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文档简介

中国兽医协会发布I1猫免疫缺陷病毒核酸检测方法NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范4缩略语FIV：猫免疫缺陷病毒（Felineimmunodeficiencyvirus）RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（ReversetranscriptionpolymeraseTBE缓冲液：三羟甲基氨基甲烷_硼酸_Taq酶：耐热DNA聚合酶（ThermusAquaticusPolyme5.4生物安全柜。25.5微波炉。5.11凝胶成像仪。脉采集200~300μL血液。样品编号并填写相应检测的样本置于-70℃或以下保存，如无-70取7.1.1采集的含EDTA的抗凝血2003取7.4.1步骤反转录的cDNA，进行PCR扩增检测，PCR反应体系及参数见附均匀，加入核酸凝胶样品孔，核酸凝胶配置电泳：5V/cm恒压下电泳30min，将凝胶置于凝胶阴性对照：PCR产物无和在实验有效的前提下，被检样品的PCR产物电泳后在32），4到20μL，同时设立阴阳性对照孔，记录反应管对应的样品编合的检测通道读取荧光信号值，淬灭基团选择none。推荐的荧5试剂配方称量Tris24.2g，Na2EDTA·2H2O3.72g于1L烧杯中。向烧杯中加入约600mL无菌蒸馏水，充分搅称量Tris54.0g，EDTA2.9mg于1L烧杯中。向烧杯加入硼酸27.5g，充分搅拌；加无菌蒸馏水定容至1L后，室温保存。使用时稀释5倍即1×TBE。A.3核酸凝胶制备6引物序列5’-3’体积(µL）\\2\7\117FAM-CATGGCCACATTAATAATGGCCGCA-T工作液终浓度(μmol/L）加样体积(µL）\酶\\2\\118D.1FIVPCR阳性对照质粒参考序列（GenBankAccessionNo.NC_5’-CTACTGCTGCTGCAGCTGAAAATATGTATTCTCAAATGGGATTAGACAGAAAGAAGCAGGTGGAAAAGAGGAAGGCCCTCCACAGGCATATCCTATTCAAACAGTAAAGTACCACAATATGTAGCACTTGACCCAAAAATGGTGTCCATTTTTATGGAAAAGGCAAGAGGACTAGGAGGTGAGGAAGTTCAACTATGGTTTACTGCCTTCTCTGCAAATTTAACACCTACATGGCCACATTAATAATGGCCGCACCAGGGTGCGCTGCAGATAAAGAAATATTGGATGAAAGCTTAAAGCAAC-3'D.2FIV荧光PCR阳性对照质粒参考序列（GenBankAccessionNo.MK558085’-GCCTTCTCTGCAAATTTAACACCTACTGACATGGCCACATTAATAATGGCCGCCGCTGCAGACAAAGAAATATTAGATGAAAGCTTAAAGCAATTGACAGCAGAATATGATC浓度（ng/µL）×10-9]/（DNA碱基数×660）），即为FIVPCR和荧光

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