T-GBC 23-2024 六堡茶中粗多糖含量的测定 分光光度法

ICS65.020.01CCSX55GBC广西物品编码与标准化促进会团体标准IT/GBC23—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广西壮族自治区分析测试研究中心提出并宣贯。本文件由广西物品编码与标准化促进会归口。本文件起草单位：广西壮族自治区分析测试研究中心、广西南亚热带农业科学研究所、广西壮族自治区产品质量检验研究院、广西思浦林科技有限公司、广西西大检测有限公司、广西壮族自治区生态环境监测中心、广西壮族自治区标准技术研究院、广西南宁信雄科技服务有限公司。本文件主要起草人：韦英亮、吴玲玲、邓卫利、黄静、黄殿贵、宁盼盼、何善廉、黄超技、刘维明、刘双斌、石梁稳、韦天富、黄宏飞、蒋剑波、刘洋、邓艺萍、潘扬昌、苏紫敏、黄一帆、何禹钦、潘尚丽、班雁华、谢敏蓉、梁鑫佳、班书浩、梁贤智、王明释、张思敏、陈桂鸾、陈德翼、韦猛、林葵、何明远、陆云、黄韵霖、吴琼婧、盘杨桂、韦丽丽、黄文杰、韦怿琳、杨剑、莫淇斐、覃石凤。1T/GBC23—2024六堡茶中粗多糖含量的测定分光光度法本文件规定了六堡茶中粗多糖含量的分光光度法测定方法。本文件适用于六堡茶中粗多糖含量的测定。本文件方法的检出限为0.5mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法DB45/T581六堡茶3术语和定义DB45/T581界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1粗多糖crudepolysaccharide以β-D-葡聚糖或α-D-葡聚糖或其他碳糖为主链的一系列高分子化合物。4方法原理粗多糖在浓硫酸的作用下，水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在485nm处有特征吸收，与标准系列比较定量。5试剂和材料5.1通用要求除非另有说明,本方法所用试剂分析纯以上试剂,水为GB/T6682规定的三级水。5.2试剂5.2.1硫酸（H2SO4ρ=1.84g/mL。5.2.2无水乙醇（C2H5OH）。5.2.3苯酚（C6H6O），重蒸馏。5.3试剂配制5.3.180％乙醇溶液：取80mL乙醇,用水稀释定容至100mL,混匀。5.3.280％苯酚溶液：称取80g苯酚（5.2.3）于100mL烧杯中，加水溶解，转移至100mL棕色容量瓶中并定容，摇匀后，置4℃冰箱中储存备用。5.3.35％苯酚溶液：吸取5mL80％苯酚溶液（5.3.2），溶于75mL水中，混匀，现用现配。5.4标准品D-无水葡萄糖(C6H12O6,CAS号:50-99-7):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品，使用前应于105℃恒温烘干至恒重。2T/GBC23—20245.5标准溶液配置0.1mg/mL标准葡萄糖溶液：取100mgD-无水葡萄糖（5.4），精密称定，置于500mL烧杯中，加水溶解，转移至1000mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀后，置4℃冰箱中储存备用。6仪器和设备6.1紫外可见分光光度计。6.2分析天平，感量为0.1mg。6.3超声波提取器。6.4涡旋混合器。6.5离心机，4000r/min。7样品制备与保存取200g样品，粉碎后过60目筛处理后，混合均匀，常温保存。8测定步骤8.1样品处理称取粉碎后样品约1.0g（准确至0.0001g）。置于100mL具塞锥形瓶中，加入无水乙醇30mL，置超声提取器中提取40min，之后于离心机以4000r/min离心10min，弃去上清液，残渣加50mL水，超声提取3次，每次30min，冷却后用滤纸过滤，合并3次滤液，混匀后移取1mL到25mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得样品测定液。8.2绘制标准曲线移取0.1mg/mL的葡萄糖溶液（5.5）0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL分别置于具塞试管中，各加水补至1.0mL后，分别加入1.0mL5％苯酚溶液（5.3.3）和3.0mL硫酸（5.2.1），振荡混合后，置水浴锅中沸水加热10min，冷却至室温后，用试剂空白作为参比溶液，用紫外可见分光光度计在485nm处测定吸光度。以葡萄糖溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。8.3比色测定精密吸取样品测定液1.0mL于20mL具塞试管中，按步骤8.2操作，测定吸光度，重复3次，取吸光度平均值。8.4空白实验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。9结果计算样品中粗多糖含量以质量分数ω计，单位以克每百克（g/100g）表示，按式（1）计算：式中：ρ——比色测定的吸光值扣除空白试验值后，从标准曲线上查得样品测定液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V1——样品测定液的体积，单位为毫升（mLV2——样品提取液的体积，单位为毫升（mLV3——配置样品测定液所用的样品提取液的体积，