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152024-02-23发布本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC1I瘤胃微生物体外培养操作规程GB/T6682分析实验室用水规格和4.2试剂配制1准确称量氯化钙13.20g，氯化锰10.00g，氯化钴1.00g，氯化铁8.00g，溶解后定容到100mL。准确称取碳酸氢铵4.00g，碳酸氢钠35.00g，溶解后定容至准确称取磷酸二氢钠5.70g，磷酸二氢钾6.20g，硫酸镁0.60g，溶解后定容到15.3干燥箱：RT+10℃~250℃,控温精度±5℃。5.4ANKOMRFS体外产气测量系统：模块数量18个以上，250mL培养瓶。）：5.6pH计：测量范围0～14，精度±0.1。6.2瘤胃缓冲液配制474mL水中，通入CO2至饱和，并保存在39℃水浴恒温培养箱中，最后再加入49.5mL还原剂溶液，加6.3瘤胃液的制备选择健康、体重接近的3只（头）装有永久性瘤胃瘘管的供试动物，单栏饲养。在晨饲前经瘤胃瘘保温容器中。用搅拌器搅拌2min，混合均匀后经4层纱布过滤，同时通入CO26.4培养装置的准备2每个培养瓶中加入培养底物约0.5g（准确至0.0001g），每种培养底物设3个重复，每6.5培养每个培养瓶中迅速加入20mL瘤胃液。瘤胃培养液通入CO23min，立即拧上瓶盖，放入39.5℃培养箱内培养，培养箱的震荡频率为15次/分，持续培养3A.1瘤胃微生物体外培养的操作瘤胃微生物体外培养的操作包括6个步骤见图A.1，在瘤胃微生物体外培养过程中进行产气量的记录，培养完成后，可以进行pH值测定、氨氮和挥发性脂肪酸的测定和营养物质消失率的测A.2体外培养参数利用产气测量系统每隔60s记录产气模块内的气体压力变化，最后由样品模块内压力减去空白模块内压力得到，计算出0.5h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、8h、10h、12h、16h、18h、24h、28h、32h、36h、40h、4发酵至48h时，打开培养瓶采集培养液样品10mL，立即用pH计测定培养液pH值。pH值的适宜范围取剩余培养残渣烘干后，测定相关营养物质的含量，计算营养物质Y——代表试样中某一营养物质
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