细菌内毒素检测技术应用与进展学习培训课件

细菌内毒素检测技术应用与进展细菌内毒素检测技术的应用与进展1、热原2、历史回顾---鲎试剂与细菌内毒素检查3、BET的发展趋势与特点

21、热原热原是指临床上能引起哺乳动物发热反应的物质Webster最先把热原定义为“致热剂”早期的热原研究静脉疗法的研究与热原的研究密切相关在18、19世纪有很多关于静脉疗法的报道，所有病人在注射后都伴随有发热反应，当时的医生都深信发热对人体有益

31912年，Hort和Penfold阐明注射发热的真正本质，将细菌分为热原和非热原两种：革兰氏阴性细菌为热原细菌革兰氏阳性细菌为非热原细菌他们推断所有的注射发热都是由革兰氏阴性细菌产生一种可滤过的、热稳定的物质导致的1、热原41、热原热原的检测1941年，美国USP、FDA和NIH（美国国家卫生研究所）邀请了14个制药厂商参与第一次的热原协作研究1942年，美国药典第一次收载热原检查法该方法是将一定量的供试品通过静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况来判定供试品中热原含量是否符合规定52、历史回顾---鲎试剂与细菌内毒素检查细菌内毒素检查(BET)通常称使用鲎试剂来检测细菌内毒素的方法为细菌内毒素检查法。国际历史1956年，美国科学家FredericBang发表论文《鲎的一种细菌性疾病》，阐述了细菌内毒素使鲎血凝固的现象。随后，Bang和Levin发明了鲎试剂。1980年，FDA发表使用鲎试剂检查人用和兽用注射药终成品内毒素的指引；美国药典20版（USPXX）第一次收载BET法61989年英国药典收载BET法1991年日本药局方收载BET法1999年，USPXXIV版规定670种药品用BET法检查，保留热原检查的药品约20种2000年，国际协调委员会使USP、EP和JP达成《BET的国际协调方案》，统一的BET法收载于USPXXIV版NF19的第二增补本中，并于2001年1月1日生效2、历史回顾---鲎试剂与细菌内毒素检查72、历史回顾---鲎试剂与细菌内毒素检查2011年，美国FDA撤销了1987年发布的鲎试验指南和1991年发布的动态法检测临时指南2012年，美国FDA发布了“行业指南，热原和内毒素检测：问与答”国内历史1983年，由11个单位参加的卫生部鲎试剂研究协作组的成立1988年，卫生部颁布《细菌内毒素检查法》和鲎试剂标准。1991年，卫生部部颁标准规定4种药品可使用细菌内毒素检查法81993年，中国药典（Ch.P.）九零版第二增补本收载BET法1995年版Ch.P.规定13个品种使用BET法2000年，Ch.P.2000版细菌内毒素检查品种增至69种；附录《细菌内毒素检查法应用指导原则》中收录了BET定量法2005年，Ch.P.2005版二部细菌内毒素检查品种增至205种；BET法正式收载光度测定法。2010年，Ch.P.2010版细菌内毒素检查品种增至506种。2、历史回顾---鲎试剂与细菌内毒素检查93、BET发展趋势与特点BET技术的发展趋势细菌内毒素检查取代热原检查自19世纪80年代FDA批准鲎试验的应用以来，BET法所具有的优点：快速、灵敏、可标准化等，表明它比热原检查法更适应现代制药工业的发展各国药典规定的BET检查品种都经历了从无到有，从少到多的过程BET取代热原检查已成为趋势10趋向统一的BET法在早期各国颁布的BET法不尽相同，不利于药品的全球流通WHO实现了内毒素的国际标准品（IS）的效价（IU）与各国内毒素标准品的效价（EU）的统一，即1IU=1EU11国际协调委员会综合USP、EP、JP的BET法，达成一个国际协调案——统一的BET法，于2001年实施中国药典2010年版的BET法基本参照国际统一的BET法12BET技术的应用及发展的特点BET方法呈多样化凝胶法比浊法动态比浊法终点比浊法比色法动态比色法终点比色法湛江安度斯在BET方法学及BET技术发展的贡献发明专利1：同体系模型法发明专利2：动态终点法发明专利3：细菌内毒素快速检测盒发明专利4：定量法专用内毒素套盒发明专利5：微量显色法13BET技术趋向自动化凝胶法恒温设备方面，干式恒温仪器逐步取代水浴恒温箱定量BET试管式定量检测仪酶标板式定量检测仪全自动的BET系统专用的数据软件湛江安度斯公司TAL-40型试管恒温仪（凝胶法）BET专用软件——生物探针14BET试剂的发展鲎试剂的灵敏度越来越高凝胶法最高达0.0075EU/ml商品试剂0.015EU/ml定量法高达0.0005EU/ml鲎试剂抗干扰性能更强干扰BET的因素：pH值、离子浓度、干扰物质湛江安度斯湛江安度斯是国内唯一能批量生产超高灵敏度鲎试剂的厂家权威的研究报告表明：安度斯公司的鲎试剂具有较强的抗干扰性能及良好的相容性15BET辅剂的应用缓冲剂：调节pH值稀释剂：补充二价阳离子抗增液：增强抗β-葡聚糖的能力分散剂：使内毒素均匀分布指示剂：检验设备高温灭活内毒素的能力鲎试剂特异性更好试剂特异性的重要性相关法规对试剂特异性的要求特异性试剂的种类16高科技的产物---便携式生物检测系统（PTS）快捷、方便的检测仪可作快速、定量的BET（7~15分钟）β-葡聚糖的检测革兰氏细菌快速鉴别——取代传统的染色法微量蛋白的快速测定应用领域：制药、医学、食品卫生、环保1