DB32-T 5193-2025 全血血清中全氟辛酸的测定液相色谱串联质谱法

江苏省地方标准DB32/T5193—2025全血血清中全氟辛酸的测定液相色谱-串联质谱法Determinationofperfluorooctanoicacidinwholebloodandserum—Liquidchromatography-tandemmassspectrometry2025-09-10发布2025-10-10实施江苏省市场监督管理局发布Ⅰ前言 Ⅲ 2规范性引用文件 3术语和定义 4原理 5试剂和材料 6仪器和设备 8分析步骤 9方法的定量限和回收率 Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省卫生健康委员会提出并组织实施。本文件由江苏省卫生健康标准化技术委员会归口。本文件起草单位：南京医科大学、生态环境部南京环境科学研究所、苏州市疾病预防控制中心。1全血/血清中全氟辛酸的测定液相色谱-串联质谱法本文件描述了全血/血清中全氟辛酸（PFOA）的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于人、啮齿类动物（如大鼠、小鼠等）全血/血清样本中全氟辛酸的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法WS/T661静脉血液标本采集指南3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理全血/血清样本经含甲酸的乙腈溶液、正己烷和二氯甲烷萃取净化后，有机相氮吹至近干，复溶后上机测定；采用液相色谱分离，质谱检测器检测，根据保留时间、特征离子丰度比定性，采用同位素内标法定量分析。5试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为色谱纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。5.1试剂3OH5.1.7标准物质：全氟辛酸（PFOA，C溶液。5.1.8同位素内标物质：全氟辛酸同位素内标（13C4-PFOA，CAS号960315-48-4）质量浓度为2mg/L。25.2溶液配制5.2.1甲酸-乙腈溶液移取2mL甲酸用乙腈定容至100mL，混匀，配制成2%甲酸-乙腈溶液。5.2.3乙腈-乙酸铵溶液根据需要取适量乙腈和乙酸铵水溶液，按体积比1∶1进行混匀。使用前恢复至室温并摇匀。移取适量PFOA标准储备溶液，用甲醇稀释配制成质量浓度为0.1mg/L的标准中间溶液1。临用现配。移取适量PFOA标准储备溶液，用甲醇稀释配制成质量浓度为0.01mg/L的标准中间溶液2。临用现配。5.3材料5.3.3进样瓶：2mL，聚丙烯材质。6仪器和设备6.1电子天平：分度值不大于0.01mg。6.2涡旋振荡器。6.3氮吹浓缩装置。6.4高速离心机：转速可达12000r/min。6.5超声波清洗仪。6.6低温冰箱：温度可达-20℃。6.7液相色谱-串联质谱仪：液相色谱具备梯度洗脱功能，三重四极杆质谱仪配有电喷雾离子源，具备多反应监测功能。6.8一般实验室常用仪器和设备。37.1样品采集和保存全血/血清样品按照WS/T661的规定进行获取，样品如无法及时检测，全血样品应于2℃~8℃冰箱保存，周期不超过7d；血清样本应于-20℃冰箱中冷冻保存，保存周期不超过3个月。7.2试样的制备甲酸-乙腈溶液涡旋混匀，超声5min，加入1mL正己烷和1mL二氯甲烷，涡旋萃取1min，4000r/min转速离心5min，转移上层全部有机相至新的离心管中；重复上述操作，将两次上层有机相混合。将收集的萃取液在40℃水浴温度下氮吹至近干，用200μL乙腈-乙酸铵溶液复溶，混匀后将溶液转移至2mL离心管中，12000r/min离心5min，取上清，待液相色谱串联质谱仪测定。取200μL血清于15mL离心管中，加入20μL内标工作溶液，涡旋混匀；加入1mL甲酸-乙腈溶液涡移上层全部有机相至新的离心管中；重复上述操作，将两次上层有机相混合。将收集的萃取液在40℃水浴温度下氮吹至近干，用200μL乙腈-乙酸铵溶液复溶，混匀后将溶液转移至2mL离心管中，12000r/min离心5min，取上清，待液相色谱串联质谱仪测定。8分析步骤8.1仪器参考条件8.1.2流动相：流动相A为乙腈；流动相B为乙酸铵水溶液。8.1.6离子源模式：ESI负离子模式；气帘气压力35.0psi；喷雾电压-4500V；雾化温度550℃；雾化气8.1.7梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序时间/min流动相A/%流动相B/%4表1梯度洗脱程序（续）时间/min流动相A/%流动相B/%8.1.8全氟辛酸及其同位素内标质谱参考条件见表2。表2全氟辛酸及其同位素内标质谱参考条件组分母离子m/≈去簇电压/V子离子m/≈碰撞能量/eV全氟辛酸413.0-48-16-25全氟辛酸内标417.1-70372.0-208.2标准曲线绘制移取适量PFOA标准中间溶液1和标准中间溶液2于2mL进样瓶中，并分别加入10μL同位素内标物质，用乙腈-乙酸铵溶液稀释制得系列标准溶液（现配现用）。各溶液全氟辛酸的质量浓度依次为0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L，内标物质量浓度均为20.0μg/L。将系列标准溶液按高效液相色谱和质谱参考条件进行测定，以全氟辛酸质量浓度(μg/L）为横坐标、全氟辛酸峰面积与其对应的内标峰面积比值为纵坐标，建立标准曲线线性回归方程。全氟辛酸及其内标溶液的多反应监测色谱图见图1和图2。图1全氟辛酸溶液的多反应监测色谱图58.3试样测定-PF0A2.0×1055.0×105图2全氟辛酸标准溶液的多反应监测色谱图按本方法仪器条件测定试样溶液，试样色谱峰的保留时间与对应标准色谱峰的相对误差应控制在±5%范围内。在扣除背景的质谱图中，所有特征离子均被检出，且试样定性离子丰度/定量离子丰度的比值与对应标准物质中定性离子丰度/定量离子丰度的比值满足表3规定的要求，则可判定试样含全氟辛酸。表3相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%≤10>10~20>20~50>50最大允许偏差/%±50±30±25±20记录目标化合物定量离子与内标化合物色谱峰的峰面积，采用内标法进行定量分析。试样溶液中被测物的响应值应位于标准曲线的线性范围内，超出范围的试样需稀释后重新测定。8.4空白试验除不加试样外，均按照与试样相同的制备和分析步骤进行测定。8.5结果计算全血/血清中全氟辛酸含量按公式（1）计算，计算结果需扣除空白值。…………（1）式中：ρ——样品中PFOA的质量浓度，单位为微克每升(μg/L1——进样质量浓度，单位为微克每升(μg/LV1——样品的定容体积，单位为微升(μLV——取样体积，单位为微升(μL）。69方法的定量限和回收率9.1定量限全血取样量为500μL，定容体积为200μL时，全氟辛酸的定量限为0.5μg/L。血清取样量为200μL，定容体积为200μL时，全氟辛酸的定量限为0.5μg/L。9.2回收率血清中全氟辛酸的添加质量浓度为1.0μg/L时，回收率