T-CAV 022-2025 人副流感病毒核酸检测技术指南

CAVTechnicalGuidelinesforHumanParainfluenzaVirusNucleicAcidI 4 5 6前言第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。心、内蒙古自治区疾病预防控制中心、江西省疾病预防控制中心、广州市妇女儿童医疗中心。人副流感病毒是引发婴幼儿及青少年急性呼吸道感染的重要病原体。国内外流行病学监测数据显吸道合胞病毒。目前，人副流感病毒已被列为我国急性呼吸道传染病哨点监测的重要病原体之及疾病防控具有关键作用。实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应因其高灵敏度与特异性，成为人副流1人副流感病毒核酸检测技术指南本文件规定了人副流感病毒核酸检测的操作方法和生物安全WS233病原微生物实验室生物安全通用准则3.13.2HPIV1和HPIV3属于呼吸道病毒属，HPIV2和HPIV4属于腮腺炎病毒属。4缩略语Ct值：荧光信号超过背景阈值所经历的循环数（cyclethresholdReal-timeRT-PCR：实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（real-timefluorescencequantittranscriptionpolymerasechainreactioRNA：核糖核酸（ribonucleicaRNase：核糖核酸酶（ribonucleasRNaseP：核糖核酸酶P（ribonuclease5.1.2痰液标本需经蛋白酶K消化或痰液消化液5.1.3标本采集后24h内检测，需于2℃~8℃保存；若无法在24h内完成检测，应于-60℃~-80℃病毒RNA提取应严格遵循试剂盒或全自动核酸提取仪操作说明执行，若计划在24h内使用，需于2℃~8℃保存；如需长期保存，应于-60℃~-80℃超低温环境保存，避免反复冻融。2合成四种血清型HPIV的特异性引物和探针，探针分别标记不同的荧光报告基团，用于不同血清型5.4反应体系配制HPIV四种血清型单通道核酸检测Real-timeRT-PCR反应体系，包含预混反应缓冲液、逆转录/应体系、反应条件和结果判定则以厂家说明5.6结果判定5.6.1Ct值＜35.0，出现典5.6.2Ct值＞38.0或无数值，扩增5.7质量控制5.7.1设立阴性对照、阳性对照和提取对照监测核酸检测有效性；设立RNaseP对照监测采集的d)RNaseP对照检测结果阳性代表采集的标本质量符合要求。在HPIV核酸检测结果判定为阴性5.7.3定期对标本处理、核酸提取和检测等实验场所进行消毒和效果验证，避免核酸污染。5.8.2检测信息：检测项目、检测人员、检测日期、检测依据、检测方法、试剂名称、试剂批号、试5.8.3实验室信息：检测场所、仪器设备编号、仪器校准日期和使用状态。34），痰液充分消化后，进行病毒RNA提取。痰液消化液的储5FAM-TATCTRCACATCCTTGAVIC-CTCCKATCATTGAGGCTC-BHQ1ATCTCTCATACCTTYAACATCY5-CATGYTCTCTAGCACTexasRed-TATCATCATCTGCCAAATCGGC6[2]姬奕昕,毛乃颖,王焕焕