DB23-T2735-2020-水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术规程-黑龙江省

DB23ICS65.020.20B38黑龙江省地方标准DB23/T2735-2020水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术规程2021-01-02实施发布黑龙江省市场监督管理局DB23/T2735-2020前  言本标准依据GB/T1.1-2009的编写规则起草。本标准由黑龙江省农业农村厅提出。本标准起草单位：黑龙江省农业科学院生物技术研究所。本标准主要起草人：张国民、马军韬、邓凌韦、赵文生、宋显东、张丽艳、王春荣、胡亚军、王永力、张齐凤、高洪儒、张君、王南博、任洋。IDB23/T2735-2020水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术规程1范围本标准规定了水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术的术语与定义、环境条件、技术流程、评价标准和技术档案。本标准适用于水稻资源、品种（系）等材料对穗颈瘟抗性的人工鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB3095环境空气质量标准GB5084农田灌溉水质标准GB15618土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准（试行）GB/T15970稻瘟病测报调查规范NY/T3257-2018稻水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程下列术语与定义适用于本文件。穗颈瘟和枝梗瘟穗颈瘟是稻瘟病的一种形式，发生在穗颈、穗轴和枝梗上，初期为暗褐色小斑点，后逐步呈环状或上下扩展，因品种不同，病部分别呈现黄褐色、褐色或黑褐色。早期发病大多形成全白穗或局部白穗，谷粒瘟是稻瘟病的一种形式，发生在谷壳和护颖上，早期发病，病斑呈椭圆形，较大，中央灰白色，以后可逐渐扩展至整个谷粒，造成灰白色至暗灰色瘪粒。后期发病，多形成椭圆形或近圆形斑点，褐色至红褐色，严重时谷粒不饱满，米粒变黑。能够侵染水稻植株并引起病害的病原体。1DB23/T2735-2020用医用注射器将一定量的接种体注射进水稻植株体内的接种方法。3.63.73.8对照品种在人工接种鉴定时以全感水稻品种为对照。抗病性植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。病情指数一种评价植物病害发生程度的综合性指标，包括植物病害的发病率与严重度。其中，发病率是指感病样本数占调查总样本数的百分率，表示发病的普遍程度；严重度用分级法表示，即将发病的严重程度由轻到重划分出若干个级别，分别用各级的代表值或百分率表示。3.9水稻品种水稻品种包括对照品种和待测水稻材料。3.10产量损失率一种评价植物受逆性条件影响后产量损失程度的指标，包括未发病植株产量和发病植株产量。以穗为单位，产量损失率计算公式为：A(BC)/B100%...........................（1）4环境条件鉴定时的环境条件，环境空气质量应符合GB3095规定；土壤环境质量应符合GB15618规定；农田灌溉用水质量应符合GB5084规定。选择易发病环境条件的较为中间的整块田块，有独立的进水口和排水口。在鉴定圃内种植对照和待测材料。依据水稻材料的数量，在鉴定圃内布局若干个小区，小区内种植待测水稻材料，小区设置为2行区，行距为30cm，株距为12cm，每行15蔸，单本插秧。根据试验目的，设置重复。水稻种植全过程在常规管理的基础上，创造有利于稻瘟病发病的条件。不带药移栽，偏重施用氮肥（一般情况下比生产用氮肥增加30%左右），生长过程中可防虫、除草，但不能施用任何杀菌剂。在水稻生长的中后期，若发生倒伏，需及时地搭建竹架。2DB23/T2735-20205.3接种鉴定5.3.1接种体制备将稻瘟病菌接种在燕麦片番茄汁琼脂培养基上，于25℃-27℃条件下培养5d-7d，用无菌水轻轻洗下菌丝（菌丝团要小）和分生孢子，将其悬浮液均匀涂于另一新的平板培养基上（培养基要适当硬一些），每皿约400µl，超净工作台中吹干。置于25℃培养箱中培养约35-40h至培养基表面长出一层稀疏的气生菌丝体。向菌落上加少量无菌水，用棉签轻轻擦去表面的气生菌丝，并用水将培养基表面的菌丝和分生孢子清洗干净，待培养基表面晾干后罩上2层纱布，用皮筋绑好，于25℃光照条件下培养至有大量分生孢子产生。从培养基上洗下分生孢子，离心（3000转/min），弃上清，沉淀下的分生孢子用0.025%吐温20水溶液悬浮，血球计数板计数，孢子悬浮液浓度调至2×10个孢子/mL，可用混合菌株或单个5菌株，供接种使用。5.3.2接种方法在水稻始穗期（稻穗抽出1/3左右）用医用注射器将合格的孢子悬浮液注入水稻穗苞中下部，接种量为1mL/穗，依据试验所需，每个处理接种100穗以上。接种后，如中午日照强烈，建议应用单层遮阴网进行遮挡，以创造利于穗颈瘟发病的田间小气候。5.4病情调查5.4.1调查时间水稻乳熟期进行调查，调查2次，间隔7d-10d。5.4.2调查方法0级：整穗无穗颈瘟、枝梗瘟和谷粒瘟；将水稻穗颈瘟的田间调查数据，鉴定圃中水稻农事操作及相关情况进行电子数据登记。计算每个水3DB23/T2735-20206.2病情指数计算公式以穗为单位，当严重度用分级指标表示时，病情指数计算公式为：R100(PiDi)/(PDM)........................（2）式中：R——病情指数；Pi——各级病穗数，个；Di——各级代表值；P——调查总穗数，个；DM——最高级代表值。6.3抗瘟性评价标准依据水稻材料的病情指数评价其抗穗颈瘟性，评价标准见表A.3。7技术档案建立水稻穗颈瘟人工接种鉴定技术档案，内容包括环境条件、技术流程、评价标