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DB34DB34/T3642—2020鸡滑液囊支原体LAMP快速检测技术规程TechnicalRegulationsofLAMPAssayforRapidDetectionofMycoplasmaSynoviae2020-06-22发布2020-07-22实施安徽省市场监督管理局发布I1MS(MycoplasmaSynoviae):鸡滑液LAMP(Loop-mediatedIsothermalAmplificationAssay环介导等温扩增4.5高压蒸汽灭菌锅25.320%十二烷基硫酸钠(SDS)溶8.0)0.4mL,20%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液(pH7.2)5mL,5mol/L氯化钠4mL,灭菌双蒸水按照GenBank上公布的鸡滑液囊支原体(MS)EF-TU基因序列(登录号CP011096),应用——F3:5'-CACAAATGGATGGTGCT——B3:5'-TACTGCGTCACCTTCA——FLP:5'-CGTGAACACATTCTTCTT无菌采集咽喉拭子,关节囊肿和胸部囊肿的内部炎性分泌物,放入盛有3制备的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24h,如需长期保存应置-70℃以下,应避免反复冻8.1.2每管加入待检样品(已研磨好的被检样品上清,阳性对照样品和阴性对照样品)100取出离心管,室温融化,4℃,12000rpm离心15min。8.1.5弃上清,沿离心管开口方向管壁缓缓滴入1mL-28.1.6取出离心管,用50μL灭菌双蒸从BstDNAPolymerase试剂盒中取出相应的试剂,同时取出MSLAMP引物和双蒸水。设所需PCR的检测总数为n,其中n为被检样品、阳性对照与阴性对照之和,每个样本测111124将8.2.2中离心后的PCR管编号,放入65℃水浴锅内30~60min,之后置80℃温育20min
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