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DB34DB34/T1938—2013鸭黄病毒感染诊断技术规程TechnicalregulationforDiagnosisofduckflavivirusinfection安徽省质量技术监督局发布I1本标准规定了鸭黄病毒感染临床诊断和PCR检测的技术规程，其中包括流行病学、临床诊断、实等地的蛋鸭和种鸭由于鸭黄病毒感染而引起聚合酶链式反应（polymerasechaPCR技术是一种在体外酶促合成特异DNA片段的一种方法。由高温变性、低温退火及适温延伸等——上游引物R1：5'-CGCGGATCCTCTGGGAACGACGAGAAG-3'——下游引物R2：5'-CCGGAATTCTCGGCATTGACATTTACT-3'2该病一年四季均可发生。病鸭开始出现采食量减少和产蛋量下降。产蛋率从产蛋高峰下降到10%以下，种蛋受精率降低10％左右。病鸭产蛋多为畸形蛋和软壳蛋，病死率0～15％。没有继发感况下，病程持续10～30d，鸭群会自然康复，产蛋率也随之恢复，但一般最多可恢复到发病前的70%。有饮、食欲，但多数因饮水、采食困难衰竭而死，死在10℃以下进行样品处理。用无菌PBS缓冲液与样品按体积质量比5:1将样在含有样品的塑料离心管中加入600μL抽提液A（1mol/LTris水溶液饱和酚:三氯甲烷:异戊醇按照25:24:1的混合液用力混合至少30s,12000r/min离心5min,小心取上层水相(约800μL)，再加入700μL抽提液B(三氯甲烷/异戊醇按24:1的比例混合液)，用力混合至少30s,12000r/min离心5min，小心取上层水相(约600μL)。再加入-20℃预冷的1.5倍体积的无水乙在上述反应管中继续加入5μL的5倍逆转录酶浓缩缓酶抑制剂(20U),1μL逆转录酶M-MLV(10U)和1.——双蒸灭菌水37.5μL——反转录产物4μL——上游引物0.5μL——下游引物0.5μL——10×PCRBuffer5μL5.7.4盖好电泳仪，插好电极，将电压调至90V左5.8.1从样品处理开始设立阳性对照、阴性5.8.2取含有鸭黄病毒AH-F10株（中国典5.8.4取等体积水代替样品为模板作5.9.2结果出现大小约260bp扩增片段时，初步判定为鸭6.1临床诊断符合4.1、4.2、4.3、4.4，初步判定为6.3诊断结果符合6.1、6.2，______________

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