DB4419T 15-2024 朱顶红种苗组培快繁技术规程

ICS65.020.20CCSB05DB4419DB4419/T15—20242024-10-10发布2024-11-01实施东莞市市场监督管理局发布IDB4419/T15—2024前言 III1范围 2规范性引用文件 3术语与定义 4培养基 4.1初代培养基 34.2增殖培养基 34.3愈伤组织分化培养基 34.4体细胞胚成苗培养基 34.5壮苗培养基 34.6生根培养基 35组培苗快繁流程 5.1培养基配制 35.2培养基灭菌 35.3接种工具灭菌 35.4环境消毒 5.5无菌操作 5.6外植体选择 45.7外植体消毒 45.8初代培养 5.8.1以鳞茎盘为外植体诱导不定芽 5.8.2以鳞片为外植体诱导胚性愈伤组织 5.8.3以子房和花梗为外植体诱导不定芽 5.9增殖培养 5.9.1不定芽增殖培养 5.9.2愈伤组织增殖培养 5.9.3愈伤组织分化培养 5.9.4愈伤组织体细胞胚的诱导 5.10体细胞胚的培养 55.11壮苗培养 55.12生根培养 55.13炼苗 55.14移栽 56组培苗质量及分级 6.1质量要求 IIDB4419/T15—20246.2分级...........................................................................................................................................................6DB4419/T15—2024III本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由东莞市农业农村局提出。本文件由东莞市农业农村局归口。本文件起草单位：广东圣茵花卉园艺有限公司、中国科学院华南植物园。本文件起草人：张文心、曾晶珏、曹雪莹、曾宋君、周世明、吴坤林、裴洁、房林。本文件为首次发布。DB4419/T15—20241朱顶红种苗组培快繁技术规程1范围本文件规定了朱顶红种苗组培快繁的术语和定义、培养基、组培苗快繁流程、组培苗质量及分级。本文件适用于朱顶红种苗的组培快繁。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程危险化学品安全管理条例中华人民共和国国务院令第591号3术语与定义下列术语与定义适用于本文件。3.1朱顶红hippeastrum生种和园艺品种，其鳞茎膨大成卵状球形，由鳞茎盘和鳞片组成；叶带状，互生成两侧排列；花茎中空，从鳞茎一侧或两侧抽生；伞形花序两朵至多朵着生于花茎顶端；花漏斗形，单瓣或重瓣，单瓣花花瓣和雄蕊都为6枚，雌蕊1枚，可育；重瓣花为雌雄蕊退化而成，多不可育，花瓣颜色多变，部分品种带有香味；子房3室，蒴果球形；种子成熟后为黑色扁平翅状。3.2植物组织培养的简称，将植物的器官、组织、细胞或原生质体等材料，在人工配制的培养基上和特定环境条件下离体培养，获得再生完整植株的过程。3.3培养基medium在植物组织培养过程中，根据不同植物营养需求、人工配制的、包含培养材料生长所需的营养物质和生长调节物质、供培养材料生长的基质。2DB4419/T15—20243.4将消毒后的外植体或干净培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。3.5无菌条件下将表面消毒的外植体切割成适合大小，接入经灭菌处理的培养基中进行初代诱导培养。初代培养时间一般为3～5周。为最大限度保持母本特性，宜以直接诱导不定芽为主。3.6经诱导形成的不定芽不断转移到增值培养基中进行培养。增值周期根据培养植物材料生长情况而定，一般为3周～6周。初代要培养以后培养代数宜控制在12～30代，增值系数宜控制在2.5～4.0。3.7从增值培养或壮苗培养的不定芽中切取生长健壮、叶色正常、叶片舒展的不定芽，接种在生根培养基中诱导生根，培养周期一般为3周～4周。幼苗基部长出3条～5条1cm～2cm长的不定根即可进行移栽。3.8组培苗按照5.13、5.14的练苗和移栽方法将组培苗移入温室中炼苗并随后种植于配有专用基质的穴盘中。3.9MS培养基3.106-苄氨基腺嘌呤（6-BA）6-benzylaminopurin3.11NAA：萘乙酸naphthylaceticacid3.12DB4419/T15—202434培养基4.1初代培养基4.2增殖培养基4.3愈伤组织分化培养基4.4体细胞胚成苗培养基4.5壮苗培养基4.6生根培养基5组培苗快繁流程5.1培养基配制按培养基的配方及所需的数量，将所需的各类物质分别加入蒸馏水中，搅拌溶化后定容至所需的体5.2培养基灭菌5.3接种工具灭菌DB4419/T15—20244镊子、手术刀柄、接种盘等接种工具使用前，采用湿热灭菌法，灭菌锅压力0.11Mpa、温度121℃,灭菌时间18min～20min。使用过程中，镊子与手术刀片可采用酒精灯灼烧或用接种专用消毒器灭菌。5.4环境消毒培养室和接种室每周定期用二氧化氯消毒剂或臭氧杀菌，接种前接种台用紫外线灯照射30min后再用浓度为75%的酒精喷雾杀菌。5.5无菌操作操作人员接种时应佩戴乳胶手套，并用70%～75%酒精涂擦。5.6外植体选择选择具有典型性状的健壮、无病虫害的植株，采切鳞茎或花序作为建立组培快繁体系的外植体，采切前适当控水控肥，在室外采种时，应选择晴朗天气，确保外植体干爽。5.7外植体消毒用棉花球蘸取75%酒精，擦去表面尘土，鳞茎去除根、叶，剥除外部1～3层鳞片，放入无菌锥形瓶中。先倒入75%酒精使之没过外植体表面1cm左右，轻摇锥形瓶，除去外植体表面气泡，消毒30s后倒使外植体与试剂充分接触；最后用无菌水冲洗5次～6次。升汞安全管理方法按照《危险化学品安全管理条例》执行。5.8初代培养5.8.1以鳞茎盘为外植体诱导不定芽将已消毒的鳞茎置于无菌垫盘上，从中间横切，保留中下部位，再根据鳞茎大小按需切成带有鳞茎盘的小块接种到初代培养基（见4.1.15.8.2以鳞片为外植体诱导胚性愈伤组织将已消毒的鳞茎置于无菌垫盘上，从中间横切，保留中下部位，将鳞片切成5mm×6mm的切块，将鳞片切块凹面向下放置在初代培养基（见4.1.2）上，培养条件为：温度25℃±2℃,5.8.3以子房和花梗为外植体诱导不定芽将已消毒的花蕾置于无菌垫盘上，将花梗和子房横切成2mm～3mm的薄片，平铺在初代培养基（见4.1.3）上，进行初代诱导培养。培养温度为25℃±2℃,暗培养48h后，进行光照培养，光照强度15005.9增殖培养5.9.1不定芽增殖培养DB4419/T15—20245将诱导培养形成不定芽的培养材料切分成小丛芽，转接到增殖培养基（见4.2.1）中继续培养。若培养材料已形成鳞茎，则视鳞茎大小将其纵切成2份～4份，再接种到增殖培养基中，增殖周期一般为30d~5.9.2愈伤组织增殖培养将诱导培养形成的愈伤组织切分成3mm～5mm的小块，转接到增殖培养基（见4.2.2）中进行培养。5.9.3愈伤组织分化培养5.9.4愈伤组织体细胞胚的诱导5.10体细胞胚的培养5.11壮苗培养5.12生根培养将带有2片～3片叶的不定芽按大小分开，分别接种到生根培养基（见4.6）中，每瓶接种15株～205.13炼苗将具有2条～3条不定根、鳞茎直径0.5cm～1.0cm的组培瓶苗移入炼苗室，炼苗室要求环境清洁、5.14移栽炼苗后，取出组培苗，用清水洗净表面的培养基后，放入1000倍多菌灵浸泡1min～2min，捞出沥干水分，分级移栽于穴盘或育苗筛中。采用泥炭和珍珠岩体积比为3:1的湿润混合基质，种植时尽量避免折断根系，将根部舒展铺于基质上，填充基质至高于根系2cm～3cm处