公共卫生突发事-件样品采集与处理课件

公共卫生突发事件样品

采集与处理

公共卫生突发事-件样品采集与处理传染病的分类甲类传染病是指：鼠疫、霍乱。乙类传染病是指：病毒性肝炎、细菌性和阿米巴性痢疾、伤寒和副伤寒、艾滋病、淋病、梅毒、脊髓灰质炎、麻疹、百日咳、白喉、流行性脑脊髓膜炎、猩红热、流行性出血热、狂犬病、钩端螺旋体病、布鲁氏菌病、炭疽、流行性和地方性斑疹伤寒、流行性乙型脑炎、黑热病、疟疾、登革热。丙类传染病是指：肺结核、血吸虫病、丝虫病、包虫病、麻风病、流行性感冒、流行性腮腺炎、风疹、新生儿破伤风、急性出血性结膜炎、除霍乱、痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻病。

公共卫生突发事-件样品采集与处理一、鼠疫取材（一）疑似病人的取材疑似鼠疫病人应在服用抗茵药物前，依其症状和体征，按以下规定部位采取检材。各型疑似鼠疫患者，除采取相应部位材料外，均应采取静脉血3~5mL，供栓菌和血清学诊断用。1、疑似腺鼠疫病人取材选取肿大之淋巴结，用碘酒、酒精局部消毒，以左手姆指、食指固定，用灭菌注射器（12~16号针头）刺入淋巴结，抽取组织液适量，保存于灭菌试管内或直接接种于血琼脂平板。淋巴结肿大不明显者，可先向淋巴结注射0.3~0.5mL灭菌生理盐水，稍停后再行抽取。感染后期可在肿大的淋巴结周围穿刺抽取组织液。公共卫生突发事-件样品采集与处理2、疑似肺鼠疫病人取材令病人对血琼脂平板咳嗽，或将带血痰液标本收集于灭菌平皿或广口瓶内备检。用灭菌棉拭子涂擦咽部分泌物，将拭子保存于灭菌试管或灭菌生理盐水管内备检。

3、疑似败血型鼠疫应采取静脉血液1mL以上。4、疑似眼鼠疫应用棉拭子或无菌毛细吸管，采取眼的分泌物。5、疑似肠鼠疫应取病人粪便备检。6、疑似皮肤型鼠疫取材水泡、脓泡期，可将脓泡表面用酒精消毒，以灭菌注射器由泡的侧面刺入泡内，抽取内容物备检。溃疡、结痂期以灭菌镊子持灭菌棉球涂擦溃汤面和痂皮下的创面，将棉球保存于灭菌试管或灭菌盐水内备检。公共卫生突发事-件样品采集与处理7、疑似脑膜炎型鼠疫的病人用腰椎穿刺法抽取脑脊液备检。8、疑似鼠疫尸体的取材

首例疑似鼠疫尸体应作解剖取材。取材前应作好解剖器材、场所选择和尸体处理的准备。以无菌手续采取肝、脾、肺、心血及有可疑病理改变的淋巴结等，分别置于灭菌平皿或试管内保存。尸体有腐败迹象时，必须取长骨材料。如不能解剖，可行局部取材，用腰椎穿刺器按淋巴结、心、肝、脾及肺的顺序穿刺采取组织，分别保存于灭菌试管内，尸体腐败时可穿刺取骨髓。

公共卫生突发事-件样品采集与处理凡所取材料均应保存于灭菌器皿内；组织块可保存于灭菌生理盐水中，或用5~10mLBroke氏液保存；亦可应用CaryBleir培养基保存运送材料。容器用石蜡密封。1、检材应包装严密，保存场所适宜，保存温度不高于4℃2、准确详细填写送检单。3、指派二名人员（其中一名专业人员），乘快速交通工具送检材。直接送达负责该地区检验工作的专业实验室。4、接交材料时首先检查包装，绝对不能有破损、污染，如有破损应立即消毒并报告有关单位处理。材料接交按清单点清种类、数量，并准确记录签字。公共卫生突发事-件样品采集与处理应在调查范围内选择有代表性地段捕获所需动物并同时在全范围内收集自毙动物送检。

取材方法：将获得的全部应检动物分类编号登记，单只装入小布袋内，活动物处死后，拣净体外寄生虫，进行动物分类鉴定，然后按下述方法剖检。

自毙、染病萎糜动物：按常规方法解剖后，分别观察腺、肝、脾、肺、心等有无病变，并取相应材料作细菌学检查，使用的器械每用一次，必须进行检查。

腐败动物：多采取骨髓和脑组织作检查。（二）动物材料的采集公共卫生突发事-件样品采集与处理昆虫材料包括：蚤类、蜱类、螨类、虱子等，以蚤类为重点。蚤的采集：

动物体蚤的采集：收集的体蚤及其他昆虫，拣入装有0.5×10-5龙胆紫、2%盐水的小瓶内，注明寄主、采集地点、采集日期。洞道蚤的采集：用顶端固定白色法兰绒或毛巾的探蚤棒收集，巢穴蚤的采集：主要靠挖掘穴内的窝巢及表层泥土而获得。必须一巢装一袋，然后放入大白搪瓷盆内检蚤，收集的蚤分装并登记。地面游离蚤的采集：常用粘蚤纸收集，将粘蚤纸按要求放在房屋地面的一定位置，昏置晨查，搜集蚤纸上的蚤类，分装并登记。将以上收集的蚤类进行分类鉴定并进行细菌学检验。昆虫材料的采集公共卫生突发事-件样品采集与处理（三）鼠疫细菌检验基本要求与处理鼠疫细菌检验必须在专用实验室内进行。检验人员必须事前熟悉实验室管理制度，自身防护制度，技术操作规程等。凡进入毒菌室操作，必须两人以上同时工作。及时准确做好检验的各项实验记录。公共卫生突发事-件样品采集与处理动物接种病人、尸体材料，特别是腐败材料必须在进行细菌培养的同时接种小白鼠（18~20g）或豚鼠（250~300g）脏器块，置于消毒乳钵内，用灭菌剪刀剪碎并研成匀浆，加入适量生理盐水，制成悬液备用。新鲜材料可用腹腔或皮下接种，豚鼠接种0.5~1.0mL，小白鼠接种0.2~0.4Ml。腐败材料可采用经皮接种，剃去动物腹毛，并造成轻微划痕，将材料以棉拭子涂布于剃毛之皮肤上并擦之，涂擦时应以平皿盖掩盖，以防材料四溅。接种实验动物后，做好标记，放入饲养笼内，挂牌记载编号、接种日期、途径等。每日饲养1~2次，直到动物死亡或经7d后杀死剖检。如7d动物没有死亡，应处死动物，取动物的脾脏及有可疑病变组织制成匀浆，接种第2组动物，动物死亡或观察7d后处死，同时采集血清，做被动血凝试验。无阳性发现方可做出阴性报告。公共卫生突发事-件样品采集与处理二、猩红热是由A组链球菌引起的急性呼吸道传染病，常侵犯5~15岁儿童，是儿童常见传染病之一，少数病人在病后可出现变态反应性心、肾并发症，在一定程度上，影响儿童的身体健康。是我国乙类的法定传染病之一。

A组链球菌的分离标本采集：采取咽拭子、伤口炎性分泌物等标本分离培养：可直接草线接种血琼脂平板进行分离培养。观察菌落形态及溶血现象，形成灰白色、透明或不透明、表现光滑、有乳光、直接0.5~0.75mm，圆形突起的小菌落，菌落周围形成2~4mm宽、界限分明、完全透明的溶血环。进一步涂片行革兰染色，证实为呈链状排列的革兰阳性球菌，菌呈圆形或卵圆形，直接0.5~1.0μm，链状排列，长短不一。分纯后进一步鉴定。

公共卫生突发事-件样品采集与处理三、钩端螺旋体病钩端螺旋体病是由钩端螺旋体属的不同血清型致病性钩端螺旋体（Leptospirainterrogans）引起的一种人兽共患病。它广泛分布于全世界，我国本病危害严重。由于钩端螺旋体侵犯人的多种脏器，所以临床表现复杂。全年均有病人发生，但常在夏秋季、稻田收割季节和洪涝害引起发病和流行。人普通对本病易感。以青壮年发病较多。

公共卫生突发事-件样品采集与处理1、钩端螺旋体直接镜检和分离病人血液的直接镜检取早期病人血一滴，加蒸馏水一滴，使血细胞溶解，在暗视野显微镜下检查有否活动的钩端螺旋体。取早期病人静脉血1~2mL于无菌试管中待凝固。离心沉淀，吸取血清与血细胞交界处略显白色的悬液。涂片后暗视野显微镜检查有否活动的钩端螺旋体。差速离心暗视野检查法：采集早期病人静脉血1mL，加于含2mL枸橼酸钠盐水管中，1000r/min离心10min，吸上层血浆置另一清洁管中，3000~3500r/min离心30~60min。弃上清，取沉淀物一滴于玻片上，暗视野显微镜检查有否活动的钩端螺旋体

公共卫生突发事-件样品采集与处理2、培养分离病原体病人血液、尿液培养：采集早期病人血液，无菌操作接种于2~3管Korthof培养基中，每管接种1~3滴。血培养管置28℃培养。每隔5~7d取培养物暗视野显微镜下观察有无钩端螺旋体生长，若有生长，即为分离阳性。若未见生长，需继续培养60d，仍不见钩端螺旋体方作阴性处理。接取病后两周以上的病人中段尿30~50mL于无菌离心管中3500~4000r/min离心1h。取沉渣染，可在采集尿标本的前一天晚上给病人服碳酸氢钠（NaHCO3）2~4g，同时，在培养基中加入100~400μg/mL5-氟脲嘧啶或1/2000的磺胺嘧啶。病人血液、尿液接种金黄地鼠或幼龄豚鼠（体重120~140g之间）。菌株分群，分型鉴定：应用分群血清与新分离的钩端螺旋体作凝集试验，确定菌群。应用交叉凝集素吸收试验或分型因子血清来确定菌型。

公共卫生突发事-件样品采集与处理四、白喉白喉是由白喉杆菌引起的急性呼吸道传染病。其感染特征为咽、喉、鼻部等处粘膜充血，肿胀并有灰白色假膜形成，以及细菌外毒素引起的全身中毒症状，严重者常合并心肌炎和末梢神经麻痹。由于白喉菌苗（百白破三联制剂）的广泛应用，典型白喉逐渐减少，不典型白喉或轻型白喉日渐增多，尤其成人白喉的发病应引起关注。

公共卫生突发事-件样品采集与处理实验室诊断白喉棒状杆菌分离培养阳性并证明能产生外毒素，咽拭子直接涂片镜栓可见革兰氏阳性棒状杆菌，并有异染颗粒。病人双份血清特异性抗体四倍以上增长。以无菌棉拭子或无菌拭子吸附新鲜配制的亚碲酸钾、甘油盐水保存液从疑似患者咽喉假膜边缘蘸取标本或同时采取鼻咽拭子，放入灭菌试管内同时送检。带菌者或疑似病人由于未见到明显的假膜，故应采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物送检。

公共卫生突发事-件样品采集与处理五、伤寒、副伤寒伤寒、副伤寒是一种急性肠道传染病，是《中华人民共和国传染病防治法》中规定报告的乙类传染病。公共卫生突发事-件样品采集与处理1、标本收集按不同病期采集不同种类的标本。血标本宜在病程的第1~2周采集，但只要发热未退，两周以后仍可获得阳性结果，采血量不少于5~10mL，已用氯霉素者取血凝块作培养。骨髓培养宜在病程的第1~2周送检粪便标本在病程的第3~4周送检。尿标本宜在病程的第3~4周送检，阳性率较低，采集时应避免粪便污染。玫瑰疹的刮取物或活检切片。

公共卫生突发事-件样品采集与处理2、培养血液和骨髓穿刺液先进行增菌培养，粪、尿（沉渣）可直接接种于鉴别培养基，经37℃24h培养后挑选可疑菌落，进一步作生化反应和血清学鉴定。伤寒的经典血清学诊断方法是肥达氏反应（试管法），目前已采用微量疑集试验。

公共卫生突发事-件样品采集与处理六、细菌性痢疾细菌性痢疾（以下简称菌痢）是由志贺菌（又称痢疾杆菌）引起的急性肠道传染病，是常见多发病，其发病率在我国法定报告的甲、乙类传染病中居首位，而且往往引起暴发或流行。

公共卫生突发事-件样品采集与处理急性非典型菌痢症状轻，可仅有腹泻、稀便急性普通型（典型）菌痢急性起病、腹泻（除外其他原因的腹泻）、腹痛、里急后重、可伴发热、脓血便或粘液便、左下腹部压痛。公共卫生突发事-件样品采集与处理急性中毒型菌痢发病急、高热、呈严重毒血症症状，小儿起病时可无明显腹痛腹泻状，常需经灌肠或肛试做粪检，才发现是菌痢。根据主要临床表现有以下类型：休克型（周围循环衰竭型）：有感染性休克症，如面色苍白、四肢厥冷、脉细速、血压下降、皮肤发花、发绀等。脑型（呼吸衰竭型）：有脑水肿表现，如烦燥不安、惊厥、嗜睡或昏迷、瞳孔改变，甚至出现脑疝、呼吸衰竭。混合型：同时出现休克型、脑型的症候，是最凶险的一型。

公共卫生突发事-件样品采集与处理标本的收集患者粪便标本的收集可采用便盒留便、肛拭或采便管采便便盒留便：留取粪便A时应采集新鲜粪便的脓血部分、粘液部分、水样便或稀便。便量1~5g。集体腹泻或食源性暴发患者粪便采集的数额，应根据患者人数的多少，决定采取标本的数量。当怀疑患者为菌血症时，应以无菌操作，从静脉血管采取10~15mL血液，放入加有EDTA抗凝剂瓶中送检。所采取的粪便标本应尽快送检，不得越过2h送到化验室，否则标本应放入Cary-Blair运送培养基中，运送时间超过2h者，应冰浴条件下送检。

公共卫生突发事-件样品采集与处理七、新生儿破伤风新生儿破伤风是破伤风杆菌由脐部，偶可由新生儿外伤处侵入而引起的急性感染性疾病。新生儿破伤风是发现中国家的严重卫生问题。

公共卫生突发事-件样品采集与处理标本采取于脐部未进行消毒处理和注射破伤风抗霉素之前，用无菌棉棒于脐部化脓部位深处取脓汁及坏死组织，至少应同时取两份标本，一份用做涂片镜检，另一份做动物试验。流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）是由脑膜炎奈瑟氏菌（Neisseriameningitidis,Nm）通过呼吸道传播所引起的化脓性脑膜炎，常在冬春季节引起发病与流行，患者以儿童为多见，流行时成年人发病亦增多。

公共卫生突发事-件样品采集与处理标本的采集CSF：无菌操作，吸出CSF2mL，立即放到无菌试管内离心（2000~3000r/min，30min），用灭菌过的毛细管吸取沉淀物直接接种到10%羊血巧克力色琼脂上（CSF上清液部分供检测Nm特异抗原，亦可将其置于-20℃待测），5%二氧化碳环境37℃培养24~72h，每日检查细菌生长的情况，及时分离纯培养物供鉴定。血液：采取病人急性期静脉血液6mL，无菌操作往盛有30mL增菌用的葡萄糖肉汤三角瓶内注入4mL血液（余下的2mL血液同上离心后吸出血清，供检测Nm特异抗原和抗体，亦可将其置于-20℃待测），同上述条件培养24-72h，每日进行分离培养。

公共卫生突发事-件样品采集与处理八、感染性腹泻感染性腹泻广义系指各种病原体肠道感染引起之腹泻。本标准则仅指除霍乱、痢疾、伤寒、副伤寒以外的感染性腹泻。为《中华人民共和国传染病防治法》中规定的丙类传染病。主要包括细菌、病毒、原虫等病原体引起之肠道感染，较常见的如沙门菌肠类、肠致泻性大肠肝菌肠炎、致泻性弧菌肠炎、空肠弯曲菌肠炎、小肠结肠炎耶尔森菌肠炎、轮状病毒肠炎、蓝氏贾第鞭毛虫肠炎等。

公共卫生突发事-件样品采集与处理肠产毒性大肠杆菌（ETEC）标本：霍乱样水样便肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）标本：细菌性痢疾样便

肠出血性大肠杆菌（EHEC）标本：早期为水样便，后为血便。

公共卫生突发事-件样品采集与处理九、炭疽（Anthrax）炭疽（Anthrax）是由炭疽芽孢杆菌（Bacillusanthracis）引起的一种人与动物共患传染病，主要存在于食草动物和牲畜群落之中，并能造成环境的广泛污染。由于炭疽芽孢具有对外界环境极强的抵抗力，造成这种污染常持续存在。人类主要通过接触患病的牲畜、进食感染本病的牲畜肉类、吸入含有该菌的气溶胶或尘埃，以及接触污染的毛皮等畜产品而罹患本病。

公共卫生突发事-件样品采集与处理采取标本时必须遵循的两条原则尽可能在抗生素治疗开始前采取标本除必要时并在具备操作病毒细菌条件的实验室内，不得用解剖的方式获取标本。所需的血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。

公共卫生突发事-件样品采集与处理血液标本所有的疑似人类病例和病畜，都应采取血液样本，标本量至少应满足下列检查的需要。涂片进行显微镜检查接种培养基进行细菌分离培养分离血清检查抗体常规血液检查。

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