DB1302T 471-2017 柑橘类水果中橘红2号的测定 液相色谱串联质谱法

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DB1302唐 山 市 地 方 标 准DB1302/T471—201722017-12-20发布 2018-01-01实施唐山市质量技术监督局发布DB1302/T471—2017DB1302/T471—2017前 言GB/T1.1-2009本标准由唐山市农牧局归口。本标准起草单位：唐山市畜牧水产品质量监测中心。本标准起草人：周鑫、张立田、段晓然、项爱丽、汤思凝、蒙君丽、张建雄、阴明杰、庞学良。柑橘类水果中橘红2号的测定 液相色谱串联质谱法范围本标准规定了液相色谱串联质谱法测定鲜柑橘类水果中橘红2号。本标准适用于鲜柑橘类水果中橘红2号残留量的测定。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单或修订版）适用于本文件。GB/T6682 分析实验室用水规则和试验方法原理试样经乙腈提取，NH2固相萃取柱净化，浓缩定容后经液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。试剂甲醇：色谱纯。乙腈：色谱纯。甲酸：色谱纯。乙酸乙酯：色谱纯。氯化钠。试剂配制乙酸乙酯甲醇溶液：（乙酸乙酯:甲醇=9:1，V:V）4.2.270%乙腈溶液：（乙腈:水=7:3，V:V）标准品橘红2号标准品（CitrusRed2，CAS：6358-53-8），纯度≥99%。标准溶液配制橘红22号标准品约100.0110mL℃保存。橘红2号标准中间液：用甲醇稀释橘红2号标准储备液至10μg/mL。橘红2号标准工作液：用甲醇稀释橘红2号标准中间液至100ng/mL。材料NH2固相萃取柱（500mg，6mL）或相当者。滤膜：0.22μm。仪器和设备液相色谱-质谱/质谱仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源(ESI)。5.2分析天平：感量为0.00001g和0.01g。离心机：转速不低于6000r/min。固相萃取装置。旋转蒸发仪。涡旋混合器。组织捣碎机。具塞塑料离心管：50mL。试样制备取适量新鲜的样品，去叶、梗后均质处理，-18℃冷冻保存，备用。分析步骤准确称取4g（精确至0.01g）试样，置于50mL聚丙烯具塞离心管中，加入20mL乙腈，涡旋振荡1min，加入4g306000r/min离心10min10.00mL℃旋转蒸发至近干，加入乙酸乙酯甲醇溶液(4.2.1)5mL，充分混合溶解。净化用5mL甲醇活化NH2固相萃取柱，将提取液(7.1)过柱，用乙酸乙酯甲醇溶液(4.2.1)淋洗固相萃取柱两次，每次540mL70%0.22μm滤膜，待上机。基质标准溶液的制备取阴性柑橘样品按照7.1、7.2的操作步骤进行，用最终所得的定容液配制基质标准溶液。测定条件液相色谱参考条件a)色谱柱：ShimadzuODS-C18，100mm×2.1mm，1.6μm，或者相当；b)柱温：40℃；进样量：5μL；流动相：A，0.1%甲酸水溶液；B，乙腈；流动相条件：流速0.3mL/min，洗脱程序见表1。表1液相色谱梯度洗脱条件时间(min)0.00.82.02.52.62.80.1%甲酸水溶液（%）3030003030乙腈（%）70701001007070质谱参考条件离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；电喷雾电压（IS）：5000v；气帘气：20psi；雾化气：40psi；辅助气：40psi；雾化温度：500℃；橘红2号的质谱参数见表2。表2橘红2号质谱参数化合物名称母离子（m/z）子离子（m/z）去簇电压（DP）/V碰撞能量（CE）/V（EP）/V出口电位（CXP）/V橘红2号309.3153.3*277.9969623171010812“*”表示定量子离子液相色谱—串联质谱测定定性确证被测化合物选择1个母离子，2个子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与混合基质标准校准溶液中对应组分的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品谱图中组分的相对离子丰度与浓度接近的基质3表3定性确证——相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度KK>5020<K<5010<K<20K<10允许最大偏差±20±25±30±50定量测定2平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。空白试验不称取样品，其余均按照试样步骤进行。回收率试验阴性样品中添加标准溶液，按照7.1和7.2操作，测定后计算样品添加的回收率。结果计算橘红2号的测定结果按式（1）计算：XcVf

……………（1）m 式中：X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；c——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V——样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；f——稀释因子；m——称样量，单位为克（g）；1000——单位转换。计算结果应扣除空白值，保留3位有效数字。灵敏度、准确度和精密度灵敏度橘红2号在鲜柑橘类水果中的检出限为0.5μg/kg。回收率和精密度见表4。

表4橘红2号在鲜柑橘类水果中的平均回收率和精密度（n=6）化合物名称添加浓度/（μg/kg）回收率/%精密度/%187.55.99橘红2号CitrusRed21091.13.022090.14.9