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DB34DB34/T3284—2018猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofErysipelothrixrhusiopathiae2018-12-29发布2019-01-29实施安徽省市场监督管理局发布I1本标准规定了猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法的缩略语、试剂和仪器、样品的采集、运输GB/T6682分析实验室用水规Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值4.1.275％乙醇:用新开启的无——上游引物：5′-GTGGCGCATATAATCCCGTA-3′——下游引物：5′-GCAAACGCAATGG4.1.62×TransTaq-TPCRSupe24.2.4冰箱2℃~8℃,-20℃,-80℃)。4.2.7恒温水浴锅（室温至100℃)。4.2.10混匀器5.2.1剪刀、镊子、注射器、1.5mL5.2.2所有上述采样工具必须经(121士2)℃,15min高压灭菌并烘干。用无菌注射器直接吸取至无菌Eppendorf管，分离血清。或用加有抗凝剂的注射器直接吸取菌Eppendorf管，充分混合。抗凝剂采用柠檬酸钠缓冲液，或0.5mol/LEDTA。每6mL血液加1mL5.3.3细菌培养物直接取液体培养基培养的菌液。对于在固体培养基上生长的菌落，用接种棒挑取适量菌样，放入采集的样品应置于低温、密封的容器内运输。待检样品在2℃~8℃条件下保存不应超过24h；若3离心10min,弃上清，若红细胞裂解不完全，出现红色沉淀物，则需采用灭菌双蒸水重复洗涤；收集45缓冲液的配制A.1.1成分A.1.2制法A.2.1成分A.2.2制法A.3.1成分A.3.2制法6A.4.1成分A.4.2制法称取380～390g氯化钠溶于蒸馏A.5.1成分A.5.2制法7B.1.1.2阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，不同仪器可根据仪B.1.3.2阳性反应结果判定：检测结果呈现Ct值≤30并出现特

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