t-spot.tb教学培训课件

t-spot.tbT:T细胞SPOT：ELISPOT

(enzyme-linkedimmunospotassay；酶联免疫斑点技术)是一种从单细胞水平检测分泌抗体或细胞因子细胞的免疫学新技术。原理是用抗体捕获培养细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来。TB：结核杆菌优势该检测方法采用的结核杆菌特异性抗原为ESAT-6和CFP-10，其编码基因RD1在BCG（卡介苗）和绝大多数非结核杆菌中是缺失的，因此较好的避免了交叉抗原反应，提高了特异性。原理1.从全血中分离出外周血单个核细胞PBMCs2.将样本加入反应孔，每个样本需要4个检测孔：①空白对照为了判断非特异细胞的活化反应

②结核特异抗原A，PanelA(ESAT-6)

③结核特异抗原B，PanelB(CFP10)

④植物血凝素PHA对照，用于判断PBMC活性

注：植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体。由于其较难提纯，且成本极高，所以一直以来仅在实验室中作为刺激淋巴细胞增殖的试剂。原理3.孵育，刺激T细胞，分泌的细胞因子被预包被在反应孔膜上的特异抗体捕获4.洗涤、标记、计数。结果前提：通常正常结果，空白对照孔没有或有很少的斑点而植物血凝素PHA对照孔斑点数超过20个。1.阳性结果：

①空白对照孔斑点数为0～5个且（抗原A或抗原B斑点数)-（空白对照孔斑点数）≥6

②空白对照孔斑点数6-10个时且（抗原A或抗原B斑点数）≥2倍空白对照孔斑点数2.阴性结果：不符合上述标准且对照孔正常结果的诊断阳性结果：1.提示患者体内存在结核杆菌特异的效应T细胞，患者存在结核感染。但是否为活动性结核病，需结合临床症状及其它检测指标综合判断。

2.T-SPOT.TB结果不能作为单独或是决定性的诊断结核病的依据。

3.虽然ESAT-6和CFP10在所有的BCG菌株，以及绝大多数环境分枝杆菌中缺失，但T-SPOT.TB的阳性结果有可能是堪萨斯、苏氏、戈登或海分枝杆菌的感染引起的。阴性结果：提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效应T细胞。如出现以下情况，阴性结果不能排除结核杆菌感染的可能：

1、因感染阶段不同（如标本是在细胞免疫发生前获取的）引起的假阴性结果；

2、少数免疫系统功能不全的情况，如HIV感染者、肿瘤患者、儿童等；

3、以及其它免疫学、实验非正常操作的差异。临床应用传染科/感染科：1.2-3周以上的不明原因发热病人的结核感染排筛

2.免疫力低下患者肺外结核的辅助诊断

卡介苗接种人群的结核感染筛查

3.HIV感染者并发结核的筛查

T-SPOT.TB不受CD4细胞计数水平的影响，避免了HIV感染后细胞免疫功能受损而导致的假阴性结果。呼吸科/结核科呼吸系统疾病与结核鉴别诊断胸水/心包积液鉴别诊断菌阴肺结核的辅助诊断肺外结核辅助诊断特殊人群（矽肺等）的结核排筛2-3周以上的不明原因发热病人的结核感染排筛风湿免疫科生物制剂/免疫抑制剂治疗前后的筛查

大剂量激素治疗前后的结核筛查

自身免疫性疾病与结核病的鉴别诊断

发热待查患者的结核排筛消化科腹水（结核性腹膜炎）待查肠结核的鉴别诊断发热待查生物制剂治疗前结核筛查（克罗恩病，

炎症性肠病）儿科儿童发热的结核感染筛查原发性结核的辅助诊断儿童