KTB9050-CN-丙二醛（MDA）含量检测试剂盒（荧光法）

丙二醛（MDA）含量检测试剂盒（荧光法）原理丙二醛（Malondialdehyde，MDA）是脂质过氧化物分解后形成的一种化合物，用于检测脂质氧化水平，该指标在氧化应激、铁死亡等领域的研究中被广泛使用。CheKine™Pro丙二醛（MDA）含量检测试剂盒（荧光法）可检测动植物组织，细胞、血清（浆）等生物样本。在该试剂盒中，MDA在酸性和高温环境下，可与硫代巴比妥酸（Thiobarbituricacid，TBA）缩合，生成TBA复合体，通过测定其荧光强度来检测样本中的MDA。包装清单试剂盒组分规格储存条件48T96TExtractionBufferⅠ60mL120mL4℃ExtractionBufferII24mL48mL4℃ReagentⅠ300μL600μL4℃，避光保存ReagentII52mL104mL4℃ReagentIII36mL72mL4℃，避光保存ReagentIVPowder×1vialPowder×1vial4℃，避光保存ReagentV20mL40mL4℃Standard(4.05mmol/mL)400μL400μL4℃，避光保存注意：正式检测前，建议选择2-3个预期差异较大的样本进行预实验。自备耗材·荧光酶标仪(激发波长520nm，发射波长550nm)·96孔全黑板、可调节式移液枪及枪头、1.5mL离心管·恒温箱、制冰机、低温离心机·去离子水·匀浆器或研钵（如果是组织样本）试剂准备ExtractionBufferⅠ：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。ExtractionBufferII：即用型；4℃保存。ReagentI：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。ReagentII：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。ReagentIII：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。WorkingReagentIV：临用前配制，将ReagentII全部转移至ReagentIV中，充分溶解。用不完的试剂-20℃避光分装保存6个月，避免反复冻融。ReagentV：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。WorkingReagentⅠ：每孔准备600µL工作液，现配现用。按照ReagentIII：WorkingReagentIV=200μL：400μL的比例，混合均匀。WorkingReagentII：每孔准备600µL工作液，现配现用。按照ReagentIII：ReagentV=200μL：400μL的比例，混合均匀。Standard(4.05mmol/mL)：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。注意：ReagentI、ReagentIII、ReagentIV和Standard有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。标准品制备：100nmol/mLStandard：20µL4.05mmol/mLStandard用61µL去离子水稀释得1mmol/mLStandard；10µL1mmol/mLStandard用990µL去离子水稀释得10µmol/mLStandard；10µL10µmol/mLStandard用990µL去离子水稀释得100nmol/mLStandard；使用100nmol/mLStandard，按照下表所示，进一步稀释成标准品：序号100nmol/mLStandard体积（μL）去离子水体积（μL）浓度（nmol/mL）Std.11099010Std.289928Std.369946Std.449964Std.529982Std.619991Std.70.5999.50.5Blank01,0000注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在4h之内使用。样本制备注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4h内完成样品解冻。组织：称取约0.1g样本，加入1mLExtractionBufferⅠ，用匀浆器或研钵冰浴匀浆，10,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。细胞：收集500万细胞到离心管内，用冷PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入0.4mLExtractionBufferII，混匀后放置在冰上裂解5min，每2min混匀一次，直接置于冰上待测。血清（浆）等液体样本：直接检测。注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。实验步骤荧光酶标仪预热30min以上，调节激发波长到520nm，发射波长到550nm。操作表（下述操作在1.5mL离心管中操作）：试剂空白管（μL）标准管（μL）测定管（μL）对照管（μL）样本00200200Standard020000去离子水200000ReagentI2222WorkingReagentⅠ6006006000WorkingReagentII000600混匀后，95℃水浴反应50min，取出后流水冷却，10,000g离心10min，取200μL上清至96孔全黑板，记录各孔的荧光值RFU，荧光激发波长520nm，荧光发射波长550nm，空白孔记为RFU空白，标准孔记为RFU标准，测定孔记为RFU测定，对照孔记为RFU对照。计算ΔRFU测定=RFU测定-RFU对照，ΔRFU标准=RFU标准-RFU空白。注意：空白管和标准管只需做1-2次。如果样本不存在溶血、脂血现象，则对照管可以不测，用空白管来代替对照管。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本稀释成不同浓度做预实验，根据预实验的结果，结合本试剂盒的线性范围：0.04-10μM，选择合适的稀释倍数对样本进行检测。结果计算注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。标准曲线的绘制以标准溶液浓度为x轴，ΔRFU标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔRFU测定带入方程得到x(nmol/mL)。MDA含量的计算：按样本蛋白浓度计算MDA(nmol/mgprot)=x÷Cpr按样本鲜重计算：MDA(nmol/g鲜重)=x÷(W÷V1)=x÷W按照细胞数量计算MDA(nmol/104cell)=x÷(n÷V2)=0.4x÷n按样本体积计算：MDA(nmol/mL)=xV1：加入ExtractionBufferⅠ体积，1mL；V2：加入ExtractionBufferII体积，0.4mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；n：细胞数量，以万计。注意事项如果待测组织样本匀浆中存在絮状物，可多次离心取上清，避免测值不稳定，复孔差异大。每次检测都需要建立新的标准曲线。如果RFU测定较低或ΔRFU测定为负值，可适当增加样本量或延长反应时间，但不得超过100min。如果样本测不出值，建议取新鲜样本，重新检测。结果展示以下数据仅供参考，实验者需根据自己的实验对样品进行检测。Figure1.(a)MDA标准曲线。(b)本试剂盒测定兔肾脏和玉米叶中MDA的含量。相关产品CatalogNo.ProductNameKTB9300