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DB34DB34/T2997—2017猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程ProtocolofexaminationforActinobacilluspleuropneumoniae安徽省质量技术监督局发布I1GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培NY/T537猪放线杆菌胸膜肺炎诊3.4冰箱：2℃~5℃,-20℃。23.21缓冲葡萄糖蛋白胨水：按照GB4789.28的规定执行。3.22蛋白胨水：按照GB4789.28的规定执行。3.23硫酸亚铁琼脂：按照GB4789.28的规定执行。3.24硝酸盐培养基与硝酸盐还原试剂：按照GB4789.28的规定执行。3.25氧化酶试剂：按照GB4789.28的规定执行。3.27无菌PBS溶液：制备方法见附录A中A.6。√分离培养血平板培养基等显微镜检查选取可疑菌改良B肉汤培养基不3无菌操作采集动物血，每头不少于10mL。自然凝固后无菌分离血清，分装，加盖密封后4～8℃存于饱和氯化钠溶液或30％甘油缓冲盐水溶液5.2.2猪传染性胸膜肺炎放线杆菌形态学特征：革兰氏阴性小球杆菌或纤细的小杆nm，长度60～450nm。有荚膜和菌毛，不形成芽孢且无鞭毛，有的成双排列。新鲜5.3.1对没有受污染的新鲜病料用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组ONPG试验、尿素酶试验、硫化氢试验、硝酸盐还原试验阳性，靛基质试验、甲基红试验、V-P试45.5.1猪传染性胸膜肺炎放线杆菌对小鼠、大鼠、豚鼠、家兔均有致病力，其汤纯培养物做动物试验用。小鼠腹腔注射组织悬液0.2mL或纯培养菌液0.1有纤维素性胸膜肺炎等症状，肝部肿大。以死亡小鼠的心血或脏器制成涂片，革++++++------7.1综合以上培养形态与染色特性，生化5培养基的配制20min。待培养基冷却至55℃左右时,以无菌方式添加无菌绵羊血，混匀，倾注无菌平皿，4℃保存备待培养基冷却至55℃左右时，每管均添加NAD(10～30μL/mL)以及无菌6将24.0gTSA–YE琼脂溶于500mL超纯水中，充分搅拌，待完全溶解混匀后，121℃高压灭菌将24.0gTSA–YE琼脂溶于500mL超纯水中，充分搅拌，待完全溶解混匀后，121℃高压灭菌20min。待培养基冷却至80℃左右时,以无菌方式添加无菌绵羊血，混匀，倾注无菌平皿，4℃保存备7将1.5g十二水合磷酸氢二钠、0.1g氯化钾、4.0g氯化钠、0.1g磷酸二氢钾溶于500mL8上游引物：5′-GATAAACCTTTT9DB34/T2997—2目的基因大小为342bp。阳性对照扩增出342bp,阴性空白对照孔未见有PCR扩增条带，表明试验成立，否则应重做。试验成立，被检样品孔如发现有342bp大小的扩增条带，则判定阳性(十),猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测结果电泳图见图B.1;被检样品孔如未

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