抚州市人民医院电镜标本制备考核

抚州市人民医院电镜标本制备考核一、选择题（每题2分，共20题）说明：请选择最符合题意的选项。1.电镜样品制备过程中，样品干燥通常采用哪种方法？A.自然风干B.真空冷冻干燥C.烘箱烘烤D.乙醇梯度脱水2.超薄切片最常用的刀片材料是？A.碳化钨B.石英C.陶瓷D.玻璃3.电镜样品固定剂中最常用的是？A.甲醇B.戊二醛C.丙酮D.乙醇4.透射电镜样品厚度要求在多少纳米以下？A.50nmB.100nmC.200nmD.500nm5.脱水过程中常用的过渡液是？A.丙酮B.乙醇C.乙醚D.丙酮和乙醇混合液6.电镜样品包埋常用的树脂是？A.环氧树脂B.腈纶树脂C.聚甲基丙烯酸甲酯D.聚乙烯7.超薄切片机的刀片安装方向通常是？A.顺时针B.逆时针C.水平方向D.垂直方向8.电镜样品染色常用的重金属盐是？A.硫酸铜B.铀酸铋C.高锰酸钾D.硝酸银9.冷冻电镜样品制备中，样品冷冻常用的方法是？A.共聚焦冷冻B.超速冷冻C.慢速冷冻D.热台冷冻10.电镜样品导电性处理通常采用？A.脱水B.碳镀膜C.树脂包埋D.重金属染色二、填空题（每空1分，共10空）说明：请根据题意填写正确答案。1.电镜样品制备过程中，样品固定是为了______和______。2.超薄切片的厚度通常控制在______纳米范围内。3.电镜样品脱水常用的过渡液是______和______。4.电镜样品包埋常用的树脂是______或______。5.电镜样品染色常用的重金属盐包括______和______。6.冷冻电镜样品制备中，样品冷冻常用的方法是______。7.超薄切片机的刀片安装方向通常是______。8.电镜样品导电性处理通常采用______。9.电镜样品固定剂中最常用的是______。10.电镜样品干燥常用的方法是______或______。三、简答题（每题5分，共5题）说明：请简要回答问题。1.简述电镜样品制备的基本步骤。2.解释电镜样品脱水的意义。3.说明电镜样品包埋的作用。4.描述冷冻电镜样品制备的流程。5.分析电镜样品染色原理及其常用试剂。四、论述题（每题10分，共2题）说明：请详细阐述问题。1.结合抚州市人民医院电镜实验室的实际情况，论述电镜样品制备过程中需要注意的关键质量控制点。2.针对抚州市人民医院常见的电镜样品类型（如细胞、组织、微生物等），分别说明其样品制备的注意事项和优化方法。答案与解析一、选择题答案与解析1.B解析：真空冷冻干燥能保持样品的原始结构，适用于电镜样品制备。自然风干易导致样品收缩变形，烘箱烘烤易引起样品化学变化，乙醇梯度脱水主要用于渗透，不适用于干燥。2.A解析：超薄切片刀片常用碳化钨材料，硬度高且锋利，适合切割树脂样品。石英和陶瓷硬度不足，玻璃易碎。3.B解析：戊二醛是常用的交联剂，能固定生物大分子结构，适用于电镜样品固定。甲醇和乙醇主要用于脱水和染色，丙酮毒性较大。4.B解析：透射电镜样品厚度需在100nm以下，才能保证电子束穿透。50nm以下更佳，但操作难度大。200nm以上会因电子散射而影响成像。5.D解析：脱水常用丙酮和乙醇混合液进行梯度脱水，逐步替代样品中的水分，避免结构收缩。6.A解析：环氧树脂是最常用的电镜包埋材料，具有良好的透射性和硬度。腈纶树脂主要用于扫描电镜，聚甲基丙烯酸甲酯较少使用。7.B解析：超薄切片机刀片安装通常逆时针方向，以保持刀刃锋利和切片稳定性。8.B解析：铀酸铋和铅盐是常用的电镜染色剂，铀酸铋主要染色细胞核和蛋白质，铅盐增强样品导电性。9.B解析：超速冷冻能快速冻结样品，减少冰晶形成，适用于冷冻电镜样品制备。共聚焦冷冻和热台冷冻不适用于透射电镜。10.B解析：碳镀膜能提高样品导电性，避免电子束二次散射，适用于非导电样品。二、填空题答案与解析1.保存结构、增强固定解析：样品固定通过化学交联固定生物大分子结构，防止其变形。2.50～100解析：透射电镜样品厚度需在100nm以下，50nm更佳。3.丙酮、乙醇解析：梯度脱水用丙酮和乙醇逐步替代水分，避免收缩。4.环氧树脂、聚丙烯酸甲酯解析：环氧树脂最常用，聚丙烯酸甲酯较少使用。5.铀酸铋、铅盐解析：铀酸铋染色细胞核和蛋白质，铅盐增强导电性。6.超速冷冻解析：超速冷冻能快速冻结样品，减少冰晶损伤。7.逆时针解析：刀片安装方向影响切片效果和稳定性。8.碳镀膜解析：碳膜提高非导电样品的导电性。9.戊二醛解析：戊二醛是常用的交联剂，能固定生物结构。10.自然风干、真空冷冻干燥解析：自然风干简单但易变形，真空冷冻干燥效果好。三、简答题答案与解析1.电镜样品制备的基本步骤答：固定→脱水→包埋→聚合→切片→染色→碳镀膜→观察。解析：固定是第一步，通过化学试剂交联生物结构；脱水用丙酮和乙醇梯度替代水分；包埋用树脂固化样品；切片机切割超薄切片；染色增强结构对比；碳镀膜提高导电性；最后在电镜中观察。2.电镜样品脱水的意义答：脱水是为了去除样品中的水分，避免冰晶形成损伤样品结构，同时为后续包埋和染色做准备。解析：水分会因冷冻形成冰晶，破坏生物大分子排列，脱水能保持样品完整性。3.电镜样品包埋的作用答：包埋是为了固定样品，防止其在切片过程中变形，并提供硬度，方便切片。解析：未包埋的样品在切片时易碎裂，树脂能提供支撑，使样品保持稳定。4.冷冻电镜样品制备的流程答：样品制备→预冷→超速冷冻→冰晶去除→冷冻保护剂渗透→电子束照射。解析：超速冷冻快速冻结样品，减少冰晶损伤，冷冻保护剂进一步减少冰晶形成。5.电镜样品染色原理及其常用试剂答：染色通过重金属盐（如铀酸铋、铅盐）与生物分子结合，增强结构对比度。铀酸铋染色细胞核和蛋白质，铅盐增强导电性。解析：重金属离子能吸收电子，提高暗场信号，使结构更清晰。四、论述题答案与解析1.电镜样品制备的关键质量控制点答：-固定效果：戊二醛浓度和时间需优化，避免过度固定导致结构硬化。-脱水梯度：丙酮和乙醇浓度梯度需合理，防止样品收缩变形。-包埋聚合：树脂聚合温度和时间需精确控制，避免气泡和收缩。-切片质量：刀片锋利度、切片厚度需保证，过厚影响成像。-染色均匀性：染色剂浓度和时间需优化，避免局部过染。解析：抚州市人民医院电镜实验室常用细胞和组织样品，需特别注意固定和脱水的均匀性，避免因操作不当导致样品结构破坏。2.电镜样品制备的注意事项和优化方法答：-细胞样品：-注意固定后渗透，避免细胞膜破裂；-优化脱水梯度，减少收缩；-染色时避免过染，影响细节。-组织样品：-固定前需去除血液，避免铁血污染；-包埋时需防止气泡，影响切片；-染色时需分层染色