR)及限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)，最终建立了PCR-RFL快速检测病毒DNA的方法，并对临床标本迸行检测取得较好结果。

第一部分疱疹类病毒特异性酶切图谱的建立厂。

方法：

在疱疹类病毒高度同源序列。

NA多聚酶基因中设计两对通用引物扩增单纯疱疹病毒I型与II型、爱泼斯坦一马尔病毒、人巨细胞病毒四种病毒，另一2003浙江大学硕士学位论文HSVII(G株)、CMV(ADl69株)、EBV(B95-8株)、VZV(EF株)和(HHVPCR扩增，并对扩增产物进行分子克隆、序列分析，选择B锄HI和BstUI两种内切--PCR产物进行酶切。

结果：

6种标准病毒株PCR扩增后产物为510～592bp，其最小检出量为龟，与乙型肝炎病毒、真菌、细菌和人类基因组无交叉反应。

发现G卜C含量在EBV、HSVI／II中较多，分别为60．2％、61．5％、66．2％和67．5％，VzVHHV6则较低分别为40．5％、,13．2％。

CMV扩增产物(592bp)内含8个BstUI点，经BstUI酶切后产生170bp、130bp、80bp、62bp、50bp、40bp、316bp和14bp9个DNA片段，但不能被BamHI酶切；EBV520bp长度内含1BamHI和1个BstUl酶切位点，经BamHI酶切成250bp和270bp，被Bst成254bp和266bp；HSVI全长含7个BstUI酶切位点，经BstUI酶切后230bp、130bp、50bp、40bp、23bp、20bp、15bp和10bp8个段，但无BamHl酶切位点；HSVII含1个BamHl及9个BstUI酶切位点，经mHI酶切成230bp和288bp，但被BstUI切成168bp、90bp、80bp、60bp、40bp、30bp、20bp、15bp、10bp、和5bpl0个D段。

酶切后凝胶电泳能将HSVI／HSVII、EBV、CMV鉴别出来。

VZV无BamHl点，而含1个BstUI酶切位点，切成280bp和230bp两个片段；HHV6被切成243bp和2

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 作业报告

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论