05版药典微生物限度检查法操作要点

0505大肠埃希菌[CMCC（B）44102]菌液的制备：24～481ml50～l00cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培5~73~5ml0.9％无菌氯化钠溶液，菌毛细吸管)0.9lml50～l00cfu（一 取试验可能用的最低稀释级供试液进行验证。验证试验至少应进行3次1:101ml50~10012个平皿，培养，计算各菌株的回收率。试验组：5×2=102ml10个；菌液组：5×2=10个，即每个菌株的加菌量，每株2个皿。 共24个本底菌组：2个细菌计数，2个霉菌和酵母菌计数。146个用于试验组计数，6个用于菌液组104个用于试验组计数，4个用于菌液组计数，2个用于霉菌本底菌回收率=[(试验组菌数-本底菌组菌数)/菌液组菌数370%以上270%以上时，霉菌计数用该验至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级的供试液2ml，lml供试液可等量分注多个平皿，倾注琼脂培养基，混匀，凝固，培养，计数。具体操作：（1ml5个皿为例1:101ml50.2ml，每株试验菌试验组：5×10=502ml50个；菌液组：5×2=10个，即每个菌株的加菌量，每株2个皿。 共80个本底菌组：10个细菌计数，10个霉菌和酵母菌计数。1glmllml，过pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜。冲洗后取出7（52个本底菌）（二）菌种大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(CMCC(B)26乙型付伤寒沙门菌(SalmonellaparatyphiB)(CMCC(B)50铜绿假单胞菌(Pseudomonasaerugmosa)(CMCC(B)10菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型付伤寒沙门菌、铜绿假单10~l00cfu10~100cfu试验菌加入增菌培养基中，依相应 结果判 阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。若试验组检出试验菌，按此（一）2～3lml90mm的无菌平皿中（1ml供试液2个平板。阴性对照试验lml2培养和计 除另有规定外，细菌培养48小时，逐日点计菌落数，一般以7272小时5～7天进行菌落汁数并报告。菌落15，则两个平1倍或以上。30～300之间、霉菌平均菌30～100之间的稀释级，作为菌数报告(取两位有效数字)的依据。1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍2(比值为高稀释级22但不超55，或高1时，以<1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为1glmllml，过阴性对照试验lml培养和计 培养条件和计数方法同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不超过菌数报告规则1glml供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落<1报告菌数(1g1ml供试品)，或<1乘以最低稀释倍数的值（二）阳性对照试 供试品进行控制菌检查时，应做阳性对照试验。阳性对照试验 取稀释液10m1照相应控制菌检查法检查，作为阴性对照。阴性对供试液制备增菌培养选择性培养基培养挑取疑似菌落 生化试验 报告结lml含供试品0.1g01m1)、1100的供试液lml(含供试品001g或lml18～24小时。18～24小时。2所列的菌落2确证试验4～5个疑似菌落，分别接种于乳糖