用于新型冠病毒疫苗非临床评价hACE2转基因小鼠的规范化构建及使用指南编制说明

《用于新型冠状病毒疫苗非临床评价hACE2转基因小鼠的规范化构建及使用指南》编制说明一、标准制定背景及任务来源（一）标准制定的必要性和意义鉴于国家发布的《新型冠状病毒疫苗非临床有效性研究和评价技术要点》及《生物制品非临床安全性评价指导原则》中明确提出可使用hACE2转基因小鼠作为实验动物，但目前尚无针对该类小鼠质量评判的具体标准。这导致实验中转基因小鼠的质量参差不齐，进而影响实验数据的准确性和一致性，给疫苗非临床评价结果的可靠性与科学性带来了挑战。本标准旨在制定hACE2转基因小鼠的规范化使用指南，以明确其质量控制要求和操作流程，从源头上减少实验用动物质量不均所引发的问题。通过制定统一的标准，既能规范转基因小鼠构建及使用的全流程，又能提升药效学和安全性评价数据的科学性与可比性，从而为季铵盐检测机构提供方法依据，为药品审评中心简化数据审查流程提供支持。此外，这一标准的建立将推动新型冠状病毒疫苗非临床研究进程的规范化，促进动物模型构建和应用的标准化，为相关基础研究和药物与生物制品开发提供重要支撑。（二）任务来源本标准由湖北省毒理学会提出。由湖北省毒理学会归口。由四川大学华西医院、武汉大学、中国科学院武汉病毒研究所、成都华西海圻医药科技有限公司、江苏集萃药康生物科技股份有限公司起草，项目名称为《用于新型冠状病毒疫苗非临床评价hACE2转基因小鼠的规范化构建及使用指南》。二、主要工作过程（一）成立标准编制小组《用于新型冠状病毒疫苗非临床评价hACE2转基因小鼠的规范化构建及使用指南》在正式编制前进行了详细周密的准备工作。编制工作于2024年正式启动，由相关领域专家组成标准起草工作组，明确标准制定的目标、技术路线与分工机制。（二）标准起草小组分工1.起草单位四川大学华西医院、武汉大学、中国科学院武汉病毒研究所、成都华西海圻医药科技有限公司、江苏集萃药康生物科技股份有限公司。2.主要起草人（三）查询国内外相关标准和文献材料2024年4月至5月，标准编制组成员根据标准纲要查询和收集了国内外关于新型冠状病毒、疫苗研发、hACE2小鼠模型、转基因动物构建与检测等相关领域的技术资料、法规文件及科研成果，并对现行标准，如GB14922、GB14925、GB/T35892、《新型冠状病毒预防用疫苗非临床有效性研究与评价技术要点（试行）》等，进行了系统的比对与借鉴。在此基础上，确立了标准制定的指导思想，制定了研究的技术路线，形成了开题报告和标准草案。（四）确定标准制定技术路线、制定原则2024年5月至6月，主要起草人组织召开了标准开题论证会。会上，标准编制组介绍了国内外相关分析方法的研究现状、标准制定的技术路线与技术难点，以及拟开展的主要工作内容等。（五）编写标准征求意见稿2024年10月至12月，标准编制组完成了《用于新型冠状病毒疫苗非临床评价hACE2转基因小鼠的规范化构建及使用指南》标准草案及编制说明的撰写，之后多轮内部讨论和修改，形成征求意见稿。（六）定向征求意见2025年2月至7月，标准的征求意见稿在武汉市武汉大学生命科学学院会议室进行多次讨论，会议形式为线上线下结合，共提出意见29条；其中采纳24条，部分采纳或不采纳5条。根据征求的意见对标准文本和编制说明进行了修改完善，形成了标准文本及编制说明的预审稿，无重大意见。三、制定标准的原则和依据（一）科学性原则科学性是标准编写的基本要求。在《用于新型冠状病毒疫苗非临床评价hACE2转基因小鼠的规范化构建及使用指南》的编写过程中，标准编制组充分参考了现有科研成果、实验数据，特别借鉴了K18-hACE2KI小鼠等典型模型的构建与应用研究成果，确保标准的技术依据严谨、科学、可靠。（二）规范性原则依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草制定。（三）适用性原则本标准适用于新型冠状病毒疫苗非临床评价使用的hACE2转基因小鼠的构建，以及采用该小鼠进行新型冠状病毒疫苗有效性和安全性评价的操作。四、标准内容确定本标准主要包括：用于新型冠状病毒疫苗非临床评价的hACE2转基因小鼠的背景资料、构建与鉴定的方法和通用要求；疫苗有效性和安全性评价的hACE2转基因小鼠的选择原则与要求；hACE2转基因小鼠构建和非临床评价过程中的重点关注内容。五、国内国际相关标准情况标准广泛参考了国家药品监督管理局、国家卫生健康委、国际生物制品评价机构（如WHO、ICH、FDA等）发布的相关指导文件，并结合我国当前新型冠状病毒疫苗非临床研究的实际情况制定，具有较强的可比性和国际适应性。六、与有关现行法律、法规和强制性标准的关系本标准的制定依据并严格遵循国家相关法律法规和强制性标准要求，在标准内容上与GB14922、GB14925、GB/T35892等基础标准保持一致，具有良好的衔接性和延展性。七、作为推荐性标准的建议本标准为推荐性团体标准，是指导全国开展用于新型冠病毒疫苗非临床评价hACE2转基因小鼠的规范化构建及使用的标准性文件，不具有强制性，可根据调查实际情况决定是否采用。八、标准在编制过程中意见分歧情况本标准在编制过程中无重大意见分歧。征求意见稿形成后，将征求意见汇总在此。九、废止现行有关标准的建议本标准不涉及对现行标准的废止。十、其他应予说明的事项无。参考文献ZhangZ,ZhouL,LiuQ,etal.ThelethalK18-hACE2knock-inmousemodelmimickingtheseverepneumoniaofCOVID-19ispracticableforantiviraldevelopment.EmergMicrobesInfect.2024Dec,13(1):2353302.doi:10.1080/22221751.2024.2353302.Epub2024May26.OladunniFS,ParkJG,PinoPA,etal.LethalityofSARS-CoV-2infectioninK18humanangiotensin-convertingenzyme2transgenicmice.NatCommun.2020Nov30,11(1):6122.doi:10.1038/s41467-020-19891-7.RathnasingheR,StrohmeierS,AmanatF,etal.ComparisonoftransgenicandadenovirushACE2mousemodelsforSARS-CoV-2infection[J].EmergMicrobesInfect,2020,9(1):2433-5.MittalA,ManjunathK,RanjanRK,etal.COVID-19pandemic:Insightsintostructure,function,andhACE2receptorrecognitionbySARS-CoV-2.PLoSPathog.2020Aug21;16(8):e1008762.doi:10.1371/journal.ppat.1008762.朱孟敏,刘玲玲,牛博文,等.人血管紧张素转化酶2(ACE2)BAC转基因小鼠模型的制备及鉴定[J].中国实验动物学报,2022,30(2):230-8.秦川,刘先菊,沈洁,等.血管紧张素转换酶2在SARS-CoV感染中的功能(第1部分)—血管紧张素转换酶2基因剔除小鼠的建立[J].中国比较医学杂志,2005,15(6):327-9.专家意见汇总表征求意见汇总处理表2025年3月1日填写标准名称：用于新型冠状病毒疫苗非临床评价hACE2转基因小鼠的规范化构建及使用指南负责起草单位：四川大学华西医院承办人：陈宇发函件数：8回函件数：8表1专家名单汇总序号提出单位姓名职称表2专家意见汇总序号提出章节专家意见提出专家是否采纳1题目建议修订，转基因小鼠的构建及使用指南（着重对转基因的管理以及构建后的使用，包括安全性、风险评估，减少安评和有效性评价相关内容）。刘家发采纳2正文2.1.启动子至少有三种，如有哪些，给出指导意见。（HFH4,CAG，K18,中检院的小鼠用的启动子等）。2.2.肺脏特异性表达：需要详细写，其他靶器官？给出资料2.3.安全性：增加生物安全性（包含子代的生物安全性），风险评估，逃逸后对环境的影响（基因逃逸与生态干扰：转基因小鼠若意外逃逸，可能与野生种群杂交，导致基因污染；病毒重组风险：转基因动物组织中的潜在病毒可能在移植或环境释放后活化，与其他病毒发生重组，产生新病原体）。2.4.构建后检测。2.4.1.增加产子数量，给出统计意义的范围。2.4.2.增加测序、蛋白检测。2.4.3.必须要包含的鉴定方式：PCR基因型鉴定，其他方法可视情况自行选择。2.4.4.动物感染指标：临床症状，靶器官（不止肺部，应有其他器官，器官分布），病理改变（病程），病毒载量，易感染。2.4.5.动物生理一定是有改变？是否有相关数据，做安评就有缺陷性。刘家发汪晖樊柏林张玲何开勇王旭吴佳杨文祥采纳3引用文献3.增加引用文献：完善如规范的引用。3.1.标准顺序3.2.6.4.1,6.4.2等如果部分应用年代号要全，不会有变化的可以不需要年代号。如GB14952（实验动物环境及设施）。刘家发汪晖樊柏林张玲何开勇王旭吴佳杨文祥采纳4附件4.1.增加如何构建内容，如何构建以及应用，举例说明。4.2.附件编号应按照以下编号，B.1，B.2。4.3.附件B，分为资料性附录，和规范性附录。4.4.补充缺失的血常规、血生化等内容。4.5.4审核补充基本生理指标。刘家发汪晖樊柏林张玲何开勇王旭吴佳杨文祥采纳5其他问题5.1.安全性评价