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文档简介

2本标准根据国标委公布的2023年国家标准计划项目，本项目计划编号为力的测定分光光度法》标准项目进行了预研，起草组成员查阅资料，广泛收集32023年推荐性国家标准计划的通知》（生检标[2023]41测定分光光度法》标准项目立项，计划编号：20231639-T素酶活力的测定分光光度法》标准（征求意见稿）及其编制说明，并对全国生结构和起草规则》，并参照了GB/T6379.1-确度与精密度）第1部分总则与定义》、GB/T6肝素酶催化底物肝素或硫酸乙酰肝素裂解会生成4,5不饱和糖醛酸。4,5不饱和糖醛酸在232nm波长下有特征吸收（图1），通过测定232nm下的吸光度的变4由于酶的活性会受到温度、pH以及离子添加剂等多种参数的影响，因此选的最适催化温度为30℃,而肝素酶Ⅲ的活性在20℃-40℃的范围内随温度提高而反应体系pH值对于肝素酶等酶的活性影响很大，pH的改变能影响酶活性中物分子的结合和催化。而当pH过小（过酸）或者过大（过碱）都有可能使蛋白的范围内保持较高的活性，而肝素酶Ⅱ的最适pH为7.0，三种肝素酶在pH为9.0的条件下迅速失活。对于三种肝素酶，选取pH6前期研究表明钙离子是肝素酶活性所必需的辅助因子。CaCl2浓度对三种肝素酶的活性影响如图4所示，其中三种肝素酶在CaCl2浓度为0时的活性分别设为100%。CaCl2的加入使得三种肝素酶的活性均有所提高，在CaCl2浓度为1.2-5.0为肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ活性测定时的CaCl2浓度。NaCl浓度对肝素酶活性的影响如图5所示。其中三种肝素酶在NaCl浓度为07肝素酶活性测定过程中吸光度随时间的变化曲线如图5所示。为保证酶活性收集到自1981年-2024年的4,5不饱和糖醛酸测定的相关文献37篇，对于肝素酶Ⅰ活性的测定，底物溶液含20mmol/L三羟基甲基氨基甲烷（Tris）、1.2mmol/L氯化钙（CaCl2）、200mmol/L氯化钠素钠，pH7.0；对于肝素酶Ⅱ活性的测定，底物溶液含2mmol/LCaCl2、50mmol/L8酶活性的测定步骤为：准确移取1000μLV1——反应底物溶液的体积，单位为微升(μLV2——酶活性测定中加入酶液的体积，单位为微升(μLk——酶活性测定中吸光度曲线斜率，单位为吸光度每分钟（Abs/minX2——肝素酶活性，单位为酶活性单位每克（U/g）9V1——反应底物溶液的体积，单位为微升(μLV2——酶活性测定中加入酶液的体积，单位为微升(μLk——酶活性测定中吸光度曲线斜率，单位为吸光度每分钟（Abs/minV0——溶解酶粉的液体体积，单位为毫升（mL酶法进行了实验室间验证。选用肝素酶Ⅰ为验证样品，验证设置了3个浓度，分别

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