DB31T 578-2011 饲料中玉米赤霉醇类物质的测定 液相色谱-串联质谱法

饲料中玉米赤霉醇类物质的测定上海市质量技术监督局发布I本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由上海市畜牧兽医办公室提出。本标准由上海市畜牧标准化技术委员会归口。本标准起草单位：上海市兽药饲料检测所。1DB31/T578—2011饲料中玉米赤霉醇类物质的测定酮、玉米赤霉烯酮的液相色谱-串联质谱测定方法。为0.01mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3方法原理4试剂和材料除方法另有规定外，试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中一级水的规定。4.4氢氧化钠。4.590%(体积分数)乙腈水溶液：取乙腈900mL,加水定容至1000mL。4.60.005mol/L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.2g,溶于1000mL水中。4.72%(体积分数)甲酸甲醇溶液：取甲酸2.0mL,加甲醇定容至100mL。4.850%(体积分数)乙腈水溶液：取乙腈250mL,加水定容至500mL。霉酮、玉米赤霉烯酮对照品，用甲醇配成浓度各约为1mg/mL的标准贮备液，2℃~8℃冷藏保存，有效期六个月。霉酮、玉米赤霉烯酮对照品贮备液各1mL,置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度。该溶液中26种对照品浓度均为10μg/mL,于2℃~8℃冷藏保存，有效期一个月。水溶液(4.8)定容至刻度。该溶液中6种玉5仪器和设备5.4天平：感量0.01mg和0.01g。6试样制备称取试样5g(±0.01g),置于50mL离心管中，加入90%乙腈水溶液(4.5)25.0mL,涡旋混合均8液相色谱-串联质谱测定8.1液相色谱条件柱温：40℃。流动相、流速及梯度洗脱条件见表1。3表1流动相梯度洗脱条件时间乙腈%水%08.2质谱条件离子源模式：电喷雾负离子模式(ESI-)。检测方式：多反应监测(MRM)。离子源温度：150℃。脱溶剂温度：500℃。脱溶剂气、锥孔气均为高纯氮气，碰撞气为氩气或其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。锥孔电压、碰撞电压等电压值应优化至最优灵敏度。定性离子对及定量离子对见表2。表2定性、定量离子对及锥孔电压、碰撞能量的参考值物质名称定性离子对定量离子对锥孔电压V碰撞能量玉米赤霉烯酮a-玉米赤霉烯醇β-玉米赤霉烯醇玉米赤霉酮a-玉米赤霉醇β-玉米赤霉醇4选择1个母离子、2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与对照品工作液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内，且样品谱图中各组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的对照品工作液中对应的定性离子的相对离子丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差%相对离子丰度允许的最大偏差士30士50取试料溶液和对照添加标准溶液，做单点或多点校准，外标法计算，即得。试料溶液和对照添加标准溶液中a-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、a-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮的峰面积应在仪器检测的线性范围之内。玉米赤霉醇类物质对照品的多反应监测(MRM)色谱图参见8.5回收率试验本标准线性工作范围为：0.01mg/kg～2.0mg/kg。阴性样品中添加对照品工作液，按样品制备步骤操作，测定后计算样品添加的回收率。在浓度范围内的添加回收率为80%～120%。9对照试验取对照试料，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。求求式单点校准：或对照添加标准曲线校准：由A,=aX,+b,X——供试试料中玉米赤霉醇类物质含量，单位为毫克每千克(mg/kg);X,——基质添加标准品浓度，单位为毫克每千克(mg/kg);A——供试试料中玉米赤霉醇类物质相应的峰面积；m,——基质添加试料质量，单位为克(g);A,——基质添加标准品中玉米赤霉醇类物质相应的峰面积；m——供试试料质量，单位为克(g);n——稀释倍数。注：单点校准标准溶液浓度与待测样品实际浓度的偏差应小于30%,计算结果保留三位有效数字。5在同一实验室由同一操作人员完成的两个平行测定的相对偏差不大于20%。6(资料性附录)玉米赤霉醇类物质对照品的液相色谱-串联质谱图(MRM图)玉米赤霉醇类6种对照品的液相色谱-串联质谱图(MRM色谱图)见图A.1。04:MRMof2ChannelsES-2:MRMof3ChannelsES-6:MRMof2ChannelsES-3:MRMof3ChannelsE5:MRMof2Channels0000A.1玉米赤霉醇类物质对照品的液相色谱-串联质谱图(浓度为10ng/mL