（高清版）DB62∕T 4758-2023 真菌性玉米顶腐病鉴定技术规程

真菌性玉米顶腐病鉴定技术规程2023-09-25实施2023-09-25实施 1范围 12规范性引用文件 13术语和定义 14原理 15试剂与材料 26仪器及用具 27取样方法 38田间症状表现型 3 410结果判定 511样品保存与处理 5 6附录B(规范性)玉米顶腐病菌菌体形态特征 7I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。本文件由甘肃省粮食油料作物栽培标准化技术委员会归口。本文件起草单位：河西学院、甘肃前进生物科技发展有限公司、甘肃省农业信息中心、泉州师范学院、德农种业股份公司、高台县农业技术推广中心、临泽县农业技术推广中心、张掖国家级玉米种子生产基地种子质量监督检验中心、张掖市建国作物种质创新育种工作室、酒泉市通盈种苗有限公司。本文件主要起草人：雷玉明、马金、赵婧、雷鑫、郑天翔、杨国振、王伟、濮超、吴尧、刘晓刚、张琪、公晓佳、孙志、马丽娟、李自峰、李涛、石建国。本文件由河西学院负责解释。本文件规定了真菌性玉米顶腐病检验取样方法、田间症状识别、实验室检验、结果判断及样品保存与处理的技术要求。本文件适用于玉米种子繁育田、杂交种真菌性顶腐病的鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB1886.239食品安全国家标准食品添加剂琼脂GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法HG/T3462化学试剂蔗糖3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。玉米顶腐病一种由亚粘团镰孢霉引起的玉米叶部、茎部的真菌性病害。亚粘团镰孢霉真菌、丝孢纲、丛梗孢目、瘤座孢科、镰孢霉属的一种真菌。菌落筛选需要从分离培养基培养生长出的大量菌落中，根据菌落形状、颜色、大小、菌丝形态等的各种特征，从中挑选出具有明显表型特征的目标菌落的过程。转接在无菌条件下，将目标菌落转移到适宜其生长的人工合成培养基而形成单一菌株的过程。4原理玉米顶腐病是一种土壤、种子传播的真菌性病害，以亚粘团镰孢霉在土壤、病残体、种子中越冬。以玉米幼苗、叶片、叶鞘、茎秆、果穗的田间症状表现型为初步诊断依据，结合室内种子、土壤、病组织的病原菌分离培养特性与显微镜的形态特征，综合评价，判定真菌性玉米顶腐病。125.10.1%升汞(HgCl₂)称取升汞1.0g,用75%酒精5mL溶解，再加蒸馏水995mL稀释，加入1%酸性品红溶液0.1mL,配制5.2乳酚油(C₉H₁₂O₃)将苯酚结晶加热熔化后取20mL加入20mL乳酸中搅拌均匀，再先后加入20%甘油40mL和蒸馏水称取0.1g医用硫酸链霉素粉剂，用70%酒精5mL溶解，无菌水5.7试验用水6.1.2高压灭菌锅：容积50L,电源220V/50hz,最高工作/设计温度135℃/138℃,最高工作/设计压力0.22Mpa/0.25Mpa,灭菌定时4min～120min,干燥定时30min～240min;6.1.3超净工作台：洁净等级100级，噪声≤58db,平均面风速0.3m/s～0.6m/s,电源220V/50hz,光6.1.4培养箱：控温范围0℃~50℃,温度分辨0.1℃,温度均匀性≤±1℃;6.1.5生物显微镜；双目镜10x/20x,≥5孔物镜转换器，物镜4x/10x/40x/100x;6.1.6低温冰箱：控温范围-10℃~-40℃,控温精度±1℃;6.1.7单道移液器：分液范围2mL～10mL、100μL～1000μL。选择具有玉米顶腐病典型症状或疑似症状的植株，在植株根部周围0.2m²~0.3m²范围内取5cm深的选择玉米顶腐病普发田，对角线5点取样，每点在2m²范围内取5cm深的表土1000g,将各点土样混34本法适用于玉米种子表面病原菌检验。在超净工作台上，将待检玉米样品的种子先用蒸馏水冲洗2璃培养皿内，每皿放入5～10粒，重复5次，每个样品测定种子50粒。培养皿放在25℃±1℃恒温箱黑暗将待检叶片、叶鞘材料，剪取大小为(0.1cm～0.2cm)×(0.1cm～0.2cm)病健交界处组织。待检在超净工作台上，将植株组织样品分别在70%酒精中浸15s～20s,移入0.1%升汞液中消毒30s,用无菌水冲洗3次后，消毒组织置于PSA平板培养基上，每个平板放置5～10在超净工作台上，将土壤样品在PSA平板培养基表面培养出符合第8章中规定的任何一种田间症状表现型，且显微镜检病原形态特征符合附录B描述的亚粘团完成检验后，分离物制成斜面试验菌种保存于-20℃低温冰箱，植物组织样品和病原菌分别制成浸渍标本、玻片标本室温保存。使用的材料和用具，在使用完毕56(规范性)A.1配方A.2制作方法A.2.1配制分别称取200g马铃薯方块、蔗糖15g、琼脂18g。将200g马铃薯方块放入2000mL烧杯中，加入水1000mL煮沸20min～25min,用4层纱布过滤，滤液用水补足1000mL,加入蔗糖15g、琼脂18g,加热使分装培养基溶液150mL,锥形三角瓶口加棉花塞或耐高温组培封口膜，将入高压灭菌锅中，在115℃~120℃条件下高压灭菌30min。当灭菌培养基冷却至45℃~50℃时，在无菌条件下，用单道移液器取10mg/mL硫酸链霉素溶液450uL加入150mL培养基中，摇均后倒入无菌Φ90mm或Φ120mm培养皿和装入无菌18mm×(规范性)玉米顶腐病菌菌体形态特征B.1PSA培养基菌落特征B.1.1菌落形态气生菌丝绒毛状至粉末状。B.1.2菌落颜色菌落2d～3d为粉白，4d～5d渐变为淡紫色，中部淡紫色，背面菌落淡黄色，边缘略呈淡紫色。B.2产孢方式产孢细胞内壁芽生，单、复瓶梗式产孢，以单瓶梗居多。B.3小型分生孢子特征B.3.1形状特征小型分生孢子长椭圆形或拟纺锤形，较小，呈假头状不呈串珠状着生。B.3.2大小B.4大型分生孢子特征B.4.1形状特征镰刀形，较直而细长，脚胞足跟不十分明显，顶端渐尖。B.4.2大小B.5生物学特性B.5.1温