DB23-T3033-2021-东北百里香组培繁殖技术规程-黑龙江省

ICS65.020.20CCSB05DB23黑龙江省地方标准DB23/T3033—2021东北百里香组培繁殖技术规程黑龙江省市场监督管理局发布DB23/T3033—2021前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由黑龙江省林业和草原局提出。本文件起草单位：东北林业大学、黑龙江省电力科学研究院、绥棱县应急管理局、绥棱县国有林场发展服务中心、海伦市森林资源保护中心、海伦市陈家店林场。本文件主要起草人：范丽娟、王玉喜、赵玉彬、苗雨蕾、钱大勇、史恭发、闫蕾、吕汝彤、叶王斌、赵蕊阳、刘桂伶、杨娟、付海静、王玲、王金红。ⅠDB23/T3033—2021东北百里香组培繁殖技术规程1范围本文件规定了东北百里香（ThymusmandschuricusRonn.）组培繁殖的环境与设备消毒、培养基配制、外植体的制备、培养条件、不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养、炼苗、温室移栽及管理和生产档案。本文件适用于东北百里香组培繁殖。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用性文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程NY/T2306—2013花卉种苗组培快繁技术规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4.1接种室消毒接种室消毒按NY/T2306—2013中8.6的规定执行。4.2培养室消毒培养室消毒按NY/T2306—2013中8.7的规定执行。4.3超净工作台消毒接种器具按NY/T2306—2013中8.4的规定执行。培养基母液配制按NY/T2306—2013中7.3的规定执行。1DB23/T3033—20215.2培养基配制5.2.1培养基配方培养基配制成分如下：a)初代培养基：MS＋0.5mg/L6-BA＋30 g/L蔗糖＋固化剂，灭菌前培养基pH值调制为5.8～6.0；b)不定芽增殖培养基：MS＋0.5 mg/L6-BA＋0.1 mg/LNAA＋30 g/L蔗糖＋固化剂，灭菌前培养基pH值调制为5.8～6.0；c)生根培养基：1/2MS＋0.5 mg/LIBA＋30 g/L蔗糖＋固化剂，灭菌前培养基pH值调制为5.8～6.0。5.2.2培养基配制方法培养基配制方法按NY/T2306—2013中7.4执行。5.3培养基灭菌及保存培养基灭菌及保存方法按LY/T1882—2010中4.2进行。6外植体的制备6.1外植体的选择宜6月~8月，从健康植株上选取中上部半木质化的枝条，剪成5cm长的茎段。6.2消毒将外植体在洗衣粉水中浸泡15 min，自来水冲洗1 h~2 h后，置于超净工作台上，用75 %的酒精浸泡10 s～30 s，无菌水冲洗4遍~6遍，加入2 %的次氯酸钠溶液搅拌杀菌15 min或0.1%的升汞杀菌8 min~10 min，无菌水冲洗4遍~6 遍，用无菌滤纸吸干材料表面水分，切割成1 cm~1.5 cm长的带腋芽的茎段。培养条件为24℃～28℃，光周期为14h/d，光照强度3000Lux，空气相对湿度60%～80%。将带有腋芽的茎段接种到诱导不定芽的初代培养基上，培养15d～20d，获取不定芽备用。切下不定芽，垂直插入不定芽增殖培养基中，插入深度0.5cm左右，培养30d。待分化的不定芽形成芽丛后，分割新长出的不定芽。可按需求重复继代。选取培养瓶中长度2 cm ～3 cm生长健壮的不定芽转接至生根培养基中，插入深度为0.5 cm，培养≥20d。2DB23/T3033—202111炼苗、温室移栽及管理11.1炼苗在组培苗根长至2 cm～3 cm时，在培养室中半开封口膜放置1d，再去掉封口膜放置1d，用镊子取出组培苗，用自来水冲洗附着在根上的培养基，放入底部装有自来水的三角瓶中水培，水的深度以没到组培苗根颈部为宜，2d后移栽。11.2温室移栽及管理11.2.1移栽准备将蛭石在121℃高压灭菌锅中灭菌20min，放凉后装入规格为10cm×11cm×8.5cm的花盆中，装至花盆高度的2/3，压实。11.2.2移栽取出组培苗，在散射光下移栽至花盆的蛭石中，使根尽量伸展开，压实，浸透水，放入人工气候箱内缓苗，培养条件为24℃～28℃，光周期为14h/d，光照强度3000Lux，空气相对湿度60%～80%。15d后移至温室。11.2.3移栽后管理移栽初期，保持空气湿度≥60%，适时浇