DB15T 2788-2022 向日葵根尖染色体制片和核型分析技术规程

152022-08-30发布本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定牟英男、韩平安、聂利珍、牛素清、常悦、唐宽刚、梁晨、I向日葵根尖染色体制片和核型分析技术规程本文件适用于向日葵根尖染色体玻片标本制备和核3.13.23.3染色体组在有丝分裂中期的表型，包括染色体数目、大小、3.4核型分析karyotypeana4.2冰箱。14.3恒温培养箱。称取0.0145g8-羟基喹啉于蒸馏水中，60℃水浴溶解后定溶至取比重1.19的盐酸82.5mL，用蒸馏水定A液：称取3g碱性品红，溶于100mL70B液：取10mLA液加入90mL5%苯酚水溶液，在37℃条件下温育2h～4h(限14d内使用卡宝品红染液：取B液45mL，加入6mL37%的甲醛，6mL冰乙酸，充分改良卡宝品红染液：取10mL卡宝品红染液，加入45%的冰乙酸90mL5.5酶液2%纤维素酶溶液：称取2g纤维素酶，加蒸馏水，定容至0.5%果胶酶溶液：称取0.5g果胶酶，加蒸馏水，定容至1酶液：2%纤维素酶溶液和0.5%果胶酶溶液等量5.6苏木精染液挑选向日葵籽粒饱满、大小一致的种子，于温水中浸泡1h～2h后，均匀摆放在铺有3层浸润滤纸2当幼根长到1.5cm左右时，于上午9:30～10:00切取根尖，用0.002m从70%乙醇中取出根尖，ddH2O冲洗2～3次后，用无菌滤纸吸干水分，转入离心管中，加入1mol/L上盖玻片，吸去多余染液，用竹签轻轻垂直敲打，并用拇指均力压片，使材料分散在染色体分散较好的载玻片上滴一滴中性树胶封片，贴上标签注明，制成永久制片。6.2去壁低渗法从70%乙醇中取出根尖，ddH2O冲洗生区)，去掉根冠，转移到ddH2O中，常温下取出前低渗后的材料，用无菌滤纸吸干水分，移入酶液中(实验材料与酶液的体积比控制在1:20~小心洗去酶液，转入ddH2O中，常温下后低渗将后低渗的材料用卡诺氏固定液固定10min～13用竹签轻轻垂直敲打，用拇指均力压片，使材料6.3镜检和拍照用光学显微镜观察制片。先在40倍物镜下找到清晰的细胞，再转换至100倍物镜，滴上松柏油进行以体细胞染色体数目为准。统计30个以上染色体分散良好7.2染色体形态确定以体细胞分裂中期的染色体作为基本形态。统计5个以7.3染色体序号7,4核型分析参数利用AdobePhotoshop图片处理软件进行染色体的剪贴、排列和同源染色体的配对，测量染色体长分比(％)表示；相对长度系数为每条染色体长度/单倍体组染色体平均长度；染色体长度比为最长染色4依据染色体相对系数值确定，按照附录B中根据染色体的长度比和臂比主要特征区分核型的对称和不对称程度，分为12种类型，按照附录B中7.6核型表述7.7染色体核型图绘制为同源染色体，然后按染色体序号顺序排列，即为该细胞的染色体核型图。具体步骤见附7.9核型公式将核型的主要特征，如染色体数目、臂比、着丝点位置、随体等以公式表示。5A.1染色体长度测量步骤取5张形态清晰、分散好的染色体标本片图像，打开Photoshop7.0，从文件下拉菜单中打开染色体A.2染色体参数计算将染色体参数的相对长度数据输入到Excel工作表中，注意输入数据时短臂的数据为正，长臂的数6MmtSL127注意：拼接前要将2条染色体的尺寸调整成一样大，以不影响后续的测C.2.2作图时先将长臂负数区域选定，然后右键设置单元格格式，在数字分类选项中选定数值，小数选择堆积柱形图，然后按照自己的需要编辑标题、X、YC.2.4图表完成后还要对图表区进行设置，双击坐标轴弹出“坐标轴格式”对话框，将刻