医院培训课件：《乙型肝炎实验室检测及质量控制》

乙型肝炎实验室检测及质量控制

主要内容乙肝血清学标志物检测2015年工作要求抗-HBcIgMELISA检测注意事项报告人：向焱2■HBsAg与抗-HBs

HBsAg

：最早出现的血清学标志之一，是HBV感染的基本标志

HBsAg阳性见于：

乙肝的潜伏期、急性期；慢性乙肝；病毒携带；

与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌

抗-HBs：特异性中和抗体、保护性抗体

抗-HBs阳性可见于：

乙型肝炎恢复期，自身产生了免疫力注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)后乙肝血清学标志物——抗原抗体系统（1）■

HBeAg

与抗-HBe

HBeAg

：与HBsAg平行出现，较HBsAg消失早

HBeAg

阳性：

体内HBV复制、传染性强的标志

急性乙型肝炎的辅助诊断判断预后的指标：HBeAg转阴,表示HBV复制减少或终止,预后好若HBeAg持续阳性，则预后不良，易转为慢性

抗-HBe：

HBeAg消失后出现表示HBV在体内复制减少或终止，传染性减弱或消失无症状HBV携带者及非活动期慢性肝炎患者乙肝血清学标志物检测——抗原抗体系统（2）■HBcAg与抗-HBc

HBcAg：Dane颗粒经去垢剂处理后释放，不能从血清中直接检出

抗-HBc

：非中和抗体、分IgM和IgG

主要见于慢性感染和既往感染抗-HBcIgG

在抗-HBcIgM下降及消失后出现，可伴随

感染者终生存在乙肝血清学标志物——抗原抗体系统（3）抗-HBcIgM临床检测意义通常在乙肝病毒感染出现症状时即可检出，一般持续约6个月，提示HBV复制早期感染指标——重要的诊断价值急性感染的重要指标，急性乙肝患者的抗-HBcIgM滴度高，超过95%阳性慢性活动性肝炎的重要标志

慢性乙肝复发患者的抗-HBcIgM滴度低，约70%以上检测不出，约7%能明确检出

慢性HBV携带者抗-HBcIgM的检出率极低（低于1%）

对急性乙肝诊断而言，抗-HBcIgM检测可排除绝大多数以上的慢性乙肝患者和健康携带者。症状HBeAganti-HBeanti-HBc-IgGanti-HBc-IgManti-HBsHBsAg0481216202428323652100急性乙肝感染血清指标的变化过程暴露后时间（周）滴度IgManti-HBcanti-HBc-IgGHBsAg急性(6月)HBeAg慢性(年)Anti-HBe0481216202428323652Years暴露后时间（周）滴度急性乙肝感染慢性化血清指标的变化的特点乙型肝炎病毒感染血清学标志物组合模式（1）模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc临床意义1+-+-+急性肝炎，慢性活动期，有传染性2+--++恢复期，弱传染性3---++恢复期，弱传染性4+---+急性肝炎，慢性HBsAg携带5----+急性肝炎窗口期，既往感染过6-+-++康复期7-+--+既往感染过，有免疫力8-+---康复期，主动被动免疫后9-----未感染过

九种常见模式

乙型肝炎病毒感染血清学标志物检出模式（2）模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc临床意义10+----急性早期，慢性HBsAg携带11+-+--早期感染，强传染性12+--+-恢复期，慢性HBsAg携带13+-+++急性感染，趋于恢复，慢性HBsAg携带14++---不同亚型二次感染或亚临床型感染15+++-+不同亚型感染，感染早期16++-++感染早期17++--+感染早期18--+--非典型性急性感染19--+-+非典型性急性感染20-++--非典型性感染21-++-+非典型性感染22--+++急性感染中期23---+-感染恢复期24-+-+-感染恢复期

十五种少见模式乙型肝炎病毒感染血清学标志物检出模式（3）模式HBsAgAnti-HBsHBeAgAnti-HBeAnti-HBc临床意义25--++-可能是错误的组合模式26-+++-可能是错误的组合模式27-++++可能是错误的组合模式28+-++-可能是错误的组合模式29+++++可能是错误的组合模式30+++--可能是错误的组合模式31++-+-可能是错误的组合模式32++++-可能是错误的组合模式

八种罕见模式化学发光技术缺点需要硬件设备成本昂贵优点敏感性高特异性强操作简便优点快速简便，成本低敏感血清标本用量少缺点精密度差难以自动化易出现交叉反应酶标技术抗-HBcIgM检测技术比对美国进口设备Abotti2000(全自动免疫分析仪）不同抗-HBcIgM检测试剂结果比较2014年上送国家实验室样本中不同试剂厂家结果比较（未考虑当地ELISA技术人员因素，仅作参考）雅培复核万泰

科华

新创

进口试剂

其他厂家阳性阴性

阳性阴性

阳性阴性

阳性阴性

阳性阴性阳性725121125750990210阴性325762263849030201一致率70%

39%

60%

97%

52%

注：进口试剂是雅培和罗氏试剂。数据源自国家CDC病毒病所肝炎室国产酶标试剂检测存在问题■

灵敏度高，假阳性率偏高；检测可靠性差。■

Anti-HBcIgM阴性的病人，检测准确，不是急性乙肝患者，网络直报“慢性肝炎”。■

Anti-HBcIgM

阳性的病人，不一定是急性乙肝病例，诊断要慎重，还需要开展随访，结合其他临床资料来鉴别。主要内容乙肝血清学标志物检测2015年工作要求抗-HBcIgMELISA检测注意事项16乙肝监测实验室检测与质量控制流程图各级医疗机构及疾控机构的职责及分工（1）各级医疗机构：

●对未能明确诊断为慢性乙肝的病例开展抗-HBcIgM1:1000检测。●每例病例采集至少5ml血标本，分离保留总血清量不少于2ml。血清管上应标明病例姓名及县名,同时填写“标本采样、检测登记表”（表1）的相应内容及记录检测结果。●阳性标本及阴性标本分盒冻存，阴性标本至少保留半年，供疾控中心实验室抽检；阳性标本全部送疾控机构复核。

标本送检：每季度一次，2015年的标本在2016年1月5日早上送县cdc“采样、检测登记表”复印件（包括纸质版及电子版），同时预约和通知下季度的送检时间。表1抗-HBcIgM1:1000标本采样、检测登记表

________­州（市）­­­______县（区）_______乡（镇）试剂生产厂家：

血标本编号报告卡编号姓名发病日期性别送检日期检测日期检测结果国标码-年-序号

注：1.“报告卡编号”为NNDRS中自动生成的病例编号（18位）；

2.“血标本编号”为国标码+年+序号，如“53010300+2015+0001”3.“检测结果”在相应位置填写：1=阳性；2=阴性；3=未检测。各级医疗机构及疾控机构的职责及分工（2）

县级疾控机构：●每季度对医疗机构保留的样本进行复核。检测抗-HBcIgM1:1000结果为阴性的标本抽查不少于5份进行复核；检测抗-HBcIgM1:1000结果为阳性的标本，全部复核；在收到血清标本后10日内完成抗-HBcIgM1:1000检测工作，并将复核检测结果反馈至血标本抽检医院。同时汇总辖区内各医疗机构“采样、检测登记表”。●每份阳性标本分装成A、B两管保存，抽检每份阴性标本保存一管，每管不少于0.8ml；并于次季度首月（4月、7月、10月、次年1月）10日前将上季度A、B两管阳性血清标本及抽检的阴性标本、“采样、检测登记表”复印件（包括纸质版及电子版）上送至州（市）级疾控机构。各级医疗机构及疾控机构的职责及分工（3）

州（市）级疾控机构：●每季度对县级疾控机构上送的全部标本进行复核。在收到标本后10日内完成复核并反馈至县级疾控机构，并以州（市）为单位汇总各县（市、区）级“采样、检测登记表”，并于7月及次年1月25日前，将上半年（1～6月）及下半年（7～12月）全部阳性标本及不易判定结果的所有临界值标本B管（标本量不少于0.8ml）、“采样、检测登记表”复印件（包括电子版及纸质版），上送省级疾控机构进行抽检复核。

各级医疗机构及疾控机构的职责及分工（4）

省级疾控机构：每半年对州（市）级疾控机构检测结果进行抽检复核。省级疾控机构在收到标本后抽检20%的样本量（包括所有临界值标本），1个月内完成复核并反馈至州（市）级疾控机构。工作指标疾控机构以州（市）为单位，每年完成以下实验室相关工作指标标本上送率≥90%；上送标本合格率≥95%；标本检测率100%（实验室检测标本份数／收到标本份数×100%）；检测结果一致率≥95%质量控制监测地区各级医疗机构根据本单位检验科固有流程进行。县（市、区）级疾控机构每季度对辖区内医疗机构开展抗-HBcIgM（1:1000）检测项目的质量控制及技术指导。州（市）级疾控机构每季度对县（市、区）级疾控机构开展抗-HBcIgM1:1000检测项目的质量控制及技术指导。省级疾控机构每半年对州（市）级疾控机构开展抗-HBcIgM1:1000检测项目的质量控制及技术指导。血清标本采集、上送操作细则（1）血清标本的采集、分离和保存应避免溶血及霉变采集肘部静脉血5ml血液标本室温下静置超过30分钟后离心分离，如血清量不足2ml

，2000～2500转/分钟、10～15分钟离心，收集血清。采集的血液标本应当天进行血清分离。血清标本用2ml带外螺旋的标本冻存管保存。医疗机构血清保存不少于2ml，且阴、阳性标本须分盒保存。县级疾控机构复核后，阳性标本分装A、B两管，每管血清量不少于0.8ml，A管血清用于州（市）级疾控机构进行抗-HBcIgM1:1000复核，B管用于省级复核。于－20℃以下冷冻保存。合格的血清标本：不溶血、量够、标识清楚血清标本采集、上送操作细则（2）血清管标识

每管血清标本均应标识病例姓名及县名。血清管管盖部分应保持清洁，不能做任何标识。标本信息填写填写“标本采样、检测登记表”（见附表）的相应内容，要求血清管标识与登记表内容一一对应。血清标本上送血清标本管应放入防渗漏的容器中带冰（2～8℃）运输，上送运输过程中应尽量避免反复冻融，标本的贮存、运输全过程避免霉变。主要内容乙肝血清学标志物检测2015年工作要求抗-HBc

IgMELISA检测注意事项27ELISA法检测结果影响因素分析操作是关键质控是保证28试剂是前提1-特异度1-Specificity0.00.20.40.60.81.00.00.20.40.60.81.0AUC

B0.985

C0.977

A0.905灵度Sensitivity1、人员2、设备3、质控品4、诊断策略提高国产试剂盒准确性策略诊断试剂关于截断（C.O）值确定的策略截断值的确定，应以灵敏度和特异度最高，误诊率和漏诊率最小为理想，但实际工作中这点很难办到，因为提高灵敏度必以降低特异度为代价，降低试验误诊率必然要使漏诊率增大，反之亦然。

检测试剂一般希望尽可能提高灵敏度，减少漏诊，因此C.O值往往偏低，这必然会造成假阳性增多。

在进行流行病学调查时，则应在较高特异度前提下提高灵敏度，希望误诊率和漏诊率均较小，一般把C.O.值定在误诊率等于漏诊率的位置上。国家CDC病毒病所肝炎室经精密统计计算,诊断试剂的临界值调整为：确定：抗-HBcIgMS/CO>3

万泰试剂盒C.O.公式改为：阴性对照平均OD值×

6调整抗-HBcIgMELISA试剂的C.O.值

雅培磁微粒子酶免法+-合计酶标法2.1+7466261372-812791287合计75419052659

符合率=746+1279/2659=76%

若以雅培磁微粒子酶免法检测结果为标准

则灵敏度=746/754=99%；特异度=1279/19051=67%雅培试剂与万泰调整前检测结果比较数据源自国家CDC病毒病所肝炎室

雅培磁微粒子酶免法+-合计酶标法10+687135822-6717701837合计75419052659

符合率=687+1770/2659=92%若以雅培磁微粒子酶免法检测结果为标准