DB13T 555-2004 猪弓形虫病防治技术规程

本标准附录A、附录B为规范性附录。本标准由河北省畜牧局提山。本标准起草单位：河北省畜牧兽医研究所。本标准主妥起草人：秦建华、张继东、赵月兰、李淑芳、杨淑亚。I本标准规定了猪弓形虫病的诊断和防治。本标准适用于生猪饲养场(户)及动物诊疗单位对猪弓形虫病的诊断和防治。2规范性引用文件修改单(不包括勘误的内容)或修订版本均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB16548畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程NY/T573弓形虫病诊断技术NY5030无公害食品生猪饲养兽药使用准则NY5032无公害食品生猪饲养饲料使用准则NY5033无公害食品生猪饲养管理准则3术语和定义弓形虫病又称速殖子，呈香蕉形或半月形，一端较尖，一端钝圆。一边较扁平，一边较弯曲。大小为(4~7)μm×(2~4)μm。用姬姆萨染色后可看到胞浆呈浅蓝色，有颗粒，核呈深蓝紫色，偏于钝圆一端。排列，在有核细胞内(单核细胞、内皮细胞、淋巴细胞等),还可见到正在繁殖的虫体，形状多样，有包囊直径大小差别很大，小的仅50μm,大的可达100μm。缓殖子的形态与速殖子相似，仅核的位置稍偏后。包囊多见于脑、眼、骨骼肌、心肌和其它组织内，是虫体在宿主体内的休眠阶段，见于慢性病例。裂殖体较尖，大小为4.9μm×1.5μm,其数目不定，约4~29个，但以10~15个居多，呈扇形排列。2用姬姆萨染色后，核呈淡红色而疏松，细胞质呈淡蓝色。发育成熟的雄配子体可形可达15μm~20μm。染色后可见核深红色，山现于猫肠道中，随类便排到外界。呈卵圆形，有双层囊壁，表面光滑，大小为(11～14)μm× (9~11)μm,平均12μm×10um。孢子化卵囊内含有两个卵圆形的孢子囊，其大小约为8μm×6μm,每个孢子囊内含有4个长形弯曲的子孢子，大小约8μm×2μm,有残体。4.1诊断原则4.2流行病学调查4.3临床诊断a)急性型的潜伏期为3d～7d,体温升高到40.5℃~42℃,呈稽留热型；b)病猪精神沉郁，食欲废绝或减退，呼吸困难，呈明显的腹式呼吸，呈犬坐式姿势，流浆液性d)仔猪感染斤，临床上常见腹泻，尿少，呈黄褐色，病程2d~8d,常发生死亡；e)怀孕母猪感染后，流产或新生仔猪出现先天性弓形虫病而死4.3.2亚急性型潜伏期为10d~14d,较急性型的症状缓和。4.3.3慢性型4.4病理诊断35.1预防4附录A(规范性附录)A.1方法提要a)美蓝、硼砂(10H₂O)、碳酸钠(分析纯);b)生理盐水、95%乙醇、蒸馏水(双蒸)、弓形虫阳性对照血清。A.4操作步骤a)称取碳酸钠5.3g放入1000mL容量瓶中，加蒸馏水完全溶解后定容，即成0.53%碳酸钠溶液。b)称取硼砂(10H₂O)3.62g放入1000mL容量瓶中，加蒸馏水完全溶解后定容，即成1.91%硼砂c)量取0.53%碳酸钠溶液97.3mL和1.91%硼砂溶液2.7mL放入100mL磨口锥形瓶中，摇匀，即成pl!11的缓冲液。d)称取美监14.8g放入1000mL容放瓶中，加95%乙醇完全济解后定容，即成美蓝饱和溶液。e)t取美蓝饱和溶液10mL和pll1的缓冲液90mL放入100mL磨口锥A.4.1.2抗原制备采取人工感染弓形虫72h后的小白鼠腹水，加生理盐水洗涤，以3000r/min离心10min,重红操作2~3次后，用生理盐水混悬稀释至400~600倍，镜检，每个视野含虫体30~40个，即每儿混悬液含弓形虫约500万个。A.4.1.3辅助因子即健康人血消。并非每个健康人的血清都含有这种辅助因子，须预先经过测试.大约6个人中有一个人可用。测试方法是取按A.4.1.2方法制备的抗原0.12mL,加待测健康人血消0.08mL,混合后子3?℃水浴中作用1h,冷却，加入碱性美蓝溶液0.1mL,混匀，静置10min,吸出镜检100个游离虫体，若90个以上业体着色时则该血清可用。A.4.1.3被检血清5采血分离的待检生猪血清，用前置56℃水浴中30min灭活。A.4.3置37℃温箱中12h,取出待冷；加美蓝染液2~4滴，振荡5min~6min后，分别镜检计数各管内100个游离虫体的着色与未着色的比例判定结果。A.4.4另设阳性对照和阴性对照管，前者以阳性血清A.5判定标准在阳性对照虫体全部不着色、阴性对照90%以上虫体着色的情况下，对被检血清管进行判定：a)未着色虫体在60%以上为阳性；b)未着色虫体在40%～59%为可疑：c)未着色虫体在39%以下为阴性。对猪弓形虫病，当1:16～1:32稀释时，呈阳性时为可疑，1:64稀释时，呈阳性时判该猪为已受感染。6附录B(规范性附录)B.1方法提要B.2试剂a)弓形虫间接血凝试验冻干抗原、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、迭氮钠(分析纯):b)弓形虫标准阳性血清(效价不低于1:1024)、弓形虫标准阴性血清、健康兔血清、蒸馏水(双B.3设备和仪器c)微型振荡器；B.4操作步骤B.4.1材料准备B.4.1.1稀释液a)称取氯化钠4.25g、磷酸二氢仰2.86g、磷酸氢二钠(无水)19.34g、迭氮钠1.00g放入1000mL容量瓶中，加蒸馏水完全溶解后定容，过滤分装，10磅15min高压灭菌，即成0.1%迭氮钠的0.15mol!L磷酸盐缓冲液(PBS)。b)址取上述溶液98mL和健康免血清2mL放入100mL磨口锥形瓶中，混合，无菌分装，0℃~4℃B.4.1.2诊断液将弓形虫问接血凝试验冻干抗原，按标定毫升数用灭菌蒸馏水稀释摇匀，1500r/min~2000r/min离心5min~10min,弃去上清液，加等量稀释液摇匀，置4℃左右，24h后使用，0℃~4℃左右保存10dB.4.1.3被检血清无菌采取待检猪血液并分离血清，检验前56℃灭能30min。B.4.2在96孔V型微量血凝反应板上，用移液器每孔加稀释液0.0对照组均加8孔。B.4.3加入样品血清、阳性对照血清和阴性对照血消，第1孔加相应血清0.025mL。B.4.4定性检查时稀释至第3孔，定址检查时稀释至第7孔。定性的第4孔、定炝的第8孔为稀释液B.4.5将诊断液摇匀，每孔加0.025mL,加完后将微量血凝反应板置微型振荡器上振荡Imin~2min,7直至诊断液中的血球分布均匀。取下反应板，盖上玻璃板，以防落入灰尘，置22℃~37℃下2h~3h后12345678定性定量阴性对照阳性对照B.5结果判定B.5.1判定标准集的红细胞有的出现下滑现象。d)(十):25%的红细胞在孔底凝集，其余不凝集的红细胞在孔底中央集中成大的圆点。e)