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文档简介

2本标准根据国标委公布的2023年国家标准计划项目，本项目计划编号为硫酸软骨素酶可以通过β-消除的方式将硫酸软骨素和硫酸皮肤素类多糖裂2023年推荐性国家标准计划的通知》（生检标[2023]41活性的测定》标准项目立项，计划编号：20231640-T3结构和起草规则》，并参照GB/T6379.1-20硫酸软骨素钠与硫酸皮肤素分别为硫酸软骨素酶AC与硫酸软骨素裂解酶B的特异性底物。硫酸软骨素裂解酶能催化底物裂解，生成4,5不饱和糖醛酸。4,5不饱和糖醛酸在232nm波长下有特征吸收（图1）。通过测定232nm下的吸光度4由于酶的活性会受到温度、pH以及离子添加剂等多种参数的影响，因此选度的确立还需综合考虑硫酸软骨素酶AC和B的热稳定性，硫酸软骨素酶AC在反应体系pH值对于硫酸软骨素酶等酶的活性影响很大，pH的改变能影响酶子对底物分子的结合和催化。而当pH过小（过酸）或者过大（过碱）都有可能不同pH对硫酸软骨素酶AC、B的活性的影响如图3所示。硫酸软骨素酶AC和B的最适pH均为7.5，因此选取pH76为0-15mM的范围内，其活性随钙离子的浓度增加而缓慢提高，在CaCl2浓度为mM的范围内，其活性随着钙离子浓度的增加而显著提高，在CaCl2浓度为15-30mM的范围内，其活性随着钙离子浓度的增加而缓慢提高。因此选取20mM为硫NaCl浓度对硫酸软骨素酶活性的影响如图5所示。其中两种硫酸软骨素酶在NaCl浓度为0时的活性分别设为100%。当NaCl的浓度低于100mM时，NaCl的加入使得硫酸软骨素酶AC、B的活性均较未加入NaCl时有所提高，而当NaCl的浓度达到200mM后,NaCl对硫酸软骨素酶AC、B的活性显7硫酸软骨素酶活性测定过程中吸光度随时间的变化曲线如图6所示。为保证的趋势。应选取曲线平滑且线性的60s区段，通过线性回归方程计收集到自1981-2024年4,5不饱和糖醛酸测定的相关文献37篇，其数均设置为3.8mM-1cm-1，已成为行业内认可的标准8烷（Tris）、20mmol/L氯化钙（CaCl220mmol/LCaCl2、50mmol/LNaCl及1g/L硫酸皮肤素，pH7.5。描述了主要特性。仪器设备包括分析天平、pH计、紫外-可见分光光度计、磁力酶活性的测定步骤为：准确移取1000μLV1——反应底物溶液的体积，单位为微升(μLV2——酶活性测定中加入酶液的体积，单位为微升(μLk——酶活性测定中吸光度曲线斜率，单位为吸光度每分钟（Abs/min9V1——反应底物溶液的体积，单位为微升(μLV2——酶活性测定中加入酶液的体积，单位为微升(μLk——酶活性测定中吸光度曲线斜率，单位为吸光度每分钟（Abs/minV0——溶解酶粉的液体体积，单位为毫升（mL

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