DB42T 1290-2017 水稻花药培养技术规程

备案号：DB42Technicalregulationsforanthercultureofrice湖北省质量技术监督局发布I V 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 5 6 7V水稻种质创新、永久性作图群体的构建以及转基因水稻花药培养操作的规范性，更有效地服务于水稻育种和1水稻花药培养技术规程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）DB22/T281-2001真菌实验室的消毒灭菌方法DB33/T752-2009植物种苗组培快繁技术规程成一团无分化的薄壁组织——愈伤组织，随后使愈伤组织再分4.1操作流程24.2培养基的配制4.2.1配制程序准备好母液、蒸馏水、蔗糖、固化剂等，按图 培养器皿洗涤干燥 凝固灭菌封口4—4.2.2母液的配制和保存按大量元素、微量元素、铁盐、植物生长物质分别配制母液见附录A、附录B。母液配制好后，放4.2.3培养基的类型4.2.4配制方法诱导培养基的配制（以配制1L培养基为例）：称取植物凝胶3g放置锅中，加入800mL蒸馏水，煮至凝胶完全融化且没有泡沫；煮胶的同时，量取N6大量元素I、II各50mL，N6微量元素III、铁盐IV、N6有机物V各10mL于烧杯中，然后加入1mg·L-1KT1mL、1mg·L-1NAA3mL、1mg液与凝胶混合，并加蒸馏水定容至1L。混合时一定要边混合边搅动，以防培养基局部凝固。混合均匀后用精密pH试纸调节培养基pH值至5.8。趁热将培养基分装到100mL三角瓶中封口后高压蒸汽灭菌，冷却备用。分化培养基的配制（以配制1L培养基为例）：称取植物凝胶3g放置锅中，加入800mL蒸馏水，煮至凝胶完全融化且没有泡沫；煮胶的同时，量取MS大量元素I、II各50mL，MS微量元素III、铁盐IV、培养基分装到100mL三角瓶中，每瓶装30mL~35mL，封3生根培养基的配制（以配制1L培养基为例）：称取植物凝胶3g放置锅中，加入800mL蒸馏水，煮至凝胶完全融化且没有泡沫；煮胶的同时，量取MS大量元素I、II各25mL，MS微量元素III、铁盐IV各5mL、MS有机物V10mL于烧杯中，然后再将母液混合液与凝胶混合，并加蒸馏水定容至1L。混合时一定要边混合边搅动，以防培养基局部凝固。混合均匀后用精密pH试纸调节培养基pH值至5.8。在培养基中加入0.5g活性炭粉末搅匀，趁热将培养基分装到100mL三角瓶中，每瓶装30mL~354.3水稻幼穗的准备4.3.1取样观察外部特征和碘-碘化钾染色法镜检核对，于晴天下午选取花药发育处于幼穗分化第七期的中后4.3.2预处理4.3.3消毒将预处理后的稻穗剥除苞叶，剪取中部稻穗，用0.1%升汞溶液浸泡10min或用新配制的3%次氯酸钠溶液浸泡25min，之后用无菌水冲洗4次~5次，用无菌滤纸吸4.4取花药接种在无菌操作台上，将颖壳基部1/5处剪断，用镊子夹住颖壳，剪口朝下，在三角瓶口敲4.5诱导愈伤组织将接种好的材料放至培养箱中暗培养（培养温度为籼稻30℃,粳稻28℃)至愈伤组织直径2mm~34.6愈伤组织分化4.6.1愈伤组织转移44.6.2分化培养材料放至培养箱中，培养条件为光照强度24μmol·m-2·s-1~36μmol·m-2·s-1，光照时长12h·d-1~16h·d-1，4.7生根4.7.1转移花培苗取生长健壮、叶色正常、完整的花培苗移植到生根培养基上，每个100ml三角瓶中放置4.7.2生根培养将移植的花培苗放至培养箱中，直至小苗生出完整根系，苗粗壮，高度10cm以上。培养条件为光照强度24μmol·m-2·s-1~36μmol·m-2·s-1，光照时长12h·d-1~16h·d-1，温度28℃。4.8花培苗炼苗与移栽4.8.1炼苗将培养瓶放置日光温室，温度控制在25℃±3℃,打开瓶盖，加水至培养基上将根部培养基清洗干净，用静置过1d~2d的自来水继续养苗3d~5d，直至长出1cm左右的新根。4.8.2移栽与管理5N60NH4NO30MnSO4·4H2OZnSO