药典翻译USP29-1225　法定方法的验证　中文译稿已校

USP29-1225药典操作法的验证6-PAGE6USP29-1225药典操作法的验证7-PAGE7药典操作法的验证<1225>药典操作法的验证用于评价药品质量水平的实验操作法需满足各种要求。按照联邦食品、药品与化妆品法案的501部分，USP正文中的含量分析以及质量标准，以用国家处方集组分的合法要求，cGMP21CFR211.194(a)要求：用于评估药典产品是否符合已制订的质量标准的实验方法，必须满足适当的准确度及可靠性的要求。根据这些条例21CFR211.194(a)(2)：使用USP-NF中所描述的分析方法无需验证其准确度及可靠性，仅需要在实际操作条件下证实其系统适用性。认识到USP-NF标准的合法性，因此，提议吸纳新的或修订药典的分析操作法，需要由充分的实验数据支持，以证实其有效性。本文内容尽可能与三方的ICH指南（分析操作法的验证以及方法学扩充的内容）保持协调一致，这些指南与分析操作法有关，包括作为在欧盟、日本、美国范围内所提交的注册申报材料的部分。提交到药典向药典提交新的或修订的分析操作法应包括充分的信息，使USP专家理事会及其专家委员会的成员能用这些信息评价所提议的操作法的相对优越性。在大多数情况下，评价内容包括：分析方法描述的clarity和完整性，确定是否需要此操作法，以及这些操作法已被适当验证的证明文件。根据所涉及的方法的类型，这些信息可能会有所不同。但是，在多数情况下，一份提交的材料应包括以下内容：基本原理——这一部分应确定操作法的必要性，并且阐明所提议的专属性方法的检测能力，及与其它类型的检测相比，它是首选的方法。对于修订的操作法，应提供对当前药典操作法的局限性与所提议的方法的优越性的比较材料。提议的分析操作法——这一部分应包含分析操作法的完整的描述，这些描述应充分详细，应可使“具备一定技能”的人能够重复此操作法。这份叙述还应包括所有重要的操作参数以及特殊的说明，例如试剂的制备、系统适用性的性能、所用的空白对照的描述、注意事项及清楚的检验结果的计算公式。数据要素——这一部分应提供分析操作法验证的完整的证明文件。应包括实验数据的总结及证实每一个所用的验证项目的计算。这些验证项目在以下部分中叙述。验证一个分析操作法的验证是一个程序，通过此程序，可由实验室研究制订操作法的性能特征能达到预期要求。在本章节中描述的常见的分析的验证项目被列于表1中。考虑到对术语的理解及使用可能有所不同，在本章节的后续部分给出了每个验证项目的定义，以及常见方法的线性。表1.方法验证中使用的常见的验证项目准确度精密度专属性检测限定量限线性范围耐受性robustness就药典操作法来说，在以下情况下可能需要再验证：向USP提交修订的分析操作法；(theuseofanestablishedgeneralprocedurewithanewproductorrawmaterial)应用于新产品及或新原材料而建立的一般方法（参见分析验证所需数据项下）ICH指南给出了在以下情况下关于再验证必要性的指导：原料药合成方面的改变；以药物制剂组成方面的改变；以及在分析操作法方面的改变。分析方法验证项目准确度定义——分析操作法的准确度是指由此方法所得到的测定值与真实值的接近程度。一个分析操作法的准确度应在一定范围内被制订。测定——在分析原料药时，可通过分析已知纯度的被分析物（如：标准品）进行测定，或同那些已建立准确度的另一种方法测得的结果进行比较而得。在分析制剂中的药物时，准确度可用含有已知量被分析物的各组分混合物进行测定，如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一已建立准确度的另一种操作法比较结果。在杂质定量分析时，可向样品（原料药或制剂）中加入已知量的杂质进行测定。如果不能得到某些杂质或降解产物，可将用本法测得的结果与另一独立的方法测得的结果进行比较。在缺乏一些信息时，可以通过比较杂质与原料药的响应值来计算杂质含量。如果等量的杂质与原料药的响应值之比（相对响应因子）可知，则应使用。准确度用样品中已知量的被分析物的含量的回收率来计算，或者用平均值与可接受的真实值（二者组成置信区间）之间的差值来计算。ICH指南建议计算准确度最少用3个浓度水平（包括所规定的范围），9个结果来议价，（也就是：3个浓度，每个浓度重复3次）。准确度的评估可以用不同的方式来完成，包括评估含量范围内被分析物的回收率（回收百分数），或评估所估计的浓度与实际浓度之间关联的线性。统计学上首选的标准是斜率的置信区间被包含在1.0的区间内，或者，可以选择替代的，斜率接近于1.0。无论在哪种情况下，应在验证方案中规定区间或接近程度的定义。合格标准将取决于含量及其变异性以及产品。根据斜率为1的零假设的实验的统计学上的显著性，制订一个合格标准不是一个可以接受的方法。精密度定义——一个分析操作法的精密度是指同样的操作法，同一均质样品，经多次取样检测，所得结果之间的接近程度。分析操作法的精密度通常用一系列检测结果的标准偏差或相对标准偏差（变异系数）来表示。精密度也是评价正常操作条件下分析操作法的重现性或重复性的手段。这里，重现性指的是在不同实验室用相同的操作法。中间精密度（也称为ruggedness）指同一实验室内，不同天或不同分析人员，或不同设备进行测定。重复性是指同一实验室，在短时期内，同一分析人员用同一设备进行测定。测定——分析操作法的精密度是通过测定足够的等份的均质样品，统计其标准偏差或相对标准偏差（变异系数）而得。在本文中，含量分析是单独的样品分析，此样品贯穿于从样品制备到最终测试结果的整个分析过程。ICH指南要求，在操作法规定的范围内，至少用9次测定结果进行评价（如：制备3个不同浓度的样品，各测定3次，或把被测物浓度当作100%，用至少测定6次的结果进行评价）。专属性定义——ICH指南中定义专属性是指在期望的成分（如杂质、降解产物、矩阵组分matrixcompenent）存在的情况下，方法能够准确测定出被测物的能力。缺乏专属性的分析操作法可以用其他分析手段来弥补。[说明——其他著名的国际权威组织（IUPAC、AOAC－=1\*ROMANI）倾向于用“选择性”，保留“专属性”特定用于那些具有完全选择性的操作法。]对于下述所讨论的实验来说，上述定义有如下含义：鉴别实验——确保对被分析物的鉴别能力。纯度实验——确保所做的所有的分析操作法可准确检出被分析物中杂质的含量（如：有关物质检测、重金属限度、有机溶剂杂质）。含量分析——提供样品中被分析物的含量或效价的准确结果。测定——在定性分析中（鉴别实验），专属性实验要求证明能与可能共存的结构相似的化合物区分，需确定含被分析物的样品呈正反应（可与已知对照物比较），而不含被测成分的样品呈负反应，以及结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应。在杂质分析中，专属性可以通过以下方法建立：向原料药或制剂中加入一定量的杂质，证明杂质能被测定出，并具适当的准确度和精密度。在含量分析中，专属性的确证要求分析过程不受杂质及辅料的影响。在实际操作中，可向原料药或制剂中加入一定量的杂质或辅料，证明含量分析的结果不受这些外来物的影响。如果杂质或降解产物标品不可获得，可通过与另一个药典的方法或经验证了的方法测定含杂质或降解产物的样品得到的结果进行比较来确证专属性。这些对比实验应包括贮存于破坏性条件（如：强光照射、高温、高湿、酸碱水解及氧化）下的样品。在含量分析时应比较主成分结果。在色谱杂质测定中，应比较杂质情况。ICH指南指出：当使用色谱分析方法时，应提供能说明方法选择性的代表性色谱图，且图中的峰应适当地标注。为表明被分析物色谱峰未受到多个组分的影响，峰纯度检查（采用二极管阵列或质谱）可能是很有用的。检测限定义——检测限是一种限度实验，是指在实验条件下，样品中被分析物能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量。因此，限度实验仅证实的是被测物的量高于或低于某一水平。检测限通常用样品中被分析物的浓度表示（如：%、ppb）。测定——非仪器分析方法，检测限是通过对一系列含已知浓度被分析物的样品进行分析来测定，并建立被测物能被可靠地检出的最低水平。对于仪器分析方法，同样的方法也可用于非仪器分析方法。当所采用的操作法被作为是官方法定的操作法时，不必测定实际的检测限。通过分析含已知浓度（在所要求的检测限之上和之下）被分析物的一系列样品来说明检测限足够低。例如：如果要求检测的某一杂质水平是0.1%，则应保证分析操作法在这一水平能可靠地检测出该杂质。对于能显示基线噪音的仪器分析操作法，ICH指南描述了一种通用的方法，即把含已知低浓度的被分析物的样品与空白样品测出的信号进行比较，算出被分析物能被可靠地检测出的最低浓度。一般可接受的信噪比是2∶1或3∶1。其他方法是依据校正曲线的斜率及计算响应值的标准偏差的测定来确定定量限。无论采用哪种方法，均应用一定数量的样品，其浓度为近于或等于检测限，进行分析，以可靠地验证检测限。定量限定义——定量限是指样品中的被分析物能够被定量分析的最低水平，如：原料药中的杂质，成品中的降解产物。它是，在规定的实验条件下，具有可接受的精密度和准确度时测定的样品中被分析物的最低量。定量限用样品中被分析物的浓度表示（如：%，ppb）。测定——对于非仪器的操作法，定量限一般通过对一系列含有已知浓度被分析物的样品进行分析，在准确度和精密度都可接受的情况下，来确定被分析物能被定量的最小量。对于仪器分析的操作法，同样的方法也可用于非仪器分析方法。当所采用的操作法被作为是官方法定的方法时，不必测定实际的定量限。通过分析含已知浓度（在规定的浓度之上或之下）被分析物的一系列样品来说明定量限足够低。例如：如果要求分析的某一被分析物水平是0.1mg/片，则应保证在分析方法这一水平能可靠地定量被分析物。对于能显示基线噪音的仪器分析操作法，ICH指南描述了一种通用的方法，即把含已知低浓度的被分析物的样品与空白样品测出的信号进行比较，算出被分析物能被可靠地定量的最低浓度。一般可接受的信噪比是10∶1。其他方法是依据校正曲线的斜率及计算响应值的标准偏差的测定来确定定量限。无论采用哪种方法，均应用一定数量的样品，其浓度为近于或等于定量限，进行分析，以可靠地验证定量限。线性和范围线性的定义——分析操作法的线性是指在设定的范围内，检测结果与样品中被分析物的浓度直接或通过数学转换呈比例关系的能力。因此，在这部分中，“线性”指的是浓度与含量测定之间的关系。在某些情况下，为得到线性，浓度和/或测量值可能被转换。（注：在应用转换时，在回归分析中所用的加权因子可能会有变化）。可能的转换包括：对数、平方根、或倒数，虽然其它的转换也可能会被使用。如果不能得到线性，也可以用非线性模型。目的是要有一个描述浓度-响应值关系的模型，无论是线性还是非线性，范围的定义——分析操作法的范围是指由被分析物的高限和低限组成的一个区间，此区间已被能够达到一定的精密度、准确度和线性的书面的分析操作法所证实。范围通常用与分析操作法的测定结果相同的单位（如：%，ppm）表示。线性与范围的测定——应在分析操作法规定的范围内测定线性。最初建立线性是测定含有被分析物浓度系列，观察信号值。如果这些值呈线性关系，检测结果应进行适当的统计（如：用最小二乘法进行线性回归）。线性回归的数据可用于评价线性相关程度。应提供相关系数、Y轴截距、线性相关的斜率及剩余平方和。通过确证当含被分析物在一定范围（超出范围和在范围内）时，分析方法能够达到一定的精密度、准确度和线性来确定操作法的范围。ICH指南指出：建立线性，通常至少用5个浓度。同时也提出，应考虑以下最小的特定范围：原料药（或成品）含量分析：测试浓度的80%~120%某一杂质的测定：合格标准的50%~120%含量均匀度：最低范围是测试浓度的70%~130%，依据剂型特点，如定量吸入剂，必要时范围可适当放宽，或调整至一个合适的范围。溶出度实验：规定范围的±20%（如，某一控释产品的合格标准是从1小时后20%增至24小时后90%，则验证的范围应标示的0%~110%）。耐用性定义——分析操作法的耐用性是指操作法文件中所列的方法参数发生细小的但是故意造成的变化时，测定结果保持不受影响的承受程度，也是在正常使用过程中，方法可靠性的指标。耐受性可以在分析操作法的研究期间被制定。系统适用性如果在分析条件下，实验条件容易变化，则应对这些条件适当控制，或在操作法中包括预防实验。根据粗放度（中间精密度）和耐用性评价的结果应建立一系列的系统适用性参数，以确保在分析过程中分析方法的有效性。典型的变动因素是分析溶液的稳定性、不同的设备和不同的分析人员。在液相色谱法中，典型的变动因素是流动相的pH值，流动相的组成，不同供应商或不同批号的色谱柱，温度，流速。在气相色谱法中，典型的变动因素是不同批号或不同供应商的色谱柱，温度及流速。系统适用性要将设备、电子仪器、实验操作、被测试的样品等一起当作完整的系统进行评估。对于一个特定的操作法来说，系统适用性参数的设置需根据将被评估的操作法的类型而定。对于色谱方法，这些参数尤为