DB42∕T 2242-2024 《水产品中羧甲基赖氨酸的测定液相色谱法》

DB42/T2242—2024水产品中羧甲基赖氨酸的测定液相色谱法2024-07-14实施2024-07-14实施湖北省市场监督管理局发布I 12规范性引用文件 13术语和定义 14原理 15试剂与材料 16仪器与设备 27样品制备与保存 38测定步骤 39精密度 410检出限与定量限 5附录A(规范性)水产品的试样制备 6附录B(资料性)羧甲基赖氨酸衍生物高效液相色谱图 7本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖北省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所、湖北省市场监督管理局行政许可技术评审中心、湖北农科质标检测科技有限公司。本文件主要起草人：胡西洲、刘骞、叶芸、彭西甜、陈学玲、张仙、彭茂民、吕昂、陈鑫、朱坤淼、刘军、路磊、周有祥、彭立军。对本文件的有关修改意见建议请反馈至湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，电话邮箱：zhibiaosuo204@163.com。水产品中羧甲基赖氨酸的测定液相色谱法仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T30891水产品抽样规范羧甲基赖氨酸Nε-carboxymethyl-L-Iysine(CML)5.1.1三氯甲烷(CHC13,CAS号：67-66-3):分析纯。5.1.2丙酮(CH3COCH3,CAS号：67-64-1):分析纯。5.1.3盐酸(HCl,CAS号：7647-01-0):分析纯。5.1.4氢氧化钠(NaOH,CAS号：1310-73-2):分析纯。5.1.5磷酸二氢钠(NaH2PO4,CAS号：7558-80-7):分析纯。5.1.6硼氢化钠(NaBH4,CAS号：16940-66-2):分析纯。5.1.7邻苯二甲醛(C8H602,CAS号：643-79-8):分析纯。5.1.83-巯基丙酸(C3H602S,CAS号：107-96-0)分析纯。5.1.9甲醇(CH3OH,CAS号：67-56-1):色谱纯。5.1.10乙腈(CH3CN,CAS号：75-05-8):色谱纯。工25.1.11甲酸(HCOOH,CAS号：64-18-6):分析纯。5.1.12硼酸(H3B03,CAS号：11113-50-1):分析纯。5.1.13十水合四硼酸钠(Na2B407·10H20,CAS号：1303-96-4):分析纯。5.1.14水(H20,CAS号：7732-18-5):为符合GB/T6682规定的一级水。5.2溶液配制5.2.16mol/L盐酸溶液：取50mL盐酸(见5.1.3),用水溶解并定容至100mL。mol/L盐酸溶液：取1.67mL盐酸(见5.2.1),用水溶解并定容至100mL。mol/L氢氧化钠溶液：称取2.00g氢氧化钠(见5.1.4),用水溶解并定容至500mL。5.2.40.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8):称取0.12g磷酸二氢钠(见5.1.5),加水溶解并稀释至100mL,用0.1moL/L的氢氧化钠(见5.2.3)调pH至7.8。mol/L硼酸钠缓冲液(pH10.2):称取0.49g硼酸(见5.1.12)和0.19g十水合四硼酸钠(见5.1.13),用水溶解并定容至100mL,用0.1moL/L氢氧化钠溶液(见5.2.3)调pH至10.2。5.2.62mol/L硼氢化钠溶液：称取7.57g硼氢化钠(见5.1.6),用0.1mol/L氢氧化钠溶液(见5.2.3)溶解并定容至100mL。5.2.7衍生化试剂：取80mg邻苯二甲醛(见5.1.7),加入7.0mL0.1mol/L硼酸钠缓冲溶液(见5.2.5)和125μL3-巯基丙酸(见5.1.8)和1mL乙腈(见5.1.10),使其完全溶解，混匀，于4℃下保存，有效期为3个月。5.2.8丙酮-三氯甲烷溶液(3+1,体积比):取300mL丙酮(见5.1.2)和100mL三氯甲烷(见5.1.1),5.2.9水-乙腈-甲醇溶液(10+45+45,体积比):取450mL乙腈(见5.1.10)、450mL甲醇(见5.1.9)和100mL水，混匀。5.2.10甲醇-0.1%甲酸水溶液：取500mL甲醇(见5.1.9),加入0.5mL甲酸(见5.1.11),混匀。羧甲基赖氨酸标准品(CAS号：5746-04-3),纯度≥98%。5.4标准品的配制5.4.1羧甲基赖氨酸标准储备溶液(1000mg/L):准确称取适量羧甲基赖氨酸标准品(精确至0.1mg)至棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀。将溶液转至棕色玻璃容器中期为6个月。5.4.2羧甲基赖氨酸标准中间溶液(1.0mg/L):准确量取羧甲基赖氨酸标准储备溶液0.1mL于100mL棕色容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液(见5.2.2)稀释并定容至100mL,混匀。将溶液转至棕色玻璃容器中，4℃下保存，现配现用。5.5.1固相萃取柱，C18填料，容积6mL,填充物500mg。5.5.2微孔滤膜，有机系，孔径0.2μm。6仪器与设备6.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。6.2分析天平：感量0.01mg和0.01g。36.3离心机：转速不低于5000r/min。6.7烘箱(可控温)。称取2g(精确至0.01g)试样置于50mL离心管中，加入20mL丙酮-三氯甲烷溶液(见5.2.8),充分混匀，以5000r/min离心5min,弃去上清液；再次加入20mL丙酮-三氯甲烷溶液(见5.2.8),重复一在蛋白沉淀中加入1.6mL硼酸钠缓冲液(见5.2.5)、400μL硼氢化钠溶液(见5.2.6),静置8h。将还原后的样品溶液转至安瓿瓶中，加入8mL盐酸溶液(见5.2.2),氮气保护下密封，于110℃烘箱中水解24h。8.1.4净化和水依次通过固相萃取柱，量取5mL水解液，以1.0mL/min的流速通过固相萃取柱(见5.5.1),再用5mL水去除杂质，挤干小柱后用5mL甲醇-0.1%甲酸水溶液(见5.2.10)洗脱，收集洗脱液至刻度离心管中，氮吹至干后用1mL0.1mol/L盐酸溶液(见5.2.2)复溶，待衍生。量取200μL上述溶液，加入500μL硼酸钠缓冲液(见5.2.5),混匀，再加入20μL衍生化试剂(见5.2.7),涡旋2min,取上清液经0.22μm微孔滤膜(5.5.2)过滤后，待测。量取羧甲基赖氨酸标准中间溶液(1.0mg/L)和标准储备溶液(1000mg/L),用盐酸溶液(见5.2.2)48.3.2流动相：A,0.01mol/L的磷酸盐缓冲溶液(见5.2.4);B,水-乙腈-甲醇溶液(见5.2.9),时间/min02200225DB42/T2242—2024本方法检出限为0.015mg/kg,定量限为0.050mg/kg。6(规范性)水产品的试样制备至少取3尾鱼清洗后，去头、骨、内脏，取肌肉、鱼皮等可食部分绞碎混合均匀后备用；试样量为400g,分为两份，其中一份用于检验，另一份作为留样。至少取10尾清洗后，去虾头、虾皮、肠腺，得到整条虾肉分绞碎混合均匀后备用；试样量为400g,分为两份，其中一份用