DB11-T 1431-2017 桃树根癌病综合防治技术规程

ICS65.020

B16

备案号：56065-2017DB11

北京市地方标准

DB11/T1431—2017

桃树根癌病综合防治技术规程

Technicalregulationsforcontrolofpeachcrowngall(Agrobacterium

tumefaciens)

2017-06-29发布2017-10-01实施

北京市质量技术监督局发布

DB11/T1431—2017

桃树根癌病综合防治技术规程

1范围

本标准规定了桃树根癌病病情分级、防治措施和育苗期防治效果调查。

本标准适用于北京地区桃树根癌病的防治，樱桃、樱花等植物根癌病的防治可参照执行。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T8321.9农药合理使用准则（九）

NY/T2725氯化苦土壤消毒技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

桃树根癌病peachcrowngall

又称桃树冠瘿病、桃树根瘤病，是一种细菌性病害，在根颈和根部产生肿瘤，导致树势衰弱，甚至

死亡。

3.2

桃树根癌病病原菌pathogenicbacteriumofpeachcrowngall

引起桃树根癌病的病原菌，为根癌土壤杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）。

3.3

抗根癌菌剂rootcarcinomabacteriaresistanceagent

对根癌病菌具有良好拮抗作用的微生物制剂。

4病情分级

按肿瘤发生部位将病情分为5级，分级标准如下：

0级：植株无肿瘤；

1级：肿瘤发生在须根上；

2级：肿瘤发生在侧根上；

3级：肿瘤发生在侧根与主根的连接处；

4级：肿瘤发生在主根、根颈或枝干上。

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桃树根癌病症状特征参见附录A，发病规律参见附录B，检测方法参见附录C。

5防治措施

5.1育苗期预防措施

5.1.1苗圃地选择

选择非发病地块作为育苗地，避免在前茬为豆类、蔬菜以及林地、林业苗圃等地块育苗；必要时可

对育苗地进行土壤熏蒸处理,按GB/T8321.9和NY/T2725相关规定执行。

5.1.2砧木种子处理

选择抗病的适宜砧木种子，播种前，用抗根癌菌剂拌种处理。

5.1.3苗木嫁接

采用高位芽接法嫁接，避免接口与土壤接触；嫁接前，使用75%酒精对嫁接工具进行消毒处理。

5.1.4苗木出圃

对病情为1级、2级的苗木剪除肿瘤，剪除的肿瘤及时销毁；对病情为3级、4级的苗木及时销毁。

5.2苗木选择与定植

5.2.1对无症状苗木及剪除肿瘤的1级、2级苗木进行蘸根处理并及时定植。

5.2.2定植前，将抗根癌菌剂放入陶瓷、塑料等非金属容器中，加水，按1:1调匀成糊状，将剪根后的

桃苗浸入菌液中，浸入深度超过根颈上部5cm，即可拿出栽植，随浸随栽。

5.3田间管理

5.3.1对于碱性土壤的果园，适当增施酸性肥料、有机肥和果树专用肥料。

5.3.2减少果园土壤清耕等栽培管理措施以及蛴螬、蝼蛄等地下害虫对根系的伤害。

5.3.3将大水漫灌、串灌改为一树一畦的单株灌溉或滴灌。

5.4药剂防治

对已发病株及时切下肿瘤，用抗根癌菌剂等药剂涂抹伤口，切下的病瘤随即销毁。

6育苗期预防效果调查

苗木出圃时，调查使用抗根癌菌剂和其它处理的苗木发病等级，计算防治效果。病情指数与防治效

果分别按式（1）、（2）计算：

[各级病株数×相对级数值]

病情指数=å×100……(1)

调查总株数×4

对照的病情指数－处理的病情指数

防治效果=×100%……(2)

对照的病情指数

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附录A

（资料性附录）

症状特征

A.1地下部分症状

桃树根癌病主要发生在根颈部和根部，包括侧根和须根，树干上偶见。根部被害后通常形成球形、

扁球形或不规则的肿瘤。初生瘤乳白色或略带红色，光滑，柔软，后逐渐变褐色乃至深褐色，木质化而

坚硬，表面粗糙或凹凸不平，龟裂，表面细胞枯死，内部木质化，并在瘤的周围或表面产生一些细根。

最后外皮脱落，露出许多突起状小木瘤，瘤的内部组织紊乱并混有薄壁组织及维管束，在较大的根瘤上

还会出现许多小瘤。肿瘤的数目少的1～2个，多的达10余个，直径差异很大，小如豆粒，大如胡桃和

拳头，甚至直径达数十厘米。

A.2地上部分症状

苗木和新植幼龄桃树受害后，发育受阻，生长缓慢，植株矮小，严重时叶片黄化，早衰。成年果树

受害后，生长不良，果实小，甚至全株死亡。

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AA

附录B

（资料性附录）

发病规律

B.1病原菌的越冬

病原菌在癌瘤组织的皮层内或在癌瘤破裂脱皮时进入土壤中越冬，细菌在土壤中能存活多年。

B.2病原菌的侵入途径

病菌通过嫁接、昆虫或人为因素造成的伤口侵入植株。

B.3病原菌的传播

雨水和灌溉水是自然传播的主要方式，苗木带菌是远距离传播的重要途径。

B.4发病条件

B.4.1温度湿度

病菌侵染与发病需要一定的湿度和温度，太低太高均不利于病害发生。当旬气温达到20℃～23.5℃，

地温18℃～20℃以及土壤和水质偏碱时，均有利于该病菌的侵染为害。

B.4.2土壤理化性质

碱性土壤有利于发病,土壤pH值在6.2～8时均能保持病菌的致病力。偏碱性的土壤和湿度大的沙壤

土内发生重，酸性和粘重的土壤中很少发病。

B.4.3嫁接方式

嫁接口的部位、接口大小及愈合的快慢均能影响发病程度。在苗圃中，嫁接口与土壤接触时间长，

染病机会多，发病率高。

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附录C

（资料性附录）

检测方法

C.1致病性检测

C.1.1致病菌分离

取新鲜的冠瘿瘤，用2%的次氯酸钠表面消毒2min，再用70%乙醇表面消毒90s，无菌生理盐水清洗3～

5遍，用无菌剪刀将冠瘿瘤剪切成0.5cm的小块，加入2～5倍体积的无菌生理盐水，匀浆后，取上清，涂

板到土壤杆菌选择性培养基MW培养基上，28℃下培养48h～72h。

MW培养基：每升培养基中含有甘露醇，10.0g；K2HPO4，0.3g；生物素，100μg；NaNO3，5.0g；

NaCl，0.2g；MgSO4﹒7H2O，0.1g；0.1%结晶紫，2.0ml；0.1%Fe-EDTA，2.0ml；琼脂，15g～20g。

pH，7.0～7.2；121℃高压灭菌30min。

C.1.2致病性检测

取分离的单菌落，接种到LB培养基上培养48h。将待测菌液配制成浓度为108CFU/ml的菌悬液(OD600

为0.6)。用灭菌接种针在生长7d～10d的向日葵茎段上刺数下造成伤口，吸取5µl～10µl待测菌液滴到

无菌棉球上后放置于伤口上，以封口膜包裹伤口，温室内培养15d后观察结瘤情况，形成肿瘤的为发病。

C.2冠瘿碱的检测方法

C.2.1检测用试剂

电泳检测缓冲液：按照甲酸:乙酸:水为5:15:80的比例配比。

荧光染液：为菲醌-乙醇溶液，由0.02%菲醌-无水乙醇和10%氢氧化钠/60%乙醇溶液按照1：1混合。

检测用标准样品：胭脂碱、章鱼碱标准样品，精氨酸标准样品。

C.2.2检测方法

取植物肿瘤组织1g～2g放入离心管，用解剖针挤压出汁液，离心，用毛细管取上清，点到滤纸上，

同时点胭脂碱、章鱼碱和精氨酸标准样品。在甲酸:乙酸:水=5:15:80溶液中电泳1.5h，电泳电压为400V，

烘干滤纸，用菲醌-乙醇染液染色，在紫外灯下观测荧光斑点，与标准样品比较，含有胭脂碱或者章鱼

碱的为发病。

C.3核酸检测

C.3.1选取待检测的病菌

采用根癌土壤杆菌选择性培养基分离土壤细菌，选取单菌落利用PCR的方法快速检测致病性根癌土

壤杆菌。

C.3.2聚合酶链式反应（PCR）检测致病性特异性引物

PCR的引物为iaaHF2（5’ACATGCATGAGTTATCGTTTGGAAT3’）/iaaHR1

（5’GCATCAAGGTCATCGTAAAAGTAGGT3’）；iaaH-F10（5’GGAAACATGCATGAGTTATCGTT3’）/iaaH-R10（5’

CCACATCAGCATCAAGGTCATC3’）。

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C.3.3聚合酶链式反应（PCR）检测致病性反应体系

PCR的反应体系为:

10×Buffer2.5µl

dNTP(10mM)1.0µl

菌液(10ng/ml)1.0µl

iaaHF2(10mM)或iaaH-F100.25µl

iaaHR1(10mM)或iaaH-R100.25µl

TaqDNA酶(5U/ml)0.2µl

ddH2O19.8µl

total25.0µl

C.3.4聚合酶链式反应（PCR）检测致病性反应程序

PCR反应程序如下：

94℃5min

94℃40s

54℃40s35cycles

72℃90s

72℃10min

4℃保存

C.3.5核酸检测的结果

配制1%浓度的琼脂糖凝胶，凝胶电泳检测，iaaHF2/iaaHR1引物能够扩增，电泳检测为420bp的

DNA条带为致病性阳性；iaaH-F10/iaaH-R10引物能够扩增，电泳检测为424bp的DNA条带可以进一步确

定致病性为阳性；两条特异性引物菌无法扩增出条带的为致病性阴性。

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参考文献

[1]GB8370—1987苹果苗木产地检疫规程.

[2]NY/T5114—2002无公害食品桃生产技术规程.

[3]马德钦，王慧敏.果树根癌病及其生物防治[J].中国果树,1995,(2):42-44.

[4]李健强，王慧敏，张桂火等.一些杀菌剂和抗菌素对根癌菌和根癌抑制菌的作用[J].中国农业

大学学报,1996,(3):74-78.

[5]王慧敏.植物根癌病的发生特点与防治对策[J].世