DB32T-彩色马蹄莲组培快繁技术规程

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h\t"标准文件_一级条标题,2,标准文件_附录一级条标题,2,"前言 II1范围 12规范性引用文件 13术语和定义 14组培苗的生产 14.1外植体获取 14.2外植体的消毒 14.3不定芽的诱导 14.4不定芽的增殖 14.5壮芽培养 24.6壮苗培养 24.7瓶内结球培养 24.8生根培养 25炼苗和移栽 25.1环境条件 25.2移栽基质 25.3炼苗 25.4移栽 26移栽后管理 36.1水分 36.2光照 36.3温度 36.4湿度 36.5施肥 36.6病害防治 37一年生仔球的生产 3附录A（资料性）基质消毒方法 4附录B（资料性）常用细菌杀菌剂 6前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由江苏省中国科学院植物研究所提出并归口。本文件起草单位：江苏省中国科学院植物研究所。本标准主要起草人：郑玉红，傅力，付娇娇，韩福贵。彩色马蹄莲组培快繁技术规程范围本文件规定了彩色马蹄莲品种组织培养快速繁殖、组培苗的移栽管理和病虫害防治的技术要求。本文件适用于江苏省采用组织培养的方式进行彩色马蹄莲的繁殖。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T1589花卉术语CJ/T135园林绿化球根花卉种球术语和定义下列术语和定义适用于本文件。一年生仔球oneyear~oldtuber组培苗经过一个生长季的栽培发育形成的块茎。组培苗的生产外植体获取选取直径大于4.0cm的健康的彩色马蹄莲块茎，用800~1000倍广谱性杀菌剂水溶液浸泡15min后，浅埋于经高压灭菌的湿润细沙中，在光照强度3000lx、光照时间12h/d、(25±1)℃的条件下预培养7～10d后，选取芽长约1cm的块茎，作为外植体。外植体的消毒用软毛刷将块茎刷洗干净，避免损伤顶芽，将其切成长宽均约为1.5cm的带芽小块，放入含1%液体洗涤剂的溶液中振荡洗涤20min~30min，之后流水冲洗40min~60min，转入超净工作台，75％酒精消毒30s~45s后，无菌水冲洗2~3次，再用有效氯含量2%~3%的次氯酸钠溶液消毒25min～35min，无菌水冲洗4～5次，无菌吸水纸吸干表面的水分。不定芽的诱导将消毒好的彩色马蹄莲种球切成大小约lcm3的带芽小块，接种至下列培养基中：基本培养基MS，蔗糖30g/L，6~BA2.0~5.0mg/L，pH5.8；在温度（25±1）℃，黑暗培养，直至外植体萌发出不定芽。不定芽的增殖将生长至4~6cm的不定芽连同部分块茎一起切下，在不定芽增殖培养基中进行增殖培养：基本培养基MS，琼脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，6~BA2.0mg/L~4.0mg/L，pH5.8；温度（25±1℃），光照强度为1000~3000lx，光照时间12h，直至诱导出块状丛生芽。壮芽培养将块状丛生芽分切成约1.0cm2小块，接种到壮芽培养基上，进行壮芽培养：基本培养基MS，琼脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，NAA0~0.5mg/L，6~BA2.0mg/L~3.0mg/L，pH5.8；温度（25±1）℃，光照强度为1000~3000lx，光照时间12h，培养周期60d~80d，直至丛生芽长成可以分切成单株的小苗。其中，在30d~40d，采用同样的配方进行继代培养。壮苗培养将壮芽后分切成单株的小苗接种到一下培养基中进行壮苗培养，培养基组分为：基本培养基MS，琼脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，NAA0~1.0mg/L，6~BA2.0mg/L~3.0mg/L，pH5.8；温度（25±1）℃，光照强度为1000~3000lx，光照时间12h，培养周期60d~80d，直至长成块茎直径约0.5cm小苗。瓶内结球培养将块茎约0.5cm小苗保留1cm~2cm叶柄，进行瓶内结球培养：基本培养基MS，琼脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖40g/L~60g/L，NAA0.5mg/L~1.0mg/L，6~BA1.0mg/L~2.0mg/L，pH5.8；温度（25±1）℃，光照强度为1000~3000lx，光照时间12h，进行光照培养30d~40d，直至每株小苗均膨大出直径0.5cm~0.8cm的块茎。生根培养将已结球的试管苗，保留1~2cm叶柄，进行生根培养：基本培养基MS，琼脂6.5g/L~7.0g/L，蔗糖30g/L，IBA1.0mg/L~2.0mg/L，pH5.8；培养温度（25±1）℃，光照强度为1000~3000lx，光照时间为12h，直至每株苗均长出长度2.0cm~3.0cm、数量3~5条组培苗。炼苗和移栽环境条件宜在春季或9~10月进行。若其他季节进行，需在温度和湿度可调控的温室进行。移栽基质第一次使用的基质无需消毒，重复使用基质须消毒。消毒的方法分物理消毒法和化学消毒法2种，详见附录A。要求疏松、透气并具有一定的保水性能。采用泥炭土:珍珠岩＝2:1时，可加入适量的蛭石。炼苗在组织培养的缓冲间将组培瓶盖拧松，放置2~3d；之后打开瓶盖，再放置2d～3d，炼苗即可完成。移栽炼苗完成后，用镊子将组培苗从瓶中取出，洗净根部的培养基，用800倍~1000倍广谱杀菌剂浸泡8min~10min，移栽到10×10的穴盘中。若直接移栽到苗床上，定植的密度以（600~700）株/m2为宜。定植深度以不倒伏为准，然后用喷雾法浇透水，移栽后管理水分掌握“少量多次”的原则，浇水的频率也应因季节而异。水质应符合GB5084的要求，无病菌，EC值在1.5以下，pH值为6.5～7.2。定植约4周后，进行正常的水分管理。光照夏季进行组培苗的露地移栽时，须加盖一层遮光度30%～50%遮阳网进行遮荫。温度应将环境温度控制18℃～28℃，最高不超过30℃。夏季移栽，当温度超过28℃时，即应用微喷雾设备降温，同时加大遮阳度，保持良好的通风。湿度保持相对湿度60%~80%。移栽一周内宜保持70%~80%，一周后可逐步降低。施肥定植约4周后，需进行根外施肥。可使用N:P:K=2:1:1，浓度0.3%~0.5%的液态肥，并按先低后高的原则，每7d~10d施肥一次。病害防治以预防细菌性病害为主。可每2~3周进行一次灌根。常用光谱性杀菌剂均可使用。一年生仔球的生产彩色马蹄莲组培苗在穴盘或苗床上栽培一个生长季节，并发育出直径约2cm的块茎后，即可通过断水等方法强制其休眠。待叶片变黄后采收，置于阴凉、通风处干燥。采收过程中尽量避免损伤块茎表皮。此即为一年生仔球，可进行大田种植，开展商业化生产。

（资料性）

基质消毒方法A.1物理方法一般采用蒸汽消毒，即将基质堆成圆锥状，高度不超过1.5m，将多孔的管子平放并埋入基质约40cm、80cm、120cm高处，表面严实地覆盖塑料薄膜，然后从蒸汽锅炉中放出200℃左右蒸汽，使基质温度上升70℃~90℃保持0.5h~lh即可。A.2化学方法A.2.1威百亩消毒将基质平铺，厚度30cm-40cm，按6g/m2用药量，加水稀释，用喷雾器均匀喷洒在基质表面，然后再喷一次灌溉水，让基质充分湿润，最后用完好的塑料薄膜覆盖，四周压实，15d后掀膜即可。操作应选在早晚凉爽环境中进行。A.2.2五氯硝基苯消毒40%可湿性粉剂，按照1:(20~40)拌细土，然后将待消毒的基质平铺，厚度30cm-40cm，按10g/m2用量均匀撒在基质上，然后再喷一次灌溉水，让基质湿润，最后用完好的塑料薄膜覆盖，四周压实15d后掀膜即可。

（资料性）

常用细菌杀菌剂B1常用细菌杀菌剂常用细菌杀菌剂见表B.1。常用细菌杀菌剂名称规格用法用量备注五氯硝基苯70%粉剂土壤消毒按每平方米8g~9g，拌入细土，施入播种沟或播种穴内。药剂不得与幼苗直接接触多菌灵50%可湿性粉剂稀释600倍~1000倍液喷雾或浸种;土壤消毒按按每平方米6g~8g。长期连续使用易引起病菌产生抗药性，应与其他杀菌剂轮换使用。甲基托布津50%可湿性粉剂稀释700倍~1000倍喷雾。长期连续使用易引起病菌产生抗药性，应与其他杀菌剂轮换使用。不得与多菌灵