新余市人民医院干细胞冻存与复苏技术规范考核

新余市人民医院「干细胞冻存与复苏」技术规范考核一、单选题（每题2分，共20题）1.干细胞冻存过程中，常用的冷冻保护剂是？A.甘油B.DMSO（二甲基亚砜）C.乙二醇D.丙二醇2.干细胞悬液在冻存前，需调整的渗透压浓度通常为？A.300mOsm/kgB.400mOsm/kgC.500mOsm/kgD.600mOsm/kg3.干细胞冻存管在液氮中储存时，最佳存放深度为？A.液氮液面以下1-3cmB.液氮液面以下5-10cmC.液氮液面以上1-2cmD.液氮液面正下方4.干细胞复苏过程中，首次解冻应采用？A.快速解冻（37℃水浴）B.缓慢解冻（4℃冰箱）C.液氮直接倾倒解冻D.超声波辅助解冻5.干细胞冻存管在运输过程中，应避免？A.振动B.温度剧烈波动C.静置D.倾倒6.干细胞冻存时，细胞活性损失率应控制在？A.5%以下B.10%以下C.15%以下D.20%以下7.干细胞冻存前，细胞悬液pH值应调整为？A.6.5-7.0B.7.0-7.5C.7.5-8.0D.8.0-8.58.干细胞冻存管在液氮中储存时，应避免接触？A.液氮液面B.储存容器底部C.其他冻存管D.储存容器内壁9.干细胞复苏后，细胞计数应控制在？A.1×10^6-5×10^6/mLB.5×10^6-1×10^7/mLC.1×10^7-5×10^7/mLD.5×10^7-1×10^8/mL10.干细胞冻存过程中，预冷速率应控制在？A.1℃/minB.0.5℃/minC.10℃/minD.20℃/min二、多选题（每题3分，共10题）1.干细胞冻存过程中，需检测的指标包括？A.细胞活力B.渗透压C.pH值D.冷冻保护剂浓度2.干细胞冻存管在液氮中储存时，应避免？A.振动B.温度剧烈波动C.静置D.倾倒3.干细胞复苏过程中，可能导致细胞损伤的因素包括？A.解冻过快B.解冻过慢C.冷冻保护剂浓度过高D.环境温度波动4.干细胞冻存前，需进行的预处理包括？A.细胞计数B.渗透压调整C.pH值调整D.冷冻保护剂添加5.干细胞冻存管在运输过程中，应采取的措施包括？A.使用保温箱B.避免剧烈振动C.快速运输D.避免温度波动6.干细胞冻存过程中，常用的冷冻保护剂包括？A.DMSOB.乙二醇C.甘油D.丙二醇7.干细胞复苏后，需进行的检测包括？A.细胞活力B.细胞计数C.细胞形态学观察D.细胞增殖能力8.干细胞冻存管在液氮中储存时，应避免接触？A.液氮液面B.储存容器底部C.其他冻存管D.储存容器内壁9.干细胞冻存过程中，预冷速率应控制在？A.1℃/minB.0.5℃/minC.10℃/minD.20℃/min10.干细胞冻存前，需调整的指标包括？A.渗透压B.pH值C.细胞浓度D.冷冻保护剂浓度三、判断题（每题2分，共20题）1.干细胞冻存时，冷冻保护剂浓度越高越好。（×）2.干细胞冻存管在液氮中储存时，应避免接触液氮液面。（√）3.干细胞复苏过程中，解冻过快会导致细胞损伤。（√）4.干细胞冻存前，需进行细胞计数和渗透压调整。（√）5.干细胞冻存管在运输过程中，应避免剧烈振动。（√）6.干细胞冻存时，预冷速率越快越好。（×）7.干细胞复苏后，细胞活力应高于冻存前的95%。（×）8.干细胞冻存管在液氮中储存时，应避免接触其他冻存管。（√）9.干细胞冻存过程中，pH值应调整为7.0-7.5。（√）10.干细胞冻存前，需使用DMSO作为冷冻保护剂。（√）四、简答题（每题5分，共5题）1.简述干细胞冻存过程中冷冻保护剂的添加步骤。2.简述干细胞复苏过程中的解冻步骤。3.简述干细胞冻存管在液氮中储存时的注意事项。4.简述干细胞冻存前需进行的预处理。5.简述干细胞复苏后需进行的检测指标。五、论述题（每题10分，共2题）1.结合新余市人民医院干细胞冻存与复苏的实际操作流程，论述如何降低细胞损伤风险。2.结合新余地区医疗资源特点，论述干细胞冻存与复苏技术在新余市人民医院的应用价值。答案与解析一、单选题答案与解析1.B解析：DMSO是常用的冷冻保护剂，能有效降低细胞内冰晶形成，保护细胞膜结构。2.C解析：干细胞悬液渗透压浓度应调整为500mOsm/kg，以避免细胞在冻存过程中因渗透压失衡而损伤。3.A解析：液氮中储存时，冻存管应置于液氮液面以下1-3cm，以避免温度波动对细胞造成损伤。4.A解析：干细胞复苏过程中，首次解冻应采用37℃水浴快速解冻，以减少细胞损伤。5.B解析：运输过程中，温度剧烈波动会导致细胞活性下降，应避免。6.B解析：干细胞冻存时，细胞活性损失率应控制在10%以下，以保证细胞质量。7.A解析：干细胞冻存前，pH值应调整为6.5-7.0，以维持细胞代谢稳定。8.B解析：储存时，冻存管底部应避免接触液氮液面，以防止局部温度过低导致细胞冻伤。9.B解析：干细胞复苏后，细胞计数应控制在5×10^6-1×10^7/mL，以保证细胞接种浓度。10.A解析：预冷速率应控制在1℃/min，以减少细胞内冰晶形成。二、多选题答案与解析1.A,B,C,D解析：干细胞冻存过程中需检测细胞活力、渗透压、pH值和冷冻保护剂浓度，以确保细胞质量。2.A,B,D解析：冻存管应避免振动、温度剧烈波动和倾倒，以减少细胞损伤。3.A,B,C,D解析：解冻过快、过慢、冷冻保护剂浓度过高或环境温度波动都会导致细胞损伤。4.A,B,C,D解析：冻存前需进行细胞计数、渗透压调整、pH值调整和冷冻保护剂添加，以保证冻存效果。5.A,B,D解析：运输时应使用保温箱、避免剧烈振动和温度波动，以减少细胞损伤。6.A,B,C,D解析：DMSO、乙二醇、甘油和丙二醇都是常用的冷冻保护剂。7.A,B,C,D解析：复苏后需检测细胞活力、计数、形态学和增殖能力，以评估细胞质量。8.A,B,C,D解析：冻存管应避免接触液氮液面、底部、其他冻存管和内壁，以减少细胞损伤。9.A,B解析：预冷速率应控制在1℃/min或0.5℃/min，以减少冰晶形成。10.A,B,C,D解析：冻存前需调整渗透压、pH值、细胞浓度和冷冻保护剂浓度，以保证冻存效果。三、判断题答案与解析1.×解析：冷冻保护剂浓度过高会导致细胞毒性，应适量添加。2.√解析：接触液氮液面会导致局部温度过低，增加细胞冻伤风险。3.√解析：解冻过快会导致细胞内冰晶形成，增加细胞损伤。4.√解析：冻存前需进行细胞计数和渗透压调整，以保证细胞质量。5.√解析：剧烈振动会导致细胞内冰晶形成，增加细胞损伤。6.×解析：预冷速率过快会导致细胞内冰晶形成，应缓慢预冷。7.×解析：复苏后细胞活力应高于冻存前的90%，而非95%。8.√解析：接触其他冻存管会导致局部温度波动，增加细胞损伤风险。9.√解析：pH值应调整为7.0-7.5，以维持细胞代谢稳定。10.√解析：DMSO是常用的冷冻保护剂，能有效降低细胞损伤。四、简答题答案与解析1.干细胞冻存过程中冷冻保护剂的添加步骤解析：-先将干细胞悬液与预冷溶液（如PBS）混合，调节渗透压至300-500mOsm/kg；-缓慢加入冷冻保护剂（如DMSO，浓度从5%开始逐步增加至10-15%）；-混匀后分装至冻存管，每管1-2mL；-缓慢预冷至-20℃，再转入液氮中储存。2.干细胞复苏过程中的解冻步骤解析：-将冻存管从液氮中取出，快速置于37℃水浴中解冻（1-2min）；-解冻后加入预温培养基（如含10%FBS的DMEM），终止DMSO作用；-混匀后离心，弃上清，重悬细胞；-细胞计数后即可用于实验或移植。3.干细胞冻存管在液氮中储存时的注意事项解析：-冻存管应置于液氮液面以下1-3cm，避免温度波动；-避免接触液氮液面和底部，以防局部温度过低；-避免接触其他冻存管，减少碰撞损伤；-储存容器应密封，避免液氮挥发。4.干细胞冻存前需进行的预处理解析：-细胞计数，调整细胞浓度至适宜冻存范围；-渗透压调整，加入预冷溶液（如PBS）；-pH值调整，维持在6.5-7.0；-冷冻保护剂添加，逐步提高浓度至10-15%。5.干细胞复苏后需进行的检测指标解析：-细胞活力（台盼蓝染色法）；-细胞计数（血球计数板）；-细胞形态学观察（显微镜）；-细胞增殖能力（MTT法或CCK-8法）。五、论述题答案与解析1.结合新余市人民医院干细胞冻存与复苏的实际操作流程，论述如何降低细胞损伤风险解析：-优化冷冻保护剂配方：根据干细胞类型调整DMSO浓度，避免过高浓度导致的细胞毒性；-控制预冷速率：采用逐步预冷法（0-10℃/min，10℃-20℃/min，20℃-80℃/min），减少冰晶形成；-改进解冻方法：采用37℃水浴快速解冻，解冻后立即加入预温培养基，终止DMSO作用；-规范储存操作：冻存管置于液氮液面以下1-3cm，避免碰撞和温度波动；-加强运输管理：使用保温箱运输，避免剧烈振动和温度波动。2.结合新余地区医疗资源特点，论述干细胞冻存与复苏技术在新余市人民医院的应用价值解析：-提升临床治疗水平：