DB21T 3559-2021 软枣猕猴桃品种鉴别技术规程 SSR分子标记法_第1页
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CCSB60DB21TechnicalregulationfortheidentificationofActinidiaarguta辽宁省市场监督管理局发布I 1 1 1 2 2 3 3 3 3 3 4 5 6 7 8归口管理部门通讯地址：辽宁省林业和草原局（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：文件起草单位通讯地址：辽宁省经济林研究所（大连市甘井子区中华西路31号），联系电话：1软枣猕猴桃品种鉴别技术规程SSR分子标记法本文件规定了利用简单重复序列（Simplesequencerepeats，SSR）分子标记法对软枣猕猴桃本文件适用于SSR分子标记技术构建软枣猕猴桃资源DNA指纹图谱过程中DNA分子GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南LY/T2745仁用杏品种鉴定技术规程SSR分指聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR)，是利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进2指纹对比fingerprintcomp将待检样品与对照样品的SSR指纹图谱进行比对，分析待检样品与对照样品的SSR指纹是否具有差4测试准备4.1仪器设备与主要试剂、耗材4.2溶液配制4.3核心引物4.4样品准备依据NY/T2324中样本采集的技术规定进行样本采集，3次以上重复。取无病虫害的健康的芽，做a）将样品倒入研钵中，加入液氮研磨2次，约取0.1mLe）5000r•min-1离心1min后倒3g）用紫外分光光度法测定纯度和浓度，OD260/OD280比值范围在1.7~1.9之间即为-1），9数据记录将待检样品与对照样品的SSR指纹比对结果进行分析，若待检样品与对照样品有等位基因不同的位根据10.1的判定结果，出具鉴别报告书，4A.1仪器设备分光光度计、磁力搅拌器、PCR扩增仪、3730XL测序仪、琼脂粮凝胶电泳仪，A.2主要试剂液氮、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐（Tris-HCl）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）、十六烷基三甲mix、引物、琼脂糖、去离子水、无水乙醇、双A.3主要器材5溶液配制称取46.53gEDTANa2•2H2O于250mL烧杯中，加150mL去离子水充分搅拌溶解，用1mol•L-1NaOH溶液调pH至8.0，定容至250mL，20.454g至250mL烧杯中，分别加1mol•L-1Tris-HCl溶液25mL、60℃水溶解，并用去离子水定容至250mL，混匀。分别量取1mol•L-1Tris-HCl溶液2.5mL、0.5mol•L-1EDTANa2•2H2O溶液0.5mL，用去离子水定容6核心引物FR1111-173275-200365-854100-1675AGGTTGCATATGAGTGGTT135-1926100-1507ACGAGCCCAAAATAGAGTT200-2698119-2109AAGTAAAGCCATTGTCATTG121-192AGAAGATTTC

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