2025年实验医学PCR技术操作规范性检测答案及解析

2025年实验医学PCR技术操作规范性检测答案及解析一、单项选择题1.PCR反应的特异性主要取决于（）A.循环次数B.引物序列C.Taq酶活性D.模板量2.下列关于PCR引物的说法，错误的是（）A.引物长度一般为15～30bpB.引物自身不应存在互补序列C.引物3′端可以有修饰D.引物应与模板DNA特异性结合3.PCR扩增过程中，延伸的温度一般为（）A.55℃左右B.72℃左右C.94℃左右D.60℃左右4.以下哪种物质不是PCR反应体系的成分（）A.dNTPB.Mg2+C.限制性内切酶D.Taq酶5.PCR产物的鉴定常用的方法是（）A.凝胶电泳B.免疫印迹C.酶联免疫吸附试验D.放射性核素标记6.进行PCR实验时，以下操作正确的是（）A.加样时可以不用更换枪头B.反应管可以不盖紧C.实验结束后及时清理实验台面D.可以在同一区域进行模板准备和PCR扩增7.PCR技术的创始人是（）A.KaryMullisB.WatsonC.CrickD.Pasteur8.巢式PCR与普通PCR相比，其优点是（）A.特异性更高B.灵敏度更低C.操作更复杂D.扩增片段更长9.实时荧光定量PCR技术不能用于（）A.基因表达分析B.病原体检测C.基因突变检测D.蛋白质定量10.在PCR反应中，变性的目的是（）A.使引物与模板结合B.使DNA双链解开C.使Taq酶发挥活性D.使dNTP聚合二、多项选择题1.影响PCR扩增效率的因素有（）A.引物设计B.模板质量C.Taq酶活性D.反应体系组成2.以下属于PCR技术应用领域的有（）A.基因诊断B.基因克隆C.法医鉴定D.疾病预防3.PCR引物设计的原则包括（）A.引物长度适宜B.引物GC含量适中C.避免引物二聚体形成D.引物与模板特异性结合4.实时荧光定量PCR的荧光化学方法有（）A.荧光染料法B.荧光探针法C.双色荧光能量转移杂交探针法D.分子信标法5.PCR实验中可能出现的问题有（）A.非特异性扩增B.扩增效率低C.引物二聚体形成D.假阴性结果6.为了保证PCR实验的准确性和可靠性，需要注意的事项有（）A.严格遵守操作规程B.定期校准仪器设备C.做好实验记录D.对实验结果进行质量控制7.以下关于PCR技术的发展，正确的有（）A.从普通PCR发展到实时荧光定量PCRB.出现了多种特殊用途的PCR技术C.自动化程度不断提高D.应用范围不断扩大8.巢式PCR的特点包括（）A.采用两对引物B.特异性更高C.可提高扩增效率D.可用于检测低拷贝数基因三、填空题1.PCR反应的三个基本步骤是_____、_____、_____。2.实时荧光定量PCR技术中，常用的荧光染料是_____。3.引物的Tm值一般在_____℃左右。4.PCR反应体系中，dNTP的浓度一般为_____mmol/L。5.Taq酶具有_____活性和_____活性。6.为了防止PCR产物的污染，可采用的措施有_____、_____等。7.普通PCR的扩增产物一般通过_____进行鉴定。8.巢式PCR的第二对引物位于第一对引物的_____。四、判断题（√/×）1.PCR技术可以用于扩增任何DNA片段。（）2.引物的长度越长，特异性越高。（）3.Taq酶的最适反应温度为94℃。（）4.PCR反应体系中，Mg2+浓度越高，扩增效果越好。（）5.实时荧光定量PCR技术可以实现对模板DNA的绝对定量。（）6.非特异性扩增是PCR实验中最常见的问题之一。（）7.引物二聚体的形成会影响PCR扩增效率。（）8.为了提高PCR扩增效率，可以随意增加循环次数。（）五、简答题1.简述PCR技术的基本原理。六、案例分析患者，男，35岁，发热、咳嗽、咳痰1周，加重伴呼吸困难2天。体格检查：体温39.5℃，脉搏120次/分，呼吸30次/分，血压120/80mmHg。神志清楚，精神差，口唇发绀，双肺可闻及湿啰音。血常规：白细胞15×109/L，中性粒细胞85%，淋巴细胞10%。胸部X线片示双肺多发斑片状阴影。问题1：该患者最可能的诊断是什么？问题2：为明确诊断，还需要进行哪些检查？试卷答案一、单项选择题（答案）1.答案：B解析：引物与模板的特异性结合决定了PCR反应的特异性。2.答案：C解析：引物3′端不应有修饰，以免影响引物与模板的结合。3.答案：B解析：延伸温度一般为72℃左右，此时Taq酶活性最高。4.答案：C解析：限制性内切酶用于DNA的切割，不是PCR反应体系的成分。5.答案：A解析：凝胶电泳是PCR产物鉴定最常用的方法。6.答案：C解析：加样时应更换枪头，反应管要盖紧，模板准备和PCR扩增应在不同区域进行。7.答案：A解析：PCR技术的创始人是KaryMullis。8.答案：A解析：巢式PCR采用两对引物，特异性更高。9.答案：D解析：实时荧光定量PCR技术主要用于基因表达分析、病原体检测和基因突变检测等，不能用于蛋白质定量。10.答案：B解析：变性的目的是使DNA双链解开，为引物与模板结合提供单链模板。二、多项选择题（答案）1.答案：ABCD解析：引物设计、模板质量、Taq酶活性和反应体系组成都会影响PCR扩增效率。2.答案：ABC解析：PCR技术主要应用于基因诊断、基因克隆和法医鉴定等领域，对疾病预防有一定帮助，但不是主要应用领域。3.答案：ABCD解析：引物设计的原则包括长度适宜、GC含量适中、避免引物二聚体形成和与模板特异性结合等。4.答案：ABCD解析：实时荧光定量PCR的荧光化学方法包括荧光染料法、荧光探针法、双色荧光能量转移杂交探针法和分子信标法等。5.答案：ABCD解析：PCR实验中可能出现非特异性扩增、扩增效率低、引物二聚体形成和假阴性结果等问题。6.答案：ABCD解析：为保证PCR实验的准确性和可靠性，需严格遵守操作规程、定期校准仪器设备、做好实验记录和对实验结果进行质量控制。7.答案：ABCD解析：PCR技术从普通PCR发展到实时荧光定量PCR，出现多种特殊用途的PCR技术，自动化程度不断提高，应用范围也不断扩大。8.答案：ABCD解析：巢式PCR采用两对引物，特异性更高，可提高扩增效率，用于检测低拷贝数基因。三、填空题（答案）1.答案：变性、退火、延伸解析：这是PCR反应的三个基本步骤。2.答案：SYBRGreenI解析：SYBRGreenI是实时荧光定量PCR技术中常用的荧光染料。3.答案：55～65解析：引物的Tm值一般在55～65℃左右。4.答案：0.2～2.0解析：dNTP的浓度一般为0.2～2.0mmol/L。5.答案：5′→3′聚合酶、5′→3′外切酶解析：Taq酶具有这两种活性。6.答案：使用UNG酶、严格分区操作解析：可采用这些措施防止PCR产物污染。7.答案：琼脂糖凝胶电泳解析：普通PCR的扩增产物一般通过琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。8.答案：内侧解析：巢式PCR的第二对引物位于第一对引物的内侧。四、判断题（答案）1.答案：×解析：PCR技术有一定的适用范围，并非能扩增任何DNA片段。2.答案：×解析：引物长度过长可能会降低特异性。3.答案：×解析：Taq酶的最适反应温度为72℃左右。4.答案：×解析：Mg2+浓度过高可能会影响扩增效果。5.答案：√解析：实时荧光定量PCR技术可以实现对模板DNA的绝对定量。6.答案：√解析：非特异性扩增是PCR实验中常见问题。7.答案：√解析：引物二聚体形成会影响扩增效率。8.答案：×解析：循环次数过多可能会导致非特异性扩增增加。五、简答题（答案）1.答：PCR技术的基本原理是在体外模拟体内DNA复制的过程，通过高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤的循环，使目的DNA片段得到大量扩增。在变性步骤，双链DNA在高温下解链成为单链；在退火步骤，引物与单链DNA模板特异性结合；在延伸步骤，Taq酶以引物为起点，以dNTP为原料，按照碱基互补