（正式版）DB44∕T 2713-2025 《陆生野生动物样品采集和保存技术规范》

44SpecificationforcollectionandpreservationofterrestrialwildlifesamplesI 2 3 5 5 5 5 5 6 8本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件起草单位：广东省野生动物监测救护中心、广州1陆生野生动物样品采集和保存技术规范GB/T37864—2019生物样本库质量和能力通用GB/Z44314—2024生物技术生物样本保藏动物生物样本保藏要求LY/T2359—2014陆生野生动物疫源疫病监NY/T541—2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T561—2024动物炭疽诊断技术NY/T4302动物疫病诊断实验室档案管理规范SN/T3592实验室化学药品和样品废弃物处WS/T225临床化学检验血液标本的收集与处理学鉴定等而采集的与陆生野生动物相关的粪便、拭子、血4基本要求急性死亡动物，怀疑发生炭疽杆菌等烈性传染病，按NY/T561—2024中5的要求执行。排除炭2若采集死亡动物的病料，宜于动物死亡后2h内采集。无法实现时，夏天不应超过6h,冬天不应超过24h。4.7生物安全防护中9的要求穿戴必须的个人卫生安全防护装备(如戴防护服、手套、护目镜等),严格遵守生物安全操5.1.1操作人员应经过专业培训或从事相关工作，掌握动物保定技巧、采样程序和操作技术方法。5.1.2每次采样操作不宜少于两人。5.1.3操作人员能熟悉所用器材、耗材和试剂的特性和使用。5.1.4保障操作人员安全，对活体陆生野生动物，应按照GB/Z44314—2024中附录B.1实施必要的物5.1.5操作人员宜通过防火、防毒、防爆及其他应急措施培训等，确保在出现意外时能够立即采取有35.3.1根据采集样品的目的，选择适合的工具、器材，以及适于样品保存的容器、试剂和记号笔等。器材与试剂见附录A。5.3.2直接接触样品的采样器材、器械应符合NY/T541的要求，保证无菌；用于核酸提取的样品的器6.1.1应根据动物大小、生理状态、健康状态以及检测目的等信息，确定样品采集方案、采集量，以6.1.2样品采集前，动物宜避免使用抗生素或类固醇类等药物，如不可避免，宜推迟取样或详细记录酸钾水溶液或1‰苯扎溴铵(新洁尔灭)冲洗体表、肛门、生殖道、鼻腔、口腔、外阴部和尿道口等部6.1.4在采集过程中，如不可避免产生污染，宜先取洁净部位再取污染部位。6.1.6样品采集后，将样品置于无菌保存容器(离心管、冻存管、收集管、收集杯、采集杯、采集袋等)内，并标签贴于容器外壁，使用防水标记笔记录样品编号，避免脱落。6.1.7采集的样品应做好备份，满足送检、留存备案等需求。6.1.9样品编号应具有唯一性，在设计样品编号时保持统一性和持续性。可将多种信息用数字化的形6.2.1.1选择适合采集部位大小、长度的拭子，从包装尾部打开，不应触碰拭子头部，可用无菌盐水润湿拭子，将拭子插入待采样部位2cm～3cm后压在粘膜上旋转2～3圈沾取分泌物，直至拭子完6.2.1.2采集肛拭子时，宜去掉过大的粪便(>0.5cm);采集口、咽拭子时，宜避免粘取到黏膜表面杂质或病损表面分泌物。如遇污染，应弃掉污染拭子，取第二根拭子在采样部位用力擦拭。46.2.2.1皮肤样品：宜根据需求，使用手术刀或手术剪采取正常或病变部位的皮肤。采集用于真菌、至轻微出血（疥螨等外寄生虫取样完毕后用碘酒处理取样部位。6.2.2.2毛发、羽毛、皮张、蛇蜕等附属6.2.3.2宜避开炎症、水肿、发绀、给药等部位，消毒采血部位，待动物相对放松后进行穿刺，使用立即注入收集管、抗凝管或血培养瓶，采集过程注意避免污染。在采血部位覆盖纱布或药棉并压迫30采用假阴道、人工按摩或电刺激等方法采集精液。分段射精6.2.7.1采集活体动物胃液样品时，宜用石蜡油润滑消毒后的多孔胃管的前段，沿口腔或鼻孔插入胃胃管外端持续抽吸胃液，抽满后注入容器内，再接管继续抽6.2.7.2采集反刍动物胃内容物样品时，可当食团从食道逆流入口腔时，立即开口拉住舌头，伸入口6.2.8.1封闭性部位的液体病料：应用碘酊或75%的乙醇消毒，使用灭菌注射器或吸管抽取或吸取深6.2.8.3瘘管的液体病料，可在无菌条件下取组织碎6.2.8.4组织或脏器内的液体病料，宜用烫56.2.9.1可用骨钳截取所需骨骼样品，置于无菌容器中。6.2.9.2需要完整的骨骼标本时，应将附着的肌肉和韧带等全部除去，表面撒上食盐，然后包入浸过5%石碳酸溶液的纱布中，装入密闭容器。宜在无菌条件下，使用手术刀或手术剪取适合大小的新鲜组织或内脏组织块。7.1样品采集同时应填写野生动物样品采集信息表。标签和采集信息表上的样品编号需保持一致。7.2样品采集信息表宜包括以下内容(见B.1):样品来源、采集日期及时间、采集地点、样品编号、动物种属、动物个体编号、性别、年龄或生长周期、样品类型、动物体况、保存方式、7.3样品采集信息表应一式两份，一份随样品转移，另一份存档保存。7.4样品采集信息表宜电子信息化，必要时建立生物样本库，以便管理、查阅和追执行。10.1用于细菌检测的样品，放入30%～50%甘油缓冲溶液中，于4℃可保存24h;超过24h时，宜10.2用于寄生虫检验的样品，于4℃可保存24h;超过24h时，宜置于-20℃以下冷冻保存。10.3用于核酸检测的样品，放入核酸保存液中，于4℃可保存48h;超过48h时，宜置于-80℃或液氮中冷冻保存。经过核酸保存液保存的样品，仅用于核酸检测，不应用于其他目的的检测。10.4用于蛋白检测的样品，于-20℃可短期保存；长期保存时，宜置于-80℃冰箱或液氮中。10.5用于细胞培养的样品，放入组织保存液中，于4℃可保存24h～48h,无法长期保存。10.6用于电镜检测的样品，放入2.5%戊二醛固定液中，于4℃保存。10.7用于精液活性检测的样品，宜保存在37℃水浴中转运并及时检测，无法长期保存。10.8其他样品的保存可参考GB/Z44314—2024中附录表D.1部分的相关内容。6A.1.4集精杯：不锈钢内胆或玻璃内胆保温。A.1.6血培养瓶：标准需氧瓶、标准厌氧瓶、树脂需氧瓶、树脂厌氧瓶、儿童树脂瓶、含溶血素厌氧瓶、含溶血素分支杆菌/真菌瓶，在2℃~25℃环境中贮存。A.1.10量杯：量程10mL～200A.1.11移液器：量程100µL～1000A.1.12接种针、接种环。A.1.13酒精灯。A.1.15离心机：半径22.5cm、3000r/min，离心时相对离心力为2260g。KA.1.24无菌棉签、无菌棉球、无菌纱布。A.1.25一次性无菌口罩、一次性无菌N95口罩。A.1.27保温箱、保温瓶、冰袋、干冰桶。7A.1.29护目镜、防护服。A.2.2磷酸盐缓冲生理盐水：0.01mol/LpH9.0磷酸盐-生A.2.3DNA保存液：粪便、尿液A.2.4RNA保存液：市售试剂，4℃保存。A.2.5精液保存液：市售保护剂或自主配方保护剂，以糖类、盐类、抗生素、抗氧化剂及其他保护剂A.2.6转运培养基：市售试剂，4℃保存。A.2.1075%酒精：市售。A.2.11石蜡油：分析纯。A.2.12福尔马林：10%中性福尔马林固定液。A.2.13多聚甲醛：市售试剂，室温保存。A.2.14利多卡因膏剂：复方制剂，每克本品含丙胺卡因25mg，利多卡因25mg。洁尔灭，市售试剂，有效