葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程

葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程《葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程》分为六个部分：——第1部分：葡萄霜霉病抗性鉴定；——第2部分：葡萄白粉病抗性鉴定；——第3部分：葡萄黑痘病抗性鉴定；——第4部分：葡萄炭疽病抗性鉴定；——第5部分：葡萄灰霉病抗性鉴定；——第6部分：葡萄白腐病抗性鉴定。 第1部分葡萄霜霉病抗性鉴定1范围《葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程》第1部分：葡萄霜霉病抗性鉴定，本部分规定了葡萄抗霜霉病鉴定技术的术语和定义、病原物接种体制备、室内离体抗性鉴定、田间抗性鉴定、病情调查、抗性评价和鉴定结果记载方法。本部分适用于各种葡萄种质资源对葡萄霜霉病抗性的鉴定和抗性评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2.1抗病性diseaseresistance植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。2.2致病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起发病的能力。2.3抗性评价evaluationofresistance根据采用的技术标准判别寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。2.4抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。2.5人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体接于植物体适当部位并使植物发病过程。2.6病情级别diseaseratingscale植物个体或群体发病程度的量化描述。2.7分离物isolate采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原体的纯培养物。2.8接种体inoculum用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。本标准接种体为新鲜配制的葡萄生单轴霜霉菌孢子囊。2.9接种体悬浮液suspension用于接种的含有定量接种体的液体。2.10病情指数diseaseindex（DI）通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。2.11葡萄霜霉病grapedownymildew由葡萄生单轴霜霉菌[Plasmoparaviticola(BerketCurtis)BerletdeToni]引起的一种主要危害葡萄叶片，产生受叶脉限制的多角形黄褐色病斑症状，后期叶背病斑产生白色霜状霉层的葡萄病害。3病原物接种体制备3.1病原物采集从田间采集新鲜的葡萄霜霉病发病叶片，用无菌毛刷蘸取无菌水刷去病叶背面上的病菌和杂物，用吸水纸将叶背表面水分吸干，叶背朝上放置在底部垫有浸水滤纸的保湿盘内，用PE保鲜膜密封后置于人工气候培养箱中，22℃，相对湿度（RH）90%，12h黑暗/12h光照交替保湿培养，待长出白色霜状霉层后，用无菌毛刷蘸取无菌水将病斑上新形成的孢子囊刷于无菌水中，获得分离物。分离物经鉴定确认为葡萄生单轴霜霉菌(Plasmoparaviticola)后，稀释至接种浓度用于接种。3.2病原物保存病原物保存采用以下两种方法：（1）病原物寄主活体保存：在适宜环境条件下，定期将病原菌人工接种于感病葡萄品种上，以保存病原物；（2）低温冷冻保存：将病原菌分离物加入5%二甲基亚砜，置于-80℃超低温冰箱里保存备用。3.3接种体繁殖常用的繁殖方法有活体繁殖法和离体繁殖法。活体繁殖法是将霜霉病菌接种在预先种植的健康感病品种叶片背面进行繁殖；离体繁殖法是将霜霉病菌接种在离体健康感病品种叶片背面进行繁殖。待叶背面长出大量新鲜菌体后，接种前用无菌毛刷蘸取无菌水将叶片上长出的新鲜孢子囊刷至无菌水中，经充分混匀即得病原菌孢子囊悬浮液。4室内离体抗性鉴定4.1鉴定室设置人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。4.2鉴定对照品种鉴定时可选用山葡萄“双优（Shuangyou）”为抗病对照品种，“无核白（ThompsonSeedless）”为感病对照品种。4.3鉴定设计鉴定材料随机排列，针对同一个葡萄材料，鉴定试验重复进行3次，每次重复10个叶盘。4.4鉴定材料选择选取当年生葡萄枝条自生长点向下第3-5位健康无病完全展开的叶片，用直径为1.5cm的打孔器打取叶盘。4.5接种浓度在光学显微镜下用血球计数板计数葡萄霜霉病菌孢子囊，用无菌水稀释至2×105个孢子囊/mL的悬浮液用于接种。孢子囊悬浮液每次使用需现用现配。4.6接种方法采用点接种法。从田间小心取回生长状态良好的葡萄植株新稍上第3-5节位展开的叶片，迅速在流水下轻柔冲洗，再用无菌水清洗一次，在直径为9cm的塑料培养皿底部铺一层吸水纸，加入2mL无菌水以保湿，将叶盘背面朝上随机摆放在吸水纸上。用微量移液器吸取接种体悬浮液接种于叶盘背面，每个叶盘接种20μL，盖上培养皿盖子以保持皿内湿度在90%以上。4.7接种后管理接种后将培养皿置于鉴定室内，22℃，RH=90%，12h黑暗/12h光照交替保湿培养。接种48h后，用吸水纸将接种菌液吸净。每天观察培养皿内吸水纸的干湿情况，并及时补水保湿。5田间抗性鉴定5.1鉴定葡萄园地设置鉴定葡萄园地应具备适宜葡萄生长的土壤、良好的光温湿条件，使人工接种后具有良好的发病环境。5.2鉴定对照品种鉴定时可选用山葡萄“双优（Shuangyou）”为抗病对照品种，“无核白（ThompsonSeedless）”为感病对照品种。5.3鉴定设计鉴定材料随机选取，每个品种重复3次，每重复10个叶片。5.4鉴定材料选择从田间选取当年生葡萄新稍上第3-5节位健康无病完全展开的叶片。5.5接种浓度在光学显微镜下用血球计数板计数葡萄霜霉病菌孢子囊，用无菌水稀释至2×105个孢子囊/mL的悬浮液用于接种。孢子囊悬浮液每次使用需现用现配。5.6接种方法采用喷雾接种法。在阴凉无风的天气条件下，用手持喷雾器向葡萄叶片背面喷施接种体悬浮液使其布满叶片。5.7接种后管理接种后将接种枝条套袋保湿24h以利于发病，之后去除套袋，定期喷水保湿。6病情调查6.1调查时间室内离体、田间病情调查分别于接种后7d、12d进行。6.2调查方法调查每份鉴定材料接种叶片（叶盘）发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载病情级别，计算出病情指数（DI）。病情指数按公式（1）计算：DI=×100…………（1）式中：DI——病情指数；s——各病情级别代表数值；n——各病情级别病叶（叶盘）数；N——调查总叶（叶盘）数；S——最高病情级别代表值。6.3病情分级室内离体病情分级及其对应的症状描述见表1。表1葡萄霜霉病室内离体病情级别划分病情级别症状描述0叶盘无症状1病斑面积占叶盘面积5%以下3病斑面积占叶盘面积6%～20%5病斑面积占叶盘面积21%～50%7病斑面积占叶盘面积51%以上田间病情分级及其对应的症状描述见表2。表2葡萄霜霉病田间病情级别划分病情级别症状描述0叶片无症状1病斑面积占叶片面积5%以下3病斑面积占叶片面积6%～25%5病斑面积占叶片面积26%～50%7病斑面积占叶片面积51%～75%9病斑面积占叶片面积76%以上，或叶片枯死脱落7抗性评价7.1鉴定有效性判别当感病对照材料达到其相应感病程度（DI﹥50），该批次抗霜霉病鉴定视为有效。7.2抗性评价标准依据鉴定材料的发病程度（病情指数）确定其对霜霉病的抗性水平，划分标准见表3。表3葡萄对霜霉病抗性评价标准病情指数抗性评价DI=0免疫Immunity（I）0<DI≤5高抗Highlyresistant（HR）6<DI≤25抗病Resistant（R）26<DI≤50感病Susceptible（S）50<DI≤100高感Highlysusceptible（HS）8鉴定记载表格葡萄抗霜霉病鉴定结果记载表格见表4。表4葡萄抗霜霉病鉴定结果记载表编号品种名称病情级别病情指数抗性评价总数0级1级3级5级7级9级接种时间：调查时间：调查员（签字）：鉴定技术负责人（签字）：

附录A(资料性附录)A．1病原物学名和形态描述葡萄霜霉病的病原为葡萄生单轴霉[Plasmoparaviticola(BerketCurtis)BerletdeToni]，属于鞭毛菌亚门，菌丝体在寄主细胞间蔓延，以瘤状吸器深入寄主细胞内吸取养料。发病部位的霜霉状物，即病菌的孢子囊梗及孢子囊。孢子囊梗自叶片病组织反面的气孔抽出，或从果粒皮孔抽出，4-6枝成束状，无色，单轴分枝3-6次，一般分枝2-3次，分枝处近直角，长400-780微米，宽6-10微米。分枝末端有2-3个短的小梗，圆锥状，末端钝，孢子囊即着生在小梗上。孢子囊五色、单孢，卵形或椭圆形，透明，顶端有乳头状突起，大小为（12.6-25.2）微米×（11.2-16.8）微米，着生在树枝状的孢囊梗上。每个孢子囊产生4-8个游动孢子，游动孢子肾脏形，大小为（7.5-9）微米×（6-7）微米。在扁平的一侧生有两根鞭毛，能在水中游动。一般游动半小时后，鞭毛收缩，变圆而停止活动，再经15分钟开始萌发产生芽管，经由叶片气孔侵入寄生。后期寄生叶片海绵组织内形成卵孢子。卵孢子褐色球形，壁厚，直径230-35微米。卵孢子在游离水中萌发，产生1个细芽管，偶尔也产生两个芽管，芽管长度不一，宽2-3微米。芽管萌发，产生梨形孢子囊，大小28微米×36微米，每个孢子囊形成30-60个游动孢子。A．2主要症状葡萄霜霉病只危害葡萄地上部幼嫩组织，如叶片、新梢、花穗和果实等。叶片受侵后开始呈现半透明、边缘不清晰的油渍状小斑点，受叶脉限制病斑呈多角形，后发展为黄色至褐色病斑，病斑常相互愈合成大块，天气潮湿时在病斑背面形成幼嫩密集白色似霜物。发病严重时叶片提早脱落。感病品种病斑较大，抗病品种病斑小。新梢、卷须、穗梗及叶柄发病时开始时为半透明、油渍状斑点，后后发展为黄色至褐色略微下陷的不定形，表面可着生白色霜霉层。病梢等生长停滞、扭曲，甚至枯死。幼果染病后果色变灰色，表面满布白色霜霉层，随即皱缩脱落。果粒成熟时较少感病，老果粒发病后变褐色。在我省陕南地区，因潮湿多雨，此病危害较重。葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程第2部分葡萄白粉病抗性鉴定1范围《葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程》第2部分：葡萄白粉病抗性鉴定，本部分规定了葡萄抗白粉病鉴定技术的术语和定义、病原物接种体制备、田间抗性鉴定、病情调查、抗性评价和鉴定结果记载方法。本部分适用于各种葡萄种质资源对葡萄白粉病抗性的鉴定和抗性评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2.1抗病性diseaseresistance植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。2.2抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。2.3抗性评价evaluationofresistance根据采用的技术标准判别寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。2.4致病性pathogenicity病原物所具有的破坏寄主植物和引起病变的能力。2.5人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体接于植物体适当部位并使之发病的过程。2.6病情级别diseaseratingscale人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。2.7分离物isolate采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原体的纯培养物。2.8接种体inoculums用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。本部分接种体为新鲜配制的葡萄白粉菌粉生孢子。2.9接种体悬浮液inoculumssolution用于接种的含有定量接种体的液体。2.10病情指数diseaseindex（DI）通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。2.11葡萄白粉病grapepowderymildew由葡萄钩丝壳菌[Uncinulanecator(Schw.)Burr.]引起，主要危害葡萄叶片及幼嫩组织，产生不规则病斑症状，后期病斑产生白色粉状物的葡萄病害。3病原物接种体制备3.1病原物采集采集具有典型白粉病病斑的葡萄叶片，用毛刷刷取叶片上的孢子于无菌水中，获得分离物。分离物经形态学鉴定确认为(Uncinulanecator)后，稀释至接种浓度用于接种或扩繁备用。3.2接种体繁殖接种前需要进行病原物接种体的繁殖。常用的繁殖方法是活体繁殖法，即将白粉病菌的分生孢子接种在预先种植的健康感病品种上繁殖。接种前用无菌毛刷刷取叶片上长出的新鲜孢子于盛有无菌水的烧杯中，即得孢子悬浮液（每1000毫升无菌水悬浮孢子液加入7.8克葡萄糖，调整为白粉菌的最佳渗透压），用血球计数板计数分生孢子数稀释至接种浓度。为了不影响接种效果，白粉病原菌孢子悬浮液放置时间最好不超过30min，因此从菌液制备到接种完成应限制在2h内。3.3病原物保存常用活体植株保存法：在适宜环境条件下，定期将病原菌人工接种于感病葡萄品种上，以保存病原物。4田间抗性鉴定4.1鉴定葡萄园地设置鉴定葡萄园地应具备适宜葡萄生长的土壤、良好的光温湿条件，使人工接种后具有良好的发病环境。4.2鉴定对照品种鉴定时可选用山葡萄“双优（Shuangyou）”为抗病对照品种，“无核白（ThompsonSeedless）”为感病对照品种。4.3鉴定设计鉴定材料随机选取，每个品种重复3次，每次重复10个叶片或者10个果穗。4.4鉴定材料选择从田间选取当年生葡萄新稍上第3-5节位健康无病完全展开的叶片或者生长健康一致的成熟果穗或者果实。4.5接种浓度在光学显微镜下用血球计数板计数葡萄白粉病菌分生孢子，用无菌水调至浓度为2×105个分生孢子/mL的悬浮液用于接种。分生孢子悬浮液每次使用需现用现配。4.6接种方法采用喷雾接种法。在阴凉无风的天气条件下，用手持喷雾器向葡萄叶片正反两面、果穗或者果实均匀喷施接种体悬浮液直至有水滴滴出为止。4.7接种后管理接种后将接种枝条或者果穗/果实套袋保湿16-24h以利于发病，之后去除套袋，定期喷水保湿。5病情调查5.1调查时间田间病情调查于接种后12d进行。5.2调查方法调查每份鉴定材料接种叶片和果实发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载病情级别，计算出病情指数（DI）。病情指数按公式（1）计算：DI=QUOTE错误!未找到引用源。×100…………（1）式中：DI——病情指数；s——各病情级别代表数值；n——各病情级别病叶（果实）数；N——调查总叶（果实）数；S——最高病情级别代表值。5.3病情分级田间病情分级及其对应的症状描述见表1。表1葡萄白粉病田间病情级别划分病情级别症状描述（叶片病斑面积或感病果实的百分率/%）0010.1～5.025.1～15.0315.1～30.0430.1～45.0545.1～65.0665.1～85.0785.1以上6抗性评价6.1鉴定有效性判别当感病对照材料达到其相应感病程度（DI﹥55），该批次抗白粉病鉴定视为有效。6.2抗性评价标准依据鉴定材料的发病程度（病情指数）确定其对白粉病的抗性水平，划分标准见表2。

表2葡萄对白粉病抗性评价标准病情指数抗性评价DI=0免疫Immunity（I）0.1<DI≤5.0高抗Highlyresistant（HR）5.1<DI≤25.0抗病Resistant（R）25.1<DI≤50.0感病Susceptible（S）50.1<DI≤100.0高感Highlysusceptible（HS）7鉴定记载表格葡萄抗白粉病鉴定结果记载表格见表3。表3葡萄抗白粉病鉴定结果记载表编号品种名称病情级别病情指数抗性评价总数0级1级2级3级4级5级6级7级接种时间：调查时间：调查员（签字）：鉴定技术负责人（签字）：

附录A(资料性附录)A．1病原物学名和形态描述葡萄白粉病原为葡萄钩丝壳菌[Uncinulanecator(Schw.)Burr.]，属于子囊菌亚门。发病部位的白粉层，即病菌的菌丝体、分生孢子梗及分生孢子。菌丝蔓延在寄主表皮外，白色。菌丝表生、半永久、有隔膜、透明，具有多裂片的附着胞，它突破短桩，突破角皮层和细胞壁后，在表皮细胞内形成球状吸器。菌丝直径4-5微米，形成多隔膜分生孢子梗（长10-400微米），菌丝是匐生长，而分生孢子梗与菌丝垂直，分生孢子念珠状串生，无色透明，椭圆形或卵圆形，单胞，内含颗粒体（16.3-20.9）微米×30.3微米×34.9微米。闭囊壳散生，黑褐色，呈球形，直径80-100微米，基部有10-13根附属丝，附属丝有分隔，基部褐色，顶端无色，向一方弯曲呈钩状，长度为闭囊壳的2-3倍。闭囊壳内含有4-6个子囊。子囊卵圆形至近球形，无色，大小（50-60）微米×（25-35）微米，内含4-6个卵形至椭圆形透明子囊孢子，成熟时多为4个。子囊孢子无色，单胞，大小（20-25）微米×（10-12）微米。活的子囊孢子萌发时形成一条或多条短芽管，然后每个芽管迅速形成多裂片附着胞。A．2主要症状葡萄白粉病可以危害叶片、果实、枝蔓等所有绿色部分，但以幼嫩组织比较容易受到感染。叶片发病，叶色褪绿或呈灰白色斑块，上覆盖白粉，叶面不平，病斑轮廓不整齐，大小不等，严重时白粉布满叶片，逐渐使叶片卷缩，枯萎而脱落。幼果发病，初期表面产生不规则斑块，表面产生灰白色粉状霉层，用手擦去白色粉状物，能看到在果实的皮层上有褐色或紫褐色的网状花纹。小幼果受害后不易生长，果粒小，易枯萎脱落；大幼果得病后容易变硬、畸形，易纵向开裂；转色期的果粒得病后糖分积累困难，味酸，容易开裂。新梢、果梗及穗轴发病时，出现黑褐色、网纹线纹，上覆盖白色粉状物。葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程第3部分葡萄黑痘病抗性鉴定1范围《葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程》第3部分：葡萄黑痘病抗性鉴定，本部分规定了葡萄抗黑痘病鉴定技术的术语和定义、病原物接种体制备、室内离体抗性鉴定、田间抗性鉴定、病情调查、抗性评价和鉴定结果记载方法。本部分适用于各种葡萄种质资源对葡萄黑痘病抗性的鉴定和抗性评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2．1致病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起发病的能力。2．2抗病性diseaseresistance植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。2．3抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。2．4抗性评价evaluationofresistance根据采用的技术标准判别寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。2．5人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体接于植物体适当部位并使植物发病过程。2．6病情级别diseaseratingscale植物个体或群体发病程度的量化描述。2．7分离物isolate采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原体的纯培养物。2．8培养基medium可以使病原物生长的自然或人工配制的基质。2．9接种体inoculum用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。本标准接种体为新鲜配制的葡萄生单轴黑痘菌孢子囊。2．10接种体悬浮液suspension用于接种的含有定量接种体的液体。2．11病情指数diseaseindex（DI）通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。2．12葡萄黑痘病由葡萄痂囊腔菌[Elsinoeampelina(deBary)Shear]引起的主要危害葡萄绿色幼嫩部位如果实、果梗、叶片、叶柄、新梢和卷须等的一种真菌性病害。3病原物接种体制备3．1病原体制备与鉴定从田间采集植株的发病叶片，在叶片上的典型病斑处截取病健交叉组织，裁剪成小叶段用0.1%的升汞消毒、无菌水冲洗3次后置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上，于25℃生化培养箱中黑暗培养，5-10天后长出菌组织。继而从菌生长部位边缘取小块未污染菌组织进行纯化，重复进行3次，25-28天后长出分生孢子，然后在21℃培养箱中活化24小时备用。经肉眼观察以及显微镜形态学鉴定后确认为葡萄痂囊腔菌(Elsinoeampelina)。3．2病原体扩繁目前葡萄黑痘菌多数被认定为半活体寄生，一般可在培养基上扩繁和保存，即将分离纯化获得的病原菌直接接种于PDA培养基上培养生长，定期扩繁，周期为30-40d。也可直接将培养基上的病原菌保存在20%的甘油里置于-80℃超低温冰箱中保存，60d后孢子囊仍具有致病力。4室内离体抗性鉴定4．1鉴定室设置人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。4．2鉴定对照品种鉴定时可选用毛葡萄“商-24（Shang-24）”为抗病对照品种，“无核白（ThompsonSeedless）”为感病对照品种。4．3鉴定设计鉴定材料随机排列，针对同一个葡萄材料，鉴定试验重复进行3次，每次重复10个叶盘。4．4鉴定材料选择从田间选取生长状态良好的葡萄植株新稍上第3-5节位健康无病完全展开的叶片，用直径为1.5cm的打孔器打取叶盘。4．5接种浓度刮取培养基表面的菌丝至蒸馏水中，振荡涡旋，滤去菌丝残体，获得清液，在光学显微镜下用血球计数板计数葡萄黑痘病菌孢子囊，用无菌水调至浓度为2×106个孢子囊/mL的悬浮液用于接种。孢子悬浮液每次使用需现用现配。4．6接种方法采用点接种法。从田间小心取回生长状态良好的葡萄植株新稍上第3-5节位展开的叶片，迅速在流水下轻柔地冲洗，再用无菌水清洗一次，晾干后插入到托盘内的WA（含0.8%琼脂的琼脂培养基）上。用微量移液器吸取接种体悬浮液接种于叶盘正面，每个叶盘接种20μL后晾干，再将保鲜膜上喷一层薄薄的无菌水水雾后覆盖托盘，以保持托盘内湿度在90%以上。4．7接种后管理接种后将培养托盘置于鉴定室内，23℃，RH=90%，前24h在黑暗条件下，接下来的时间按照12h光照/12h黑暗交替进行。每天观察托盘内保鲜膜的干湿情况，及时补水保湿。5田间抗性鉴定5．1鉴定葡萄园地设置鉴定葡萄园地应具备适宜葡萄生长的土壤、良好的光温湿条件，使人工接种后具有良好的发病环境。5．2鉴定对照品种鉴定时可选用毛葡萄“商-24（Shang-24）”为抗病对照品种，“无核白（ThompsonSeedless）”为感病对照品种。5．3鉴定设计鉴定材料随机选取，每个品种重复3次，每重复10个叶片或者10个果穗。5．4鉴定材料选择从田间选取当年生葡萄新稍上第3-5节位健康无病完全展开的叶片或者生长健康一致的成熟果穗或者果实。5．5接种浓度刮取培养基表面的菌丝至蒸馏水中，振荡涡旋，滤去菌丝残体，获得清液，在光学显微镜下用血球计数板计数葡萄黑痘病菌孢子囊，用无菌水调至浓度为2×106个孢子囊/mL的悬浮液用于接种。孢子悬浮液每次使用需现用现配。5．6接种方法采用喷雾接种法。在阴凉无风的天气条件下，用手持喷雾器向葡萄叶片正反两面、果穗或者果实喷施接种体悬浮液使其布满叶片。5．7接种后管理接种后将接种枝条或者果穗/果实套袋保湿24h以利于发病，之后去除套袋，定期喷水保湿。6病情调查6．1调查时间室内离体、田间病情调查分别于接种后5d、10d进行。6．2调查方法调查每份鉴定材料接种叶片（叶盘/果实）发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载病情级别，计算出病情指数（DI）。病情指数按公式（1）计算：DI=×100…………（1）式中：DI——病情指数；s——各病情级别代表数值；n——各病情级别病叶（叶盘/果实）数；N——调查总叶（叶盘/果实）数；S——最高病情级别代表值。6．3病情分级室内离体病情分级及其对应的症状描述见表1。表1葡萄黑痘病室内离体病情级别划分病情级别症状描述0叶盘无症状1病斑面积占叶盘面积5%以下2病斑面积占叶盘面积5.1%～10.0%3病斑面积占叶盘面积10.1%～35.0%4病斑面积占叶盘面积35.1%～50.0%5病斑面积占叶盘面积50.1%以上田间病情分级及其对应的症状描述见表2。表2葡萄黑痘病田间病情级别划分病情级别症状描述0叶片或果实无症状1病斑面积或感病果实的百分率0.1%～5%2病斑面积或感病果实的百分率5.1%～15.0%3病斑面积或感病果实的百分率15.1%～30.0%4病斑面积或感病果实的百分率30.1%～45.0%5病斑面积或感病果实的百分率45.1%～65.0%6病斑面积或感病果实的百分率65.1%～85.0%7病斑面积或感病果实的百分率85.1%以上7抗性评价7．1鉴定有效性判别当感病对照材料达到其相应感病程度（DI﹥50），该批次抗黑痘病鉴定视为有效。7．2抗性评价标准依据鉴定材料的发病程度（病情指数）确定其对黑痘病的抗性水平，划分标准见表3。表3葡萄对黑痘病抗性评价标准病情指数抗性评价DI=0免疫Immunity（I）0.1<DI≤5.0高抗Highlyresistant（HR）5.1<DI≤25.0抗病Resistant（R）25.1<DI≤50.0感病Susceptible（S）50.1<DI≤100.0高感Highlysusceptible（HS）8鉴定记载表格葡萄抗黑痘病鉴定结果记载表格见表4。表4葡萄抗黑痘病鉴定结果记载表编号品种名称病情级别病情指数抗性评价总数0级1级2级3级4级5级6级7级接种时间：调查时间：调查员（签字）：鉴定技术负责人（签字）：

附录A(资料性附录)A．1病原物学名和形态描述葡萄黑痘病病原菌是葡萄痂囊腔菌（Elsinoeampelina(deBary)Shear），属于子囊菌亚门、痂囊腔菌属，中国尚未发现。无性阶段为葡萄痂圆孢菌（Sphacelomaampelium(deBary)），属于半知菌亚门痂圆孢菌属。病菌的无性阶段致病，有性阶段病菌很少见。病菌的无性阶段致病。病菌在病斑的外表形成分生孢子盘，半埋于寄生组织内，分生孢子梗短，不分枝，无色，单胞，大小为6.6-13.2微米×1.3-2.0微米，顶部生有椭圆形或卵形的分生孢子，无色、单胞，两端各有一个油球，大小为4.8-11.6微米×2.2-3.7微米。在水上分生孢子产生芽管，迅速固定在基物上，秋天不再形成分生孢子盘，但在新梢病部边缘形成菌块即菌核，这是病菌主要越冬结构。春天菌核产生分生孢子。子囊果初埋于病组织内，后突破表皮外露，全体为一块状不规则的由拟薄壁组织构成的子座，外面有一层皮壳，其内有多个排列不整齐的腔穴，每个腔穴着生1个子囊，子囊无色，近球形，其内藏有4-8个子囊孢子。子囊孢子无色，香蕉形，具有3个隔膜，大小为15-16微米×4-4.5微米。A．2主要症状葡萄黑痘病主要危害葡萄的绿色幼嫩部位，如果实、果梗、叶片、叶柄、新梢和卷须等。叶片：开始出现针头大红褐色至黑褐色斑点，周围有黄色晕圈。后病斑扩大呈圆形或不规则形，中央灰白色，稍凹陷，边缘暗褐色或紫色，直径1-4毫米。干燥时病斑自中央破裂穿孔，但病斑周缘仍保持紫褐色的晕圈。叶脉：病斑呈梭形，凹陷，灰色或灰褐色，连边缘暗褐色。叶脉被害后，由于组织干枯，常使叶片扭曲，皱缩。穗轴：发病使全穗或部分小穗发育不良，甚至枯死。果梗患病要使果实干枯脱落或僵化。果实：绿果被害，初为圆形深褐色小斑点，后扩大，直径可达2-5毫米，中央凹陷，呈灰白色，外部仍为深褐色，而周缘紫褐色似“鸟眼”状。多个病斑可连接成大斑，后期病斑硬化或龟裂。病果小而酸，失去食用价值。染病较晚的果粒，仍能长大，病斑凹陷不明显，但果味较酸。病斑限于果皮，不深入果肉。空气潮湿时，病斑上出现乳白色的粘质物，此为病菌的分生孢子团。新梢、蔓、叶柄或卷须：发病时，初现圆形或不规则小斑点，以后呈灰黑色，边缘深褐色或紫色，中部凹陷开裂。新梢未木质化以前最易感染，发病严重时，病梢生长停滞，萎缩，甚至枯死。叶柄染病症状与新梢上相似。葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程第4部分葡萄炭疽病抗性鉴定1范围《葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程》第4部分：葡萄炭疽病抗性鉴定，本部分规定了葡萄抗炭疽病鉴定技术的术语和定义、病原物接种体制备、室内离体抗性鉴定、田间抗性鉴定、病情调查、抗性评价和鉴定结果记载方法。本部分适用于各种葡萄种质资源对葡萄炭疽病抗性的鉴定和抗性评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2．1致病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起发病的能力。2．2抗病性diseaseresistance植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。2．3抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。2．4抗性评价evaluationofresistance根据采用的技术标准判别寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。2．5人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体接于植物体适当部位并使植物发病过程。2．6病情级别diseaseratingscale植物个体或群体发病程度的量化描述。2．7分离物isolate采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原体的纯培养物。2．8培养基medium可以使病原物生长的自然或人工配制的基质。2．9接种体inoculum用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。2．10病情指数diseaseindex（DI）通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。2．11葡萄炭疽病由胶胞炭疽菌[Colletotrichumgloeosporioide(Penz.)Sacc]引起的一种主要危害葡萄果实，严重时造成果实腐烂的葡萄病害。3病原物接种体制备3．1病原体分离采用单病斑分离法从发病葡萄果实的典型病斑上分离炭疽病病原物。经分离纯化后，形态学鉴定为葡萄胶胞炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioide)。3．2病原体培养葡萄炭疽病病菌可以离体培养，菌种在4℃保存备用，在-80℃长期保存。将病原菌接种于PDA固体培养基上，28℃下黑暗培养，待菌丝布满后，在超净工作台里用接种针划伤菌丝促进产生孢子。3．2接种体悬浮液制备在产生孢子的培养皿中加入适量无菌水，淹没菌丝体静置10min，再用灭菌的接种环在菌丝表面轻轻来回刮动，使游动孢子充分释放到水中，将孢子悬浮液吸到三角瓶中，在光学显微镜下用血球计数板计数葡萄炭疽病原菌孢子数，用无菌水将制备的孢子悬浮液稀释至2×106个孢子/mL用于接种。4室内离体抗性鉴定4．1鉴定室设置人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。4．2鉴定对照品种鉴定时可选用山葡萄“双优（Shuangyou）”为抗病对照品种，“无核白（ThompsonSeedless）”为感病对照品种。4．3鉴定设计鉴定材料随机排列，针对同一个葡萄材料，鉴定试验重复进行3次，每次重复10个叶片或者30粒果实。4．4鉴定材料选择从田间选取生长状态良好的葡萄当年生新稍上第3-5节位健康无病完全展开的叶片和大小一致健康的成熟果实。4．5接种方法及接种后管理叶片抗性鉴定接种方法：选取健康叶片，清水冲洗后用70%酒精擦拭一遍，自然晾干后用于接种，每个处理10个叶片。对叶片进行正面一针刺伤，刺伤时避开叶片主脉。在刺伤处滴30μL孢子悬浮液，每个叶片接种4~6处，置于28℃恒温培养箱黑暗培养，每隔24h调查1次，以接种5d后的病斑大小为鉴定数据。果实抗性鉴定接种方法：用清水冲洗果实，再放入70%酒精溶液中浸泡1min进行表面快速消毒，在超净工作台晾干。每个单株的果实30粒，在果实表面喷洒孢子悬浮液。置于28℃黑暗培养，每48h调查1次，以接种6d后的病斑大小为鉴定数据。5田间抗性鉴定5．1鉴定葡萄园地设置鉴定葡萄园地应具备适宜葡萄生长的土壤、良好的光温湿条件，使人工接种后具有良好的发病环境。5．2鉴定对照品种鉴定时可选用山葡萄“双优（Shuangyou）”为抗病对照品种，“无核白（ThompsonSeedless）”为感病对照品种。5．3鉴定设计鉴定材料随机选取，每个品种重复3次，每次重复10个果穗。5．4鉴定材料选择从田间选取生长状态一致的葡萄新生果穗。5．5接种方法及接种后管理由于葡萄炭疽病菌可以侵染葡萄的一切幼嫩组织，因此在座果后，用硫酸纸袋套果穗，以防自然侵染。待果实成熟时，采用喷雾接种法在果穗表面均匀喷洒孢子悬浮液，套袋保湿3d后去掉纸袋，10d后调查果粒发病率。6病情调查6．1调查时间室内离体、田间病情调查分别于接种后5d、10d进行。6．2调查方法调查每份鉴定材料接种叶片或果实发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载病情级别，计算出病情指数（DI）。病情指数按公式（1）计算：DI=×100…………（1）式中：DI——病情指数；s——各病情级别代表数值；n——各病情级别病叶（果实）数；N——调查总叶（果实）数；S——最高病情级别代表值。6．3病情分级室内离体叶片病情分级及其对应的症状描述见表1。

表1葡萄炭疽病室内离体叶片病情级别划分病情级别症状描述0叶片无病斑1病斑面积占叶片面积5%以下3病斑面积占叶片面积6%～25%5病斑面积占叶片面积26%～50%7病斑面积占叶片面积51%～75%9病斑几乎布满叶片或叶片枯死室内离体果实病情分级及其对应的症状描述见表2。表2葡萄炭疽病室内离体果实病情级别划分病情级别症状描述0全果无症状0.5果实腐烂面积1/4以下1果实腐烂面积1/4～1/22果实腐烂面积1/2～3/43果实腐烂面积3/4以上田间病情分级及其对应的症状描述见表3。表3葡萄炭疽病田间病情级别划分病情级别症状描述0全果无症状1果粒发病率0.1%～5.0%2果粒发病率5.1%～15.0%3果粒发病率15.1%～30.0%4果粒发病率30.1%～50.0%5果粒发病率50.1%～100.0%7抗性评价7．1鉴定有效性判别当感病对照材料达到其相应感病程度（DI﹥50），该批次抗炭疽病鉴定视为有效。7．2抗性评价标准依据鉴定材料的发病程度（病情指数）确定其对炭疽病的抗性水平，划分标准见表3。表3葡萄对炭疽病抗性评价标准病情指数抗性评价DI=0免疫Immunity（I）0.1<DI≤5.0高抗Highlyresistant（HR）5.1<DI≤25.0抗病Resistant（R）25.1<DI≤50.0感病Susceptible（S）50.1<DI≤100.0高感Highlysusceptible（HS）8鉴定记载表格葡萄抗炭疽病鉴定结果记载表格见表4。表4葡萄抗炭疽病鉴定结果记载表编号品种名称病情级别病情指数抗性评价总数0级1级2级3级4级5级6级7级接种时间：调查时间：调查员（签字）：鉴定技术负责人（签字）：

附录A(资料性附录)A．1病原物学名和形态描述病原有性世代为围小丛壳菌（Glomerellacingulata(Stonem)SpauldetSchrenk），属于子囊菌亚门，中国尚未发现。常见的无性阶段为Colletotrichumgloeosporioide(Penz.)Sacc，异名为果生盘长孢菌GloeosporiumfructigenumBerk，属于半知菌亚门。病斑上的小黑点，即病菌的分生孢子盘，分生孢子盘为盘状，埋生于寄主表皮下，后突破表皮外露，孢子盘大小为377.3-480.2微米，盘上聚生圆筒形或棍棒形、短小、单胞、无色的分生孢子梗。分生孢子梗大小为（12-26）微米×（3.5-4.0）微米，孢子梗顶端产生大量的分生孢子并有黏质物。分生孢子椭圆形或圆筒形，单胞，无色，两端钝圆，内有1个油点或不明显，大小为（10.3-15.0）微米×（3.3-4.7）微米。A．2主要症状葡萄炭疽病主要发生在葡萄果实和穗轴上，也能侵害叶片、新梢、卷须、果梗等部位，但症状不如果实和穗轴上明显。在花穗初期即开始感病，受侵染的花或花梗变褐腐烂，造成大量落花，后期整个花穗烂掉。幼果发病多从近地果穗顶部果粒开始，发病最初在果面产生针头大小的褐色圆斑，后期随着果实增大、含糖量增加、果实开始着色，病斑逐渐扩大并凹陷，果肉变软腐烂，表面产生轮纹状排列的小黑点，即病菌的分生孢子器。天气潮湿时，病斑中央有绯红色粘质物，即分生孢子团。发病严重时，病斑可扩展到整个果面乃至全穗。在欧美杂交种葡萄上，病果多软腐脱落；在欧洲种葡萄上，一般干缩成黑色僵果。侵染新梢和叶片时，穗柄和叶柄、叶缘也出现近圆形褐色病，湿度大时，也会产生粉红色的分生孢子团。叶片发病初为褐色小圆斑，梢凹陷，当小病斑密布全叶，病斑相连时，往往使叶片枯黄脱落。新梢受害时呈现淡黄褐色病斑，被害部易脱落，残痕处有绯红色粘质物。果梗或穗轴发病，产生暗褐色长圆形凹陷病斑，并有绯红色粘质物，严重时病部以下果穗干枯脱落。葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程第5部分葡萄灰霉病抗性鉴定1范围《葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程》第5部分：葡萄灰霉病抗性鉴定，本部分规定了葡萄抗灰霉病鉴定技术的术语和定义、病原物接种体制备、抗性评价和鉴定结果记载方法。本部分适用于各种葡萄种质资源对葡萄灰霉病抗性的鉴定和抗性评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2．1抗病性diseaseresistance植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。2．2致病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起发病的能力。2．3抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。2．4抗性评价evaluationofresistance根据采用的技术标准判别寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。2．5人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体接于植物体适当部位并使植物发病过程。2．6病情级别diseaseratingscale植物个体或群体发病程度的量化描述。2．7分离物isolate采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原体的纯培养物。2．8培养基medium可以使病原物生长的自然或人工配制的基质。2．9接种体inoculum用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。2．10接种体悬浮液inoculumssolution用于接种的含有定量接种体的液体。2．11病情指数diseaseindex（DI）通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。2．12葡萄灰霉病由灰葡萄孢菌[BotrytiscinereaPers]引起的危害葡萄叶片、花序等幼嫩组织和成熟果实，产生水渍状病斑的葡萄病害。3病原物接种体制备3．1病原体来源和保存接种工作所使用的灰霉菌菌株是从感染灰霉病葡萄果实的典型病斑上分离纯化后所得，该菌株在23℃黑暗条件下培养3-4周后自发产生分生孢子。可在4℃条件下，短期保存备用。长期保存于-80℃超低温冰箱中。3．2病原体的分离和鉴定选取发病部位和健康部位交叉的组织，用0.1%的升汞消毒、无菌水冲洗3次，取组织小块放置在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上，黑暗、23-25℃条件下进行培养，7-11天后长出灰霉菌组织。从灰霉菌生长部位边缘取小块菌组织进行纯化，重复进行3次，3-4周后长出分生孢子。3．3孢子悬浮液的配制刮取培养基表面的菌丝至蒸馏水中，振荡涡旋，滤去菌丝残体，获得清液，用血球计数板进行计数，调整至需要的浓度。孢子悬浮液每次使用现用现配，如4℃放置过夜，可在使用前在23℃培养箱内孵育2h。4室内离体抗性鉴定4．1鉴定室设置人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。4．2鉴定对照品种鉴定时可选用山葡萄“双优（Shuangyou）”为抗病对照品种，“无核白（ThompsonSeedless）”为感病对照品种。4．3鉴定设计鉴定材料随机排列，针对同一个葡萄材料，鉴定试验重复进行3次，每次重复10个叶片或者果实。接种4d后测量病斑面积，计算病情指数。4．4鉴定材料选择从田间选取生长状态良好的葡萄当年生新稍上第3-5节位健康无病完全展开的叶片或者发育一致的成熟果实。4．5接种方法及接种后管理在流水下轻柔地冲洗叶片或者果实15分钟，再用无菌水清洗一次，晾干后插入到托盘内含0.8%的水琼脂培养基上。均匀一致地喷施适当浓度的孢子悬浮液后，再将保鲜膜上喷一层薄薄的水雾后覆盖托盘，以保持托盘内湿度在90%以上。按照以上步骤喷施无菌水作为对照。放入23℃培养箱中培养，前24h在黑暗条件下，接下来的时间按照12h光照/12h黑暗交替进行。4．7最佳接种体和接种浓度用于葡萄灰霉病抗性鉴定的最佳接种体为直接由无菌水配制的孢子悬浮液，最佳接种浓度为1.5×106个孢子/mL。5田间抗性鉴定5．1鉴定葡萄园地设置鉴定葡萄园地应具备适宜葡萄生长的土壤、良好的光温湿条件，使人工接种后具有良好的发病环境。5．2鉴定对照品种鉴定时可选用山葡萄“双优（Shuangyou）”为抗病对照品种，“无核白（ThompsonSeedless）”为感病对照品种。5．3鉴定设计鉴定材料随机选取，每个品种重复3次，每次重复10个叶片或者10个果穗。5．4鉴定材料选择从田间选取当年生葡萄新稍上第3-5节位健康无病完全展开的叶片或者生长健康一致的成熟果穗或者果实。5．5接种方法及接种后管理配制孢子悬浮液（1.5×106个孢子/mL）用于接种，接种采用喷雾法。在阴凉无风的天气条件下，用手持喷雾器向葡萄叶片正反两面、果穗或者果实均匀喷施孢子悬浮液直至有水滴滴出为止。接种后套袋保湿24h以利于发病。6病情级别与标准6．1调查时间室内离体、田间病情调查分别于接种后4d、10d进行。6．2病情分级室内离体叶片病情分级及其对应的症状描述见表1。表1葡萄灰霉病室内离体叶片病情级别划分病情级别症状描述抗性类别缩写类别0叶片无症状I免疫1病斑面积占叶片面积的5%以下HR高抗3病斑面积占叶片面积的6%～15%R抗病5病斑面积占叶片面积的16%～25%MR中抗7病斑面积占叶片面积的26%～50%S感病9病斑面积占叶片面积的50%以上HS高感室内离体果实病情分级及其对应的症状描述见表2。表2葡萄灰霉病室内离体果实病情级别划分病情级别症状描述抗性类别缩写类别0果实无病斑I免疫1病斑直径小于0.1cmHR高抗3病斑直径0.1cm～0.2cmR抗病5病斑直径0.2cm～0.3cmMR中抗7病斑直径0.3cm～0.4cmS感病9病斑直径大于0.5cmHS高感田间病情分级及其对应的症状描述见表3。表3葡萄灰霉病田间病情级别划分病情级别症状描述抗性类别缩写类别0叶片无病斑I免疫1单叶片有病斑3个HR高抗3单叶片有病斑4个～6个R抗病5单叶片有病斑7个～10个MR中抗7单叶片有病斑11个～20个，部分密集成片S感病9单叶片有病斑密集，占叶面积四分之一以上HS高感7抗性评价7．1鉴定有效性判别对照感病品种的抗性级别达到7级-9级，该批次抗灰霉病鉴定视为有效。7．2抗性评价7.2.1鉴定试验结果中，如有2次及以上的抗性类别是一致的，则此抗性类别作为最终鉴定结论。7.2.2鉴定试验结果中，同一鉴定葡萄材料的抗性类别，有2次及以上不一致时，需要进行重复鉴定。在连续两次鉴定试验中，如有4次及以上的抗性类别是一致的，则此抗性类别作为最终鉴定结论。7.2.3对于达到高度抗病的葡萄材料，需在第二年做重复鉴定。当连续两年鉴定抗性类别一致时，则此抗性类别作为最终鉴定结论。7.2.4同一鉴定葡萄材料连续两年的抗性类别不一致时，则需要做第三次及以上抗性鉴定，按本标准7.2.1~7.2.3规则重新划分抗性类别。

附录A(资料性附录)A．1病原物学名和形态描述葡萄灰霉病的病原为灰葡萄孢霉（BotrytiscinereaPers），属于半知菌亚门。分生孢子梗细长灰褐色，树枝状分枝，自寄主表皮、菌丝体或菌核长出，密集成丛；孢子梗细长分枝，浅灰色，大小为（280-550）微米×（12-24）微米，顶端细胞膨大呈圆形，上面生出许多小梗，小梗上着生分生孢子，大量分生孢子聚集成葡萄穗状。分生孢子圆形或椭圆形，单胞，无色或淡灰色，大小为（9-15）微米×（6.5-10）微米，菌核黑色，长圆形，1-2毫米，外部为疏丝组织，内部为拟薄壁组织。A．2主要症状葡萄灰霉病主要危害花序、幼果和已经成熟的果实，也可危害新梢、叶片和果梗等。花穗多在开花前发病，花序受害初期似被热水烫状，呈暗褐色，病组织软腐，表面密生灰色霉层，被害花序萎蔫，幼果极易脱落；果梗感病后呈黑褐色，有时病斑上产生黑色块状的菌核；葡萄花后，果穗染病初呈淡褐色水浸状，很快变为暗褐色，整个果穗软腐，此期若遇阴雨，2-3天后果穗上长出一层淡灰色霉层；果实在近成熟期感病，先产生淡褐色凹陷病斑，很快蔓延全果，使果实腐烂。发病严重时，整穗或一部分果穗腐烂，其上长出鼠灰色霉层，发病后果梗变黑色，后期病部长出黑色块状菌核，最终扩展后整穗长满霉层且果实全部腐烂。新梢叶片也能感病，产生不规则的褐色病斑，病斑有时出现不规则轮纹，潮湿时生有不规则灰霉层，一般每片叶有病斑2-5块，严重时病部也能长出鼠灰色霉层，最后干枯。葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程第6部分葡萄白腐病抗性鉴定1范围《葡萄主要真菌病害抗性鉴定技术规程》第6部分：葡萄白腐病抗性鉴定，本部分规定了葡萄抗白腐病鉴定技术的术语和定义、病原物接种体制备、室内离体抗性鉴定、田间抗性鉴定、病情调查、抗性评价和鉴定结果记载方法。本部分适用于各种葡萄种质资源对葡萄白腐病抗性的鉴定和抗性评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2．1病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起发病的能力。2．2抗病性diseaseresistance植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。2．3抗病性鉴定identificationofdiseaseresistance通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。2．4抗性评价evaluationofresistance根据采用的技术标准判别寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。2．5人工接种artificialinoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体接于植物体适当部位并使植物发病过程。2．6病情级别diseaseratingscale植物个体或群体发病程度的量化描述。2．7分离物isolate采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原体的纯培养物。2．8培养基medium可以使病原物生长的自然或人工配制的基质。2．9接种体inoculum用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。2．10病情指数diseaseindex（DI）通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。2．11葡萄白腐病由白腐盾壳霉菌[Coniothyriumdiplodiella（Speq.）Sacc]引起的主要危害果穗导致果实腐烂，也危害新梢和叶片的葡萄病害。3病原物接种体制备3．1病原体分离采用单病斑分离法从发病葡萄果实的典型病斑上分离白腐病病原物。经分离纯化后，形态学鉴定为葡萄白腐盾壳霉菌(Coniothyriumdiplodiella)。3．2病原体培养葡萄白腐病病菌为葡萄专性寄生，可以离体培养，将病原菌接种于PDA固体培养基上，28℃下黑暗培养，3d后菌丝均匀分布，但未产生孢子，4℃保存备用。4室内离体抗性鉴定4．1鉴定室设置人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。4．2鉴定对照品种鉴定时可选用刺葡萄♂(Vitisdavidii)为抗病对照品种，欧亚种“美人指（ManicureFinger）”为感病对照品种。4．3鉴定设计鉴定材料随机排列，针对同一个葡萄材料，鉴定试验重复进行3次，每次重复10个叶片。4．4鉴定材料选择从田间选取生长状态良好的葡萄当年生新稍上第3-5节位健康无病完全展开的叶片。4．5接种方法及接种后管理从田间小心取回生长状态良好的葡萄植株新稍上第3-5节位展开的叶片，每个处理取10个叶片。病原菌采用PDA固体培养基，28℃黑暗培养3-5d，菌丝块接种到叶片正面，刺伤时避开叶片主脉，每个叶片接种1～4处，分布于叶片的不同位置，将接种后的叶片放入大培养皿的下底内，上盖覆浸湿但不滴水的滤纸，不能接触叶片，封口膜密封保湿，28℃黑暗培养。5田间抗性鉴定5．1鉴定葡萄园地设置鉴定葡萄园地应具备适宜葡萄生长的土壤、良好的光温湿条件，使人工接种后具有良好的发病环境。5．2鉴定对照品种鉴定时可选用刺葡萄♂(Vitisdavidii)为抗病对照品种，欧亚种“美人指（ManicureFinger）”为感病对照品种。5．3鉴定设计鉴定材料随机选取，每个品种重复3次，每重复10个叶片或者10个果穗。5．4鉴定材料选择从田间选取当年生葡萄新稍上第3-5节位健康无病完全展开的叶片或者生长健康