医院培训课件：《三分类血细胞分析仪的原理和应用》

三分类血细胞分析仪的原理和应用

（一）检测原理根据血细胞非传导性的性质，以对电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时，引起的电阻变化，进行检测为基础，来进行血细胞计数和体积测定，这种方法被称为库尔特原理。

（一）检测原理根据血细胞非传导性的性质，以对电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时，引起的电阻变化，进行检测为基础，来进行血细胞计数和体积测定，这种方法被称为库尔特原理。（二）细胞计数电阻抗原理

图1细胞计数电阻抗原理

在等渗电解质溶液（稀释液）中，有一个用于细胞计数的小孔管，其内侧充满了稀释液，

并有一个内电极，其外侧细胞悬液（稀释液）中有一个外电极，小孔两侧的电极之间有稳定

的电流。细胞为相对不良导体，其导电性质比稀释液低，当有一个细胞通过小孔时，于瞬间

引起了电压变化而出现一个脉冲信号。脉冲的数量与细胞的数量成正比，脉冲的高度与细胞

的体积成正比。脉冲信号经放大、阈值调节、甄别、整形后，送入计数系统进行处理，得出

被测细胞的数量。

1.放大：细胞通过小孔时所产生的脉冲传导微弱，难以直接触发计数电路，必须经电子

放大器把信号放大。

2.阈值调节：在一定范围内调节参考电平大小，使计数结果更加符合实际。

3.甄别：各种微粒通过微孔时均可产生讯号、讯号电平（脉冲幅度）与微粒子大小成正

比，所谓甄别就是根据阈值调节器提供的参考电平，把低于参考电平的假讯号去掉，以提高

准确性。

4.整形：经放大和甄别的波形不一致，须经过整形器调整为形状一致标准的平顶波后才

能触发电路，送入计数系统，得出计数结果。

5.电阻抗法白细胞检测原理：根据电阻抗的原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的

脉冲大小有明显的差异，而不同类型的白细胞（如淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞）经

溶血剂作用后有明显的差异，根据脉冲的大小，即可人为地将血液中的白细胞分成几群（2

分群、3分群）。

⑴直方图与脉冲信号的关系（图2）

图2直方图与脉冲信号的关系

直方图的产生：直方图是由测量通过感应区的每个细胞脉冲累积得到的，是反映细胞大小异质性的资料。如图所示左图是示波器显示所分析细胞的脉冲大小，右图是相应的体积分布直方图。图3白细胞体积分布直方图⑵白细胞体积分布直方图（图3）

将白细胞体积从30～450fl分为256个通道，每个通道为1.64fl第一群：（小细胞群，35～90fl）是淋巴细胞。第二群：（90～160fl）是单个核细胞区，也称为中间细胞，单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、白血病细胞、异型淋巴细胞、浆细胞等。第三群：（160fl以上）大细胞区，中性粒细胞。6.电阻抗法红细胞测试原理红细胞计数和红细胞比容测定：红细胞通过小孔时，形成相应大小的脉冲，脉冲的多少，即红细胞的数目，脉冲的高度代表单个细胞的体积。脉冲高度叠加，经换算即可得红细胞的比积。7.血红蛋白测定原理：被稀释的血液加入溶血剂后，红细胞溶解，释放血红蛋白，后者与溶血剂中的有关成分相结合，形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特定波长（一般在530～550nm）下比色，吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成正比，仪器便可显示其浓度。8.电阻抗法血小板测定原理

⑴血小板随红细胞一起在一个系统中进行检测，根据不同的阈值，计算机分别给出血小板与红细胞数目（图4）。

图4电阻抗法血小板测定原理Inserttexthere⑵血小板分别储存于64个通道内，直方图范围为：2～20fl之间不同仪器的血小板直方图范围不一。MPV就是此平整曲线所含的群体算术平均体积，MPV也就是血小板体积分布直方图的产物（图5）。

图5电阻抗法血小板体积分布直方图（三）血细胞分析的具体流程（图6）

图6血细胞分析的具体流程二、血细胞分析仪的临床应用细胞直方图：血液分析仪在计数细胞数量的同时，还提供细胞体积分布图形，横坐标为血细胞体积大小，纵坐标为不同体积细胞的相对频率，这些用以表示细胞群体分布情况的曲线图形称细胞直方图。（一）红细胞直方图的临床应用1.正常红细胞直方图：仪器在35-250fl的范围内分析红细胞。红细胞体积分布直方图的显示范围为25-250fl。正常红细胞主要分布在50-150fl范围内，从红细胞直方图上看好似两侧对称正态分布曲线（图7）。

图7正常红细胞直方图

2.缺铁性贫血的直方图：曲线峰左移，峰底变宽，显示小细胞不均一性（图8）。MCV：66.2fl，RDW：23.9%。

图8缺铁性贫血的直方图3.轻型地中海贫血的直方图：曲线峰左移，峰底变窄，显示小细胞均一性（图9）。MCV：71.9fl，RDW：13.3%。

图9轻型地中海贫血的直方图

4.铁粒幼细胞性贫血的直方图：曲线峰左移，可呈“双峰”形，峰底明显变宽。缺铁性贫血经铁剂治疗有效，在三周左右时也可出现类似的“双峰”状图形，但峰底更宽MCV：73.6fl，RDW：22.8%（图10）。图10铁粒幼细胞性贫血的直方图5.巨幼红细胞贫血的直方图：治疗前的直方图曲线峰变低、右移峰底明显变宽，显示明显的大细胞不均一性，是叶酸或维生素B12缺乏引起巨幼细胞性贫血的重要直方图特征（图11）。经叶酸或B12治疗后，正常红细胞群逐步释放进入外周血，而病理性红细胞并未完全消亡，检测的红细胞直方图可呈“双峰”形，说明治疗有效。MCV：131.2fl，RDW：24.2%。图11巨幼红细胞贫血的直方图6.急性失血性贫血的直方图：直方图的曲线峰变低，其它特点与正常红细胞直方图一致（图12）。MCV：91.3fl，RDW：13.0%。

图12急性失血性贫血的直方图7.RDW的临床应用⑴用于缺铁性贫血和轻型地中海贫血的鉴别诊断：由于Hb合成障碍，两者均可表现为小细胞低色素性贫血，但前者RDW增高，后者大多数（88%）病例RDW正常。⑵用于缺铁性贫血的早期诊断和疗效观察：绝大多数（96%）IDA时RDW均增高，MCV尚处于正常时，DW增高是缺铁性贫血的早期诊断的重要指标，当MCV减低时，RDW增高更明显。给予铁剂治疗有效时，DW先增高，随着正常红细胞的增多和小红细胞的减少，RDW逐渐降至参考范围。⑶用于贫血的形态学分类，见表1。表1RDW用于贫血的形态学分类贫血的MCV/RDW分类法贫血类型MCV/RDW特征常见原因或疾病小细胞均一性MCV减少，RDW正常轻型珠蛋白生成障碍性贫血某些继发性贫血等小细胞不均一性MCV减少，RDW增高缺铁性贫血、β-珠蛋白生成障碍性贫血、HbH病等大细胞均一性MCV增大，RDW正常MDS、部分再障、部分肝病性贫血、某些肾病性贫血等大细胞不均一性MCV、RDW均增高巨幼细胞性贫血、某些肝病性贫血等

（二）血小板直方图的临床应用1.正常血小板直方图：血细胞分析仪通常在2~30fl范围，分析血小板，正常血小板主要集中在2～20fl范围内，一般在25~30fl之间的某一点与横坐标重合，直方图是一条呈对数正态分布的光滑曲线（图13）。图13正常血小板直方图

2.大血小板直方图：曲线峰右侧右移，在大于30fl的某一点与横坐标重合，MPV明显增高见图14。图14大血小板直方图⑴如果血小板数减低，可见于ITP及体外循环时。⑵如果血小板数升高，见于脾切除术后。⑶如果血小板数正常，可见于慢性髓性白血病、骨髓纤维化等。

3.小血小板直方图：曲线峰右侧左移，在小于20fl的某一点与横坐标重合，MPV值明显减低（图15）。图15小血小板直方图⑴如果血小板数减低，可见于AIDS病毒感染和脾亢等。⑵如果血小板数正常，可见于慢性再障。⑶如果血小板数升高，可见于反应性血小板增多症。

4.聚集的血小板直方图：曲线峰变低，如果以<20个的血小板聚集为主，曲线峰右侧抬高呈拖尾状，不与横坐标重合；如果以>20个的血小板聚集为主，则曲线峰变低、变平，右侧抬高不明显。此时在白细胞直方图的35fl处有一个小峰。见于标本采集不当或EDTA依赖性血小板聚集等（图16）。

图16聚集的血小板直方图

5.小红细胞干扰的血小板直方图：在曲线峰的右侧抬起并上扬，不与横坐标重合。可见于IDA或发生溶血的标本（图17）。图17小红细胞干扰的血小板直方图（三）白细胞直方图的临床应用1.正常白细胞直方图：血细胞分析仪通常在35~450fl的范围内分析白细胞。根据正常白细胞在溶血剂作用后，体积的大小，在直方图上从左至右可确认其相应的三个细胞群（图18）。图18正常白细胞直方图2.中性粒细胞比例增高或淋巴细胞比例减低（图19）：粒细胞峰明显变大，淋巴细胞峰明显变小。在严重的细菌感染时，如果中性粒细胞发生中毒性改变，粒细胞峰可向左移动或向右延伸。图19中性粒细胞比例增高或淋巴细胞比例减低4.中性粒细胞比例减低或淋巴细胞比例增高（图20）：白细胞直方图表现为粒细胞峰明显变小，淋巴细胞峰明显变大（图20）。图20中性粒细胞比例减低或淋巴细胞比例增高5.单核细胞比例增高：在单个核细胞区出现一个明显的峰，其大小与单核细胞比例增高的程度有关。值得注意的是，仪器显示的“MO”或“MID”增高，仅表示可能是单核细胞增高，也可能是嗜酸性粒细胞或幼稚细胞等，因此，必须涂片染色后经显微镜确认图21。图21单核细胞比例增高6.嗜酸性粒细胞比例增高（图22）：在单个核细胞区出现一个明显的峰，其大小也与嗜酸性粒细胞增高的程度有关。注意事项与单核细胞比例增高相同。图22嗜酸性粒细胞比例增高7.急性淋巴细胞白血病（图23）：白细胞直方图表现为淋巴细胞峰向单个核细胞区扩展变宽，其程度与原始及幼稚淋巴细胞的比例高低有关。图23急性淋巴细胞白血病8.急性非淋巴细胞性白血病：白细胞直方图常以单个核细胞峰增高为主，并向淋巴细胞区和粒细胞区扩展。其异常峰的高低及扩展的程度与原始及幼稚细胞的比例高低有关图24。图24急性非淋巴细胞性白血病9.慢性淋巴细胞白血病（图25）：白细胞直方图与正常淋巴细胞比例增高时相似，但淋巴细胞峰底略宽。图25慢性淋巴细胞白血病

10.慢性粒细胞白血病：白细胞直方图表现为多区异常，为形状单一而分布广泛的图形，淋巴细胞峰可有可无，随淋巴细胞所占的比例大小而异（图26）。图26慢性粒细胞白血病三、各种干扰因素引起的白细胞直方图变化（一）白细胞计数计数时先加入溶血剂，使红细胞破坏，保留的“膜包核”状的白细胞进行计数。某些贫血的