《LC-MS-MS液质联用法测定凉茶中非法添加的22种化学药物》

ICS67.050

CCSA68

团体标准

T/HZBXXXXX—2024

LC-MS/MS液质联用法测定凉茶中非法添加

的22种化学药物

LC-MS/MSDeterminationof22illegallyaddedchemicaldrugsinherbalteaby

liquidchromatography-massspectrometry

（征求意见稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

惠州市标准化协会发布

T/HZBXXXXX—2024

LC-MS/MS液质联用法测定凉茶中非法添加的22种化学药物

1范围

本文件规定了凉茶中非法添加的22种化学药物的液相色谱-质谱/质谱测定方法。

本文件适用于凉茶中甲氧苄啶、洛美沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、对乙酰氨基酚、氨基比林、非那

西丁、氯霉素、氯唑沙宗、泼尼松、氢化可的松、吡罗昔康、甲基泼尼松龙、地塞米松、曲安奈德、舒

林酸、醋酸泼尼松、酮洛芬、美洛昔康、醋酸地塞米松、芬布芬、双氯芬酸钠的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4试剂与材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水。

试剂

4.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

4.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。

4.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。

溶液配制

4.2.180%（V/V）乙腈水溶液：量取20mL水于80mL乙腈（4.1.2）中，混合均匀。

4.2.20.1%甲酸溶液：量取1mL甲酸（4.1.3），加水定容至1000mL，混匀备用。

标准品

化学药物标准品：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

标准溶液配制

4.4.1标准储备溶液：甲氧苄啶、洛美沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、对乙酰氨基酚、氨基比林、非那

西丁、氯霉素、氯唑沙宗、泼尼松、氢化可的松、吡罗昔康、甲基泼尼松龙、地塞米松、曲安奈德、舒

林酸、醋酸泼尼松、酮洛芬、美洛昔康、醋酸地塞米松、芬布芬、双氯芬酸钠标准品，用甲醇配制成标

准储备液，其中甲氧苄啶，氧氟沙星，非那西丁和吡罗昔康浓度为1μg/mL；洛美沙星，对乙酰氨基酚，

氨基比林，舒林酸和美洛昔康终浓度为5μg/mL；其余13种成分浓度为10μg/mL。再根据需要用乙腈

稀释成相应的标准工作液。置于-20℃冰箱中避光保存，有效期为3个月。

4.4.2混合标准系列工作溶液：取适量标准储备溶液，用80%（v/v）乙腈水溶液进行稀释，配制成混

合标准系列工作溶液。其中甲氧苄啶，氧氟沙星，非那西丁和吡罗昔康终浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL、

0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL，洛美沙星，对乙酰氨基酚，氨基比林，

舒林酸和美洛昔康终浓度为0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.5ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、

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50.0ng/mL，其余13种成分浓度为1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、

50.0ng/mL、100.0ng/mL，临用时配制。

材料

微孔有机过滤膜：0.22μm。

5仪器和设备

液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。

天平：感量为0.001g和0.01mg。

离心机：转速≥5000r/min。

涡旋混合器。

超声波振荡器。

移液器：5mL、10mL。

具塞塑料离心管：50mL。

6测定步骤

样品制备

准确称取凉茶样品（液体）1.0g（精确到0.001g）混匀后，置于50mL塑料离心管中，加入30mL

乙腈，涡旋混合均匀，超声提取30min，静置至室温，用乙腈定容至刻度，摇匀，以8000r/min离心10

min，经0.22μm有机滤膜过滤，待测定。

测定

6.2.1色谱参考条件

a)色谱柱：C18色谱柱，2.1×100mm，1.7μm或同等性能的色谱柱；

b)流速：0.3mL/min；

c)进样体积：1µL；

d)柱温：35℃；

e)A为0.1%甲酸溶液；B为乙腈。梯度洗脱见表1。

表1流动性梯度洗脱条件

时间/min流动相A/%流动相B/%

09010

1.08020

2.07525

3.56040

11.01585

12.09010

15.09010

6.2.2质谱/质谱参考条件

a)离子源：电喷雾离子源（ESI）；

b)扫描方式：正、负离子；

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c)检测方式：多反应监测（MRM）；

d)雾化气：氮气；

e)脱溶剂管温度：250℃；

f)离子源温度:400℃；

g)雾化气流量：3.0L/min；

h)干燥气流量：10.0L/min；

i)质谱采集参数见表2。

表222种化学药物质谱参数

母离子子离子

序号物质名称电离模式CE（V）

（m/z）（m/z）

*230.124

1甲氧苄啶ESI+291.05

261.127

*265.126

2洛美沙星ESI+352.1

308.218

*261.128

3氧氟沙星ESI+362.2

318.220

*233.124

4诺氟沙星ESI+320.1

276.118

*110.219

5对乙酰氨基酚ESI+152.05

93.022

*113.011

6氨基比林ESI+232.1

187.07

*110.123

7非那西丁ESI+180.1

138.218

*152.017

8氯霉素ESI-321.1

257.212

3

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母离子子离子

序号物质名称电离模式CE（V）

（m/z）（m/z）

*75.824

9氯唑沙宗ESI-168.05

132.224

*341.113

10泼尼松ESI+359.15

147.324

*121.223

11氢化可的松ESI+363.2

105.141

*121.121

12吡罗昔康ESI+332.1

164.118

*357.312

13甲基泼尼松龙ESI+375.25

161.121

*355.315

14地塞米松ESI+393.2

147.328

*397.216

15曲安奈德ESI+435.25

339.116

*233.252

16舒林酸ESI+357.05

248.135

*295.016

17醋酸泼尼松ESI+401.15

147.127

*105.129

18酮洛芬ESI+255.1

209.014

4

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母离子子离子

序号物质名称电离模式CE（V）

（m/z）（m/z）

*115.121

19美洛昔康ESI+352.05

141.120

*309.217

20醋酸地塞米松ESI+435.25

337.215

*181.124

21芬布芬ESI+255.1

237.112

*250.111

22双氯芬酸钠ESI-294.1

214.3519

注1：*为定量离子。

注2：表2所列参考质谱条件仅供参考，当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化

到最佳。

定性测定

取试样溶液（6.1）与混合标准系列工作溶液（4.4.2）在相同分析条件下测定，试样中如呈现定量离

子对和定性离子对的色谱峰，被测成分的特征离子峰保留时间与混合标准系列工作溶液（4.4.2）对应的

保留时间一致，且选择的定性离子的相对丰度比与相当混合标准系列工作溶液（4.4.2）的定性离子的相

对丰度比的最大偏差不超过表3的规定，则可以判定试样中存在对应的组分。

表3定性确证时相对离子丰度比的最大允许偏差

相对离子丰度（%）k＞50%50%≥k＞20%20%≥k＞10%k≤10%

允许的最大偏差（%）±20±25±30±50

定量测定

取混合标准系列工作溶液（4.4.2）按仪器参考条件（6.2）依次测定，以待测组分的系列浓度为横

坐标，待测组分的峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，其线性相关系数应大于0.99。

取试样溶液（6.1）按仪器参考条件（6.2）进行测定，将对应的定量离子对色谱峰面积代入标准曲

线。按“7”项下公式，计算样品中被测组分的含量，平行测定次数不少于两次。

标准物质色谱图参见附录A。

空白溶液的测定

空白溶液（5.1）同试样溶液测定步骤操作。

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7结果的计算

试样中被测组分的含量按式（1）计算：

CV

X=f……………......…….(1)

m1000

式中：

X——试样中被测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

C——从标准曲线得到待测液中目标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

V——试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m——试样质量，单位为克（g）；

1000——单位换算系数；

f——稀释倍数。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

8精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的15%。

9方法检出限和定量限

本方法甲氧苄啶、氧氟沙星、对乙酰氨基酚、氨基比林、非那西丁、氢化可的松、吡罗昔康、甲基

泼尼松龙、地塞米松、舒林酸、美洛昔康、双氯芬酸钠的定量限是0.3μg/L，洛美沙星、诺氟沙星、泼

尼松、醋酸泼尼松、芬布芬的定量限是0.6μg/L，氯霉素、曲安奈德、醋酸地塞米松的定量限是3.0μg/L；

氯唑沙宗定量限是5.0μg/L；酮洛芬的定量限是0.8μg/L。

空白试验应无干扰。

10回收率

当不同添加水平时，22种化学药物凉茶中的添加回收率参见附录B。

6

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A

A

附录A

（资料性）

22种化学药物离子流图

MS色谱图

(x1,000,000)

152.0500>110.2000(+)@5/232.1000>113.0000(+)@6/291.0500>230.1000(+)@1/320.1000>233.1000(+)@4/362.2000>261.1000(+)@3/352.1000>265.1000(+)@2/180.1000>110.1000(+)@7/321.1000>152.0000(-)@20/359.1500>341.1000(+)@8/363.2000>121.2000(+)@9/168.0500>75.8000(-)@21/375.2500>357.3000(+)@11/393.2000>355.3000(+)@12/332.1000>121.1000(+)@10/435.2500>397.2000(+)@13/357.0500>233.2000(+)@14/401.1500>295.0000(+)I@n1t5e/n2s5i5t.y1000>105.1000(+)@16/435.2500>309.2000(+)@18/352.0500>115.1000(+)@17/255.1000>181.1000(+)@19/294.1000>250.1000(-)@22

4,601,8250

2

4.00

2

3.00

6

3

2.001

7

7

2

1

4

1

5

1

15

1

6

1

1.009

2

0

8

92

1

1

12

4

3

1

81

1

0.00

0.02.55.07.510.0

min

图A.122种化学药物的离子流图

1：甲氧苄啶；2：洛美沙星；3：氧氟沙星；4：诺氟沙星；5：对乙酰氨基酚；6：氨基比林；7：非那

西丁；8：氯霉素；9：氯唑沙宗；10：泼尼松；11：氢化可地松；12：吡罗昔康；13：甲基泼尼松

龙；14：地塞米松；15：曲安奈德；16：舒林酸；17：醋酸泼尼松；18：酮洛芬；19：美洛昔康；

20：醋酸地塞米松；21：芬布芬；22：双氯芬酸钠

B

B

7

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附录B

（资料性）

22种化学药物凉茶中的添加回收率

表B.122种化学药物的加标回收率和相对标准偏差（n=6）

加标水平

51020

序号化合物

回收率相对标准偏回收率相对标准偏差回收率相对标准偏差

（%）差RSD(%)（%）RSD(%)（%）RSD(%)

1甲氧苄啶101.022.8102.714.2103.473.4

2洛美沙星101.123.3101.675.994.764.2

3氧氟沙星100.604.595.145.696.793.2

4诺氟沙星92.861.994.754.5100.043.9

5对乙酰氨基酚74.262.078.323.085.422.2

6氨基比林101.443.6104.17